D-loop gene sequence and diversity of Leuciscus waleckii Dybowski in Dali Lake and Ganggeng Lake in Inner Mongolia
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摘要:
文章对内蒙古达里湖和岗更湖东北雅罗鱼(Leuciscus waleckii Dybowski)的mtDNA D-loop序列进行扩增，获得了896 bp的同源基因序列，得到的同源基因片段中A、T、C和G碱基的平均含量，达里湖群体为32.0%、32.2%、21.3%和14.5%；岗更湖群体为32.0%、32.2%、21.4%和14.5%；达里湖和岗更湖鱼群D-loop基因CG含量相当，未见明显差异。2个群体内和群体间都存在丰富的序列多态性，两湖群体的D-loop基因896个位点中存在可变位点33个，其余位点较为保守；达里湖30尾鱼D-loop基因含有多态性位点/突变位点21个，11个单倍型；岗更湖30尾鱼D-loop基因含有多态性位点/突变体位点31个，17个单倍型；岗更湖鱼群D-loop基因多样性高于达里湖。遗传距离计算显示，岗更湖和达里湖鱼群之间的平均遗传距离为0.007 0；达里湖鱼群之间的平均遗传距离为0.003 6；岗更湖鱼群之间的平均遗传距离为0.007 4。岗更湖鱼群D-loop基因的平均遗传距离大于达里湖鱼，前者群体D-loop基因进化速度大于后者。
Abstract:We amplified the mtDNA D-loop sequence in two stocks of Leuciscus waleckii Dybowski in Dali Lake and Ganggeng Lake in Inner Mongolia, having obtained 896 bp gene sequences; the average contents of T, C, A and G of homological fragments were 32.0%, 32.2%, 21.3%, 14.5% and 32.0%, 32.2%, 21.4%, 14.5% in Dali Lake stock and Ganggeng Lake stock, respectively, with no significant difference. The inter- and intra-population of the two stocks had high degree of sequence polymorphism. There were 33 variable sites in 896 D-loop gene loci in the two stocks, and the rest sites were more conservative. The D-loop genes of 30 fish in Dali Lake contained 21 polymorphisms/mutations and 11 haplotypes; while those in Ganggeng Lake contained 31 polymorphisms /mutations and 17 haplotypes. The diversity of D-loop gene in Ganggeng Lake stock was higher than that in Dali Lake stock. Genetic distance calculation shows that the average genetic distance between Ganggeng Lake and Dali Lake stocks was 0.007 0 (Dali Lake: 0.003 6, Ganggeng Lake: 0.007 4). The genetic distance of the D-loop gene in Ganggeng Lake stock was greater than that in Dali Lake stock, and the evolution speed of the former was faster than that of the latter.
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Keywords:
- Leuciscus waleckii Dybowski /
- Inner Mongolia /
- D-loop gene /
- diversity /
- genetic distance
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海藻是海洋生物资源中的重要组成部分，其中被人类广为利用的大型海藻主要有红藻门、褐藻门及绿藻门三大类[1]。越来越多的研究报道指出，海藻中含有的多糖具有抗氧化[2]、抗肿瘤[3]、抗病毒[4]、抑菌[5]、降血脂[6]等特性，并且其功效显著、作用直接、天然低毒，已经成为医药和食品领域的研究热点之一。
活性氧(reactive oxygen species，ROS)可衍生出大量的氧自由基，约占动物机体总自由基的95%以上，包括超氧阴离子(O2·ˉ)、羟自由基(OH·ˉ)、过氧化氢(H2O2)等[7]。氧自由基对细胞膜、脂肪组织和蛋白质都会产生影响，从而引起疾病[8]。抗氧化物质可以保护生物体免受自由基攻击，从而预防基因突变与肿瘤的发生。自然界中存在许多天然抗氧化物质，如多酚类、黄酮类、醌类、多糖类等，其中对多糖类的抗氧化研究较多。天然多糖主要包含真菌多糖、植物多糖和动物多糖三大类，其中真菌类多糖和植物类多糖研究较为广泛，绝大多数已进入应用阶段，如黑灵芝多糖、枸杞多糖、茶树菇多糖、黄芪多糖、鱼腥草多糖等[9-13]。
海藻多糖是一类多组分、复杂的混合物，主要包括褐藻糖胶、硫酸多糖、琼胶和卡拉胶等。随着近年来海洋生物活性物质的开发，海藻多糖对自由基的抑制和清除作用已经引起了广泛的关注。研究发现，马尾藻多糖清除OH·ˉ和对抗H2O2溶血的能力随着浓度的增加而升高，且对O2·ˉ具有一定的清除作用[14]。海藻硫酸多糖能显著抑制佛波酯刺激的多形核白细胞(PMN)呼吸爆发，并明显清除PMN呼吸爆发所产生的自由基[15]; 紫菜多糖能有效清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和OH·ˉ，抑制小鼠肝组织的脂质过氧化，对亚铁离子(Fe2+)和H2O2诱导的肝组织过氧化物损伤具有保护作用，能减少线粒体肿胀和红细胞溶血的发生[16]。
不同种类的海藻多糖具有不同的抗氧化能力，主要是由于不同海藻多糖的组分、分子量及分子结构存在明显的差异性[17-20]。针对此点，该研究选取了隶属绿藻、红藻和褐藻门的5种代表性海藻，对不同属种的海藻多糖抗氧化活性、体外抗脂质过氧化作用进行比较研究，试图寻找一种抗氧化能力显著的海藻多糖，以期为海藻多糖的产品开发提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 样品
绿藻门的石莼(Ulva lactuca)，棒叶蕨藻(Caulerpa sertularioides); 褐藻门的匍枝马尾藻(Sargassum polycystum)，南方团扇藻(Padina australis); 红藻门的琼枝(Betaphycus gelatinae)。
以上5种海藻均采自三亚周边海域，并参考台湾生物多样性资源数据库(http://taibif.tw/zh)及王红勇等[21]对海南岛常见的大型底栖海藻的调查结果，通过形态进行分类及鉴定。
1.2 方法
1.2.1 海藻粗多糖的提取
对采集的新鲜海藻进行反复清洗，洗去黏附在海藻上的贝类及沙子，沥去水分，60 ℃烘干，打粉备用。称取每种海藻粉各10 g，加水40~60倍，于80 ℃水浴中提取2次，过滤后合并滤液，浓缩滤液至1/3体积后，加入Sevage试剂[22]除蛋白2次，10 000 g离心10 min，小心吸取上清液，浓缩上清液至1/3体积后，加无水乙醇至终体积分数为75%，醇沉过夜，4 ℃、10 000 g离心10 min，弃上清，沉淀冷冻干燥，得海藻粗多糖样品。所提取的海藻粗多糖分别简写为石莼多糖(UlPS)、棒叶蕨藻多糖(CaPS)、匍枝马尾藻多糖(SaPS)、南方团扇藻多糖(PaPS)和琼枝多糖(BePS)。
1.2.2 海藻粗多糖的总糖含量测定
以葡萄糖为标准品，采用苯酚-硫酸法在490 nm处检测5种海藻粗多糖的总糖含量。通过总糖含量的测定结果，将5种海藻粗多糖样品的多糖浓度进行相应调整，以此确定不同抗氧化指标中所使用的粗多糖样品中总糖含量一致。
1.2.3 抗氧化活性研究
1) 对O2·ˉ的清除作用。清除O2·ˉ自由基的能力测定采用邻苯三酚自氧化法[23-24]，稍做修改。向各管中加入4.5 mL的Tris-HCl缓冲液(50 mmol·L-1，pH=8.2)，在25 ℃下水浴20 min，向各试管中加入1 mL不同质量浓度的多糖溶液(200 μg·mL-1、400 μg·mL-1、600 μg·mL-1、800 μg·mL-1、1 000 μg·mL-1、1 200 μg·mL-1、1 400 μg·mL-1、1 600 μg·mL-1、1 800 μg·mL-1)，其中空白组以去离子水代替多糖溶液，然后加入25 mmol·L-1的邻苯三酚溶液0.4 mL，对照组用10 mmol·L-1盐酸代替邻苯三酚，混匀后放入25 ℃水浴中反应5 min，在波长320 nm条件下测定吸光值(A)。不同浓度的维生素C(Vc)替代多糖样品作为阳性对照。
清除率=[1-(A样品－A对照)/A空白]×100%
2) 对OH·ˉ的清除作用。OH·ˉ清除活性的测定参照程超和李伟[13]方法，稍做修改。取1 mL不同质量浓度的多糖溶液(100 μg·mL-1、200 μg·mL-1、300 μg·mL-1、400 μg·mL-1、500 μg·mL-1、600 μg·mL-1、700 μg·mL-1、800 μg·mL-1)于试管中，向各管中加入2 mL硫酸亚铁(FeSO4)溶液(3 mmol·L-1)和1.5 mL水杨酸溶液(1.8 mmol·L-1)，混匀后，加入0.03%双氧水0.1 mL启动反应，混匀，在37 ℃条件下水浴30 min后在波长510 nm条件下测定A。以去离子水代替多糖溶液做空白对照，不同浓度的Vc替代多糖样品作为阳性对照。
清除率=(A空白－A样品)/A空白×100%。
3) 对DPPH的清除作用。参照邵平等[25]方法，略作修改。分别取1 mL不同质量浓度(50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、150 μg·mL-1、200 μg·mL-1、250 μg·mL-1、300 μg·mL-1、400 μg·mL-1、500 μg·mL-1)的海藻多糖水溶液，加入1 mL浓度为0.2 mmol·L-1的DPPH乙醇溶液，混匀后室温避光反应30 min，在517 nm处测定其吸光值。对照组用1 mL无水乙醇溶液代替DPPH乙醇溶液，空白组用1 mL去离子水代替多糖溶液，不同浓度的Vc替代多糖样品作为阳性对照。
清除率=[1－(A样品－A对照)/A空白]×100%
4) 还原力的测定。参考YEN和CHEN[26]方法，稍作改变。取0.4 mL不同质量浓度的多糖样品(200 μg·mL-1、400 μg·mL-1、600 μg·mL-1、800 μg·mL-1、1 000 μg·mL-1、1 200 μg·mL-1、1 400 μg·mL-1、1 600 μg·mL-1)，加入1 mL磷酸盐缓冲液(0.2 mol·L-1，pH=6.6)和10 mg·mL-1的铁氰化钾溶液1 mL，混合均匀，对照组用去离子水代替铁氰化钾，50 ℃水浴中反应20 min后加入100 mg·mL-1的三氯乙酸(TCA)溶液1 mL中止反应，再加入1 mg·mL-1的三氯化铁溶液0.2 mL，混匀后室温放置30 min，在700 nm波长处测定A，A越大则还原能力越强。不同浓度的Vc替代多糖样品作为阳性对照。
还原力=A实验－A对照
1.2.4 肝脂质过氧化作用的抑制
10%肝匀浆的制备方法参照周琪和梁运祥[27]，略作修改。取石斑鱼(珍珠龙胆)肝脏，在4 ℃冰浴下，加入12 mg·mL-1的生理盐水进行漂洗，漂洗的过程中用手术剪快速剪碎肝脏，洗去残留在组织中的血液，组织块放到干净的滤纸上沥干水分，称取20 g肝脏组织块，加入10倍体积预冷的PBS缓冲液，4 ℃下匀浆，即制成10%的肝匀浆液。
每支试管加入10%的肝匀浆液0.2 mL，对照组以0.2 mL生理盐水代替肝匀浆，再分别向每管加入0.2 mL不同质量浓度的多糖样品(200 μg·mL-1、400 μg·mL-1、600 μg·mL-1、800 μg·mL-1、1 000 μg·mL-1)，空白组则加入0.2 mL生理盐水代替多糖样品，混匀后加入5 mmol·L-1的硫酸亚铁溶液0.1 mL。混匀后在37 ℃水浴1 h，后依次加入100 mg·mL-1的三氯乙酸1 mL，46.5 mmol·L-1的硫代巴比妥酸(TBA)1 mL，充分混合均匀，沸水浴15 min后立即冷却至室温，5 000 g离心10 min，取上清液，532 nm处测定A，并计算丙二醛(MDA)生成的抑制率。
抑制率=[1－(A样品－A对照)/A空白]×100%
1.2.5 溶血保护能力
血红细胞(RBC)悬液的制备方法参考魏智清等[28]，略作修改。石斑鱼尾静脉取血，加入备有肝素钠溶液的试管中，充分摇匀，制成抗凝血。抗凝血在800 g离心2 min，弃上清，加入12 mg·mL-1的生理盐水洗涤3次，离心后缓慢吸取下层红细胞，加入生理盐水中，制成2%的RBC悬液。
分别取2%的RBC悬液1 mL，对照组以生理盐水代替RBC悬液，加入1 mL不同质量浓度的多糖样品(200 μg·mL-1、400 μg·mL-1、600 μg·mL-1、800 μg·mL-1、1 000 μg·mL-1)，空白组则加入1 mL生理盐水代替多糖样品，混匀后加入H2O2溶液(终体积分数为0.3%)，在37 ℃水浴中温育1 h，3 000 g离心10 min，取上清液在540 nm处测定A，并计算血红细胞溶血保护率。
保护率＝[1－(A样品－A对照)/A空白]×100%
1.3 统计分析
采用SPSS 19.0软件对以上实验数据进行回归分析，并根据统计结果计算出几种海藻多糖在不同抗氧化体系中的半数清除或抑制浓度(IC50)。所有实验数据均重复3次，并计算标准误差，结果以“平均值±标准差(X±SD)”表示。
2. 结果与分析
2.1 超氧阴离子的清除活性
O2·ˉ作为初级氧自由基可通过酶或金属的催化同其他分子反应生成次级活性氧自由基，从而引起细胞中脂类、蛋白质和DNA的氧化损伤[29]。因此，超氧自由基的清除能力是一种重要的体外抗氧化指标。5种海藻多糖对超氧自由基清除活性均随多糖浓度的增加而有不同程度的升高(图 1)，PaPS和SaPS对O2·ˉ的清除能力明显高于其他3种海藻多糖，半抑制浓度(IC50)分别为(262.00±24.60) μg·mL-1和(458.00±18.70) μg·mL-1(表 1)，当PaPS的质量浓度达到600 μg·mL-1以上时，清除率为90%左右，SaPS次之，而BePS的清除能力最弱，仅维持在17%~21%。
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图 1 不同海藻多糖对超氧阴离子的清除能力Figure 1. Scavenging capacity of different algal polysaccharides on superoxide anion表 1 不同海藻多糖对自由基清除及脂质过氧化抑制的半抑制浓度(IC50)Table 1. IC50 for free radical-scavenging and anti-lipid peroxidation capacity海藻多糖
algal polysaccharide清除或抑制的IC50/μg·mL-1 IC50 for scavenging or inhibitory capacity 羟自由基
hydroxyl radical超氧阴离子
superoxide anionDPPH MDA生成
formation of MDA溶血
erythrocyte lysis石莼多糖UlPS 1 062.00±56.56a 1 738.00±61.80a 1 769.00±106.00a 1 061.79±133.80ab 488.30±37.08b 匍技马尾藻多糖SaPS 312.04±37.42b 458.00±18.70c 95.80±7.48d 337.55±59.20c 598.60±45.97a 南方团扇藻多糖PaPS 388.00±45.29b 262.00±24.60d 726.00±54.90b 283.67±44.14c 335.50±22.47c 棒叶蕨藻多糖CaPS 1 153.30±52.88a 656.00±68.6b 367.00±19.70c 816.32±143.29b 229.60±39.99cd 琼技多糖BePS n.d. n.d. n.d. 1 217.41±68.12a 304.90±41.42c 维生素C Vc 198.17±13.83b 480.35±9.55c n.d. 178.00±5.25c 177.50±16.66d 注：n.d.表示该数据无法确定，统计分析中估计值极大或极小; 同列不同上标字母表示差异显著
Note：n.d.indicates data cannot be confirmed because the estimated values are maximum or minimum in statistical analysis.Values with different superscripts in the same column are significantly different.2.2 羟自由基的清除活性
OH·ˉ具有极强的氧化能力，几乎能和所有的生物大分子、有机物或无机物发生各种不同类型的化学反应，属于强氧化剂[30]。5种海藻多糖清除OH·ˉ的活性与多糖浓度存在不同程度的依赖关系，但BePS较为异常，其在质量浓度低于100 μg·mL-1时，清除率随浓度增加而快速升高，达到峰值35%左右，此后浓度继续升高，清除OH·ˉ的活性略微下降，并维持在30%左右，这说明BePS对OH·ˉ的清除能力有限(图 2)。PaPS和SaPS对OH·ˉ的清除能力仍然优于其他3种海藻多糖，IC50分别为(312.04±37.42) μg·mL-1和(388.00±45.29) μg·mL-1(表 1)，当多糖浓度为400 μg·mL-1时，清除率分别为54%和67%左右，但都明显低于Vc(97%)。
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图 2 不同海藻多糖对羟自由基的清除能力Figure 2. Scavenging capacity of different algal polysaccharides on hydroxyl radical2.3 DPPH的清除活性
DPPH是一种很稳定的自由基，其被广泛运用作为一种评价抗氧化剂的抗氧化活性的方法[31]。当向DPPH体系中加入自由基清除剂时，可以结合DPPH，使自由基数量减少，A变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。4种海藻多糖(SaPS、UlPS、CaPS和PaPS)对DPPH的清除活性均随浓度增加而升高，其中SaPS的清除活性表现良好，IC50为(95.80±7.48)μg·mL-1，优于其他4种多糖(P < 0.05，表 1)，质量浓度达到200 μg·mL-1时清除率达到72%，此后保持在70%左右(图 3)。值得注意的是，CaPS的清除活性随浓度增加一直在升高，IC50为(367.00±19.70)μg·mL-1(表 1)，质量浓度达到500 μg·mL-1时清除率达到77%左右，有超过SaPS的趋势。PaPS对DPPH的清除活性相对较低，IC50为(726.00±54.90)μg·mL-1(表 1)，质量浓度为500 μg·mL-1时清除率达到42%左右。此外，BePS对DPPH的清除活性极低，质量浓度达到500 μg·mL-1时清除率仅为3%左右，几乎为零。
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图 3 不同海藻多糖对DPPH的清除能力Figure 3. Scavenging capacity of different algal polysaccharides on DPPH2.4 还原力
抗氧化剂可通过自身氧化作用，提供电子还原被自由基氧化的物质，从而实现自由基的清除，因此，还原力与抗氧化能力密切相关。SaPS和PaPS的还原力明显高于其他3种海藻多糖，并且随多糖浓度增加而显著增高，在质量浓度达到800 μg·mL-1时，还原力分别达到0.9和1.0左右，但都低于Vc的还原力，而其他3种海藻多糖浓度与效用依赖关系较不明显，基本处于0.2以下(图 4)。
2.5 脂质过氧化作用的抑制
MDA是重要的脂质过氧化产物之一，其能和TBA反应生成粉红色的物质，通过添加强自由基诱导剂FeSO4或H2O2可诱导MDA的生成。5种海藻多糖均对MDA的生成有一定程度的抑制能力，并且这种能力随浓度增加而升高(图 5)。SaPS和PaPS对MDA生成的抑制能力明显高于其他3种海藻多糖，IC50分别为(337.55±59.20)μg·mL-1和(283.67±44.14)μg·mL-1(表 1)，当多糖质量浓度达到400 μg·mL-1以上时，PaPS的抑制能力明显优于SaPS，并且其与同等浓度的Vc的抑制能力较为接近。
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图 5 不同海藻多糖对硫酸铁诱导下丙二醛生成的抑制率Figure 5. Inhibitory effect of different algal polysaccharides on MDA induced by FeSO42.6 溶血保护能力
不同海藻多糖对H2O2诱导下血红细胞的溶解存在不同程度的抑制保护能力，并且抑制能力与浓 度存在显著的依赖关系(图 6)。PaPS、BePS和CaPS对血红细胞的保护作用相对较强,IC50分别为(335.50±22.47)μg·mL-1、(304.90±41.42)μg·mL-1和(229.60±39.99)μg·mL-1(表 1)，而SaPS对于血红细胞的溶解保护作用不强,IC50为(598.60±45.97)μg·mL-1，其整体水平不如其他4种海藻多糖。
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图 6 不同海藻多糖对过氧化氢诱导下血红细胞溶解的抑制率Figure 6. Inhibitory effect of different algal polysaccharides on erythrocyte lysis induced by H2O23. 讨论
实验结果显示，5种海藻多糖的抗氧化活性与浓度剂量存在一定的依赖关系，并具有明显的差异性。匍枝马尾藻和南方团扇藻同属褐藻纲，其多糖均具有较强的还原力，并对O2·ˉ和OH·ˉ有较强的清除活性，其中PaPS在O2·ˉ的清除方面显著高于SaPS(P < 0.05)，而在OH·ˉ的清除方面与SaPS较为相近(P>0.05)，说明PaPS和SaPS能够直接提供氢离子给O2·ˉ及OH·ˉ，这可能与这2种多糖氢氧键的弱解离能有关[32]，推测PaPS和SaPS含有较多的硫酸基及羧基[33]。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子[34]。SaPS对DPPH的清除能力优于其他4种海藻多糖，而PaPS的DPPH清除能力相对较差。值得注意的是，隶属绿藻纲的棒叶蕨藻，其多糖CaPS对OH·ˉ和O2·ˉ的清除能力一般，但是对DPPH的清除相对有效，且明显高于PaPS。这说明CaPS主动提供氢离子的能力较差，但可能存在向DPPH提供电子的抗氧化途径。此外，隶属红藻纲的琼枝麒麟菜，其多糖BePS的抗氧化活性表现最差，几个指标均明显低于褐藻纲的PaPS和SaPS，这一结果与MATSUKAWA等[35]研究较为一致。以上实验结果说明不同属种海藻多糖对不同类型自由基的清除能力存在明显的差异性，造成这种差异性的主要原因是海藻多糖的组分、分子量、官能团的种类及分子结构[17-20, 36-37]。多糖抗氧化活性并非由单一因素决定，而是多种因素共同作用的结果[38-39]。因此，该实验中选取的5种海藻多糖抗氧化活性差异与结构效应之间的关系还需要通过实验进一步分析和阐述。
脂质体过氧化是一个复杂的过程，其所产生的自由基引起的细胞损伤与引发疾病紧密相关[40]。脂质体过氧化涉及脂质过氧化物的形成和传播，并最终破坏脂质膜，产生次级产物，如MDA[41]。因此，对肝细胞MDA形成的检测能够很好地反映出海藻多糖对脂质体过氧化抑制及细胞膜损伤保护的 能力。从实验中发现，不同海藻多糖对脂质体过氧 化反应中MDA的产生有不同的抑制能力。PaPS和SaPS对MDA生成的抑制能力明显高于UlPS、CaPS和BePS，该结果与其对自由基的清除能力较为一致，尤其是与O2·ˉ和OH·ˉ的清除能力关系紧密。这说明PaPS和SaPS可能是通过对O2·ˉ和OH·ˉ的清除作用来保护细胞膜的氧化损伤，从而抑制MDA的生成。
RBC膜易受自由基攻击而发生脂质过氧化反应，产生的MDA可以交联磷脂和蛋白质，也可以使蛋白质的巯基氧化，从而损伤RBC膜，导致溶血[42]。实验结果发现不同海藻多糖对红细胞溶血的保护作用存在一定的差异性，但与自由基清除能力的结果不太一致，其中自由基清除能力较强的SaPS的溶血保护能力较差，而自由基清除能力最差的BePS，其溶血保护能力较强，该结果说明，海藻多糖对红细胞溶血保护作用不仅与自由基的清除能力有关，可能还与多糖的分子量及组分相关，这需要通过实验进一步分析。
4. 结论
通过体外抗氧化活性及脂质过氧化作用的研究发现，不同海藻多糖对不同类型的自由基清除作用存在明显的差异性，并且这种差异性可以体现在对细胞膜脂质过氧化及膜损伤的抑制和保护上。PaPS具有较好的OH·ˉ和O2·ˉ清除作用，并且对细胞膜的氧化损伤有较好的的保护作用，该结果为进一步探讨该多糖的功能活性及其作用机制奠定了基础，同时也为南方团扇藻多糖的产品开发提供了一定理论依据。
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图 1 D-loop基因PCR扩增结果
M.marker; D.达里湖的样品；G.岗更湖的样品
Figure 1. PCR amplified products of D-loop gene
M.marker; D. samples in Dali Lake; G. samples in Ganggeng Lake
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图 2 D-loop序列UPGMA系统树
进化树上名称含义举例说明如下：C7.第7号草鱼的样品；D2.达里湖第2号鱼的样品；G11.岗更湖第11号鱼的样品
Figure 2. UPGMA phylogenetic tree based on D-loop sequences
The codes in the UPGMA phylogenetic tree are illustrated as follows: C7. No.7 grass carp samples; D2. No.2 fish samples in Lake; G11. No.11 fish samples in Ganggeng Lake
表 1 达里湖和岗埂湖东北雅罗鱼群体之间的遗传距离
Table 1 Genetic distance between L.waleckii Dybowski stocks in Dali Lake and Ganggeng Lake
草鱼
C.idellus达里湖东北雅罗鱼
L.waleckiiin Dali Lake岗更湖东北雅罗鱼
L.waleckii in Ganggeng Lake草鱼C.idellus 0.003 6 0.393 0 0.395 0 达里湖东北雅罗鱼L.waleckii in Dali Lake 0.393 0 0.003 6 0.007 0 岗更湖东北雅罗鱼L.waleckii in Ganggeng Lake 0.395 0 0.007 0 0.007 4 
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