Effect of transport density on survival rate of black seabream sealed in oxygenated plastic bag during stock enhancement
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摘要: 为研究黑鲷(Sparus inacrocephalus)增殖放流最适宜运输密度及运输后生理生化变化情况，选取全长9~11.7 cm的黑鲷鱼苗为实验对象，设计5个密度组(10尾、15尾、20尾、25尾和30尾)采用塑料袋密封充氧运输方式，即塑料袋中充等量的海水并充氧至饱和，水体为育苗池海水，水温27.7 ℃，盐度29，pH 8.04，溶解氧8.8 mg·L–1，运输2.75 h。分别于运输后暂养的第0、第6、第12、第24和第48小时取样，研究黑鲷鱼苗血清和肌肉中总蛋白(TP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)等指标的变化情况。结果显示，不同密度的塑料袋密封充氧运输后，10尾组和15尾组血清和肌肉中的TP和MDA浓度低于30尾组(P<0.05)，而SOD和CAT活性显著高于30尾组(P<0.05)；从暂养后恢复水平上看，10尾组和15尾组肌肉和血清中各项指标恢复最快，20尾组和25尾组次之，30尾组的各项指标恢复较慢且至实验结束时未能全部恢复。综合经济因素分析，在水温27.7 ℃、盐度29、pH 8.04的条件下运输9~11.7 cm黑鲷鱼苗2.75 h时，用塑料袋密封充氧运输的最佳密度为每袋25尾。Abstract: To investigate the optimum transport density and post-transport recovery for juvenile black sea bream (Sparus nacrocephalus) during the stock enhancement, we sealed the juveniles (length of 9–11.7 cm) by oxygenated plastic bags and transported them for 2.75 h at different densities (10 ind., 15 ind., 20 ind., 25 ind. and 30 ind.) at sea water temperature of 27.7 ℃, sainilty of 29, pH of 8.04 and dissolved oxygen of 8.8 mg·L–1. Then we observed the effect of transport density on the total protein (TP), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and malondialdehyde (MDA) in serum and muscle at 0th, 6th, 12th, 24th and 48th hour. The results show that the TP and MDA concentrations in serum and muscle in groups of 10 ind. and 15 ind. were lower than that in group of 30 ind. after transport (P<0.05); while the situation was just on the contrary for the activities of SOD and CAT (P<0.05). In the aspect of recovery level, groups of 10 ind. and 15 ind. had the best recovery of the indicators in serum and muscle, followed by groups of 20 ind. and 25 ind. while group of 30 ind. had the slowest recovery and failed to fully recovery at the end of the experiment. In consideration of economic factors, 25 ind. per bag is recommended when the 9–11.7 cm juvenile black seabreams are transported for 2.75 h at water temperature of 27.7 ℃, salinity of 29 and pH of 8.04 sealed in oxygenated plastic bag.
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黑鲷(Sparus inacrocephalus)隶属于鲈形目、鲷科、鲷属，肉质鲜美，营养丰富，经济价值较高，是名贵的经济鱼类[1]。多年来，由于过度捕捞和水域环境污染等因素，野生黑鲷资源衰退，因此开展黑鲷增殖放流成为恢复黑鲷资源的重要举措，黑鲷成为中国沿海每年增殖放流的重要品种[2]。开展黑鲷增殖放流技术和理论研究，是黑鲷增殖放流成效的基本保障。Sulikowski等[3]提出，增殖放流的要素之一就是增殖放流鱼苗从育苗池到野生环境的成功转移，其中减少或者消除如操作、运输等产生的相关胁迫是成功转移的关键。国外的研究侧重于增殖放流鱼苗机体的激素或代谢水平[4-9]，如Barton等[7]研究了玻璃梭鲈(Stizostedion vitreum)幼鱼在捕捞、运输及放流过程中血浆皮质醇和氯化物的应激反应；Shrimpton等[8]研究发现美洲西鲱(Alosa sapidissima)幼鱼运输过程中血浆皮质醇和氯化物的淡水应激反应大于海水；Urbinati等[9]研究了头石脂鲤(Brycon cephalus)幼鱼在装卸及不同密度运输后的皮质醇、氯化钙、血糖和血红细胞等变化情况，但关于酶活性变化的研究尚未见报道。国内有关黑鲷增殖放流运输等操作胁迫造成的影响研究尚未见报道。
本研究模拟增殖放流中常见的塑料袋密封充氧运输方式，研究经不同运输密度处理后的黑鲷鱼苗血清和肌肉中非特异性免疫相关酶活性变化，及其应激反应的变化情况，探讨适宜的黑鲷运输密度，以期为黑鲷增殖放流的科学实施提供参考依据。
1. 材料与方法
1.1 模拟运输实验
实验时间为2017年6月21—23日。实验黑鲷鱼苗购于广东大亚湾南澳养殖场。选取健康活泼的黑鲷鱼苗共490尾，测得全长范围为9~11.7 cm、平均为(10.9±1.0) cm，体质量范围为10.5~20.7 g、平均为(18.2±3.8) g。模拟运输方式为黑鲷增殖放流常用的塑料袋密封充氧运输。运输容具为透明塑料袋(未充氧时长50 cm、宽30 cm)，每袋装入育苗池海水4 400 mL (水温27.7 ℃，盐度27，pH 8.04)，育苗池海水约占塑料袋体积的1/4。共设5组实验组和1组对照组，实验组为分别将每袋塑料袋中装入黑鲷鱼苗10尾、15尾、20尾、25尾和30尾，每个实验组设3个平行；对照组为在育苗池随机选取的9尾生长状况良好、与实验组体长体质量相近的黑鲷鱼苗。运输前，实验组每袋充纯氧至饱和(纯氧约占塑料袋体积的3/4)后立即用塑料圈封闭，为保持海水与氧气的充分结合，密封后均匀晃动3次，之后在运输过程中每隔0.5 h均匀晃动3次，以便氧气与海水混合。
实验鱼苗用塑料袋密封充氧后，使用汽车运输，运输过程中调节车内温度为27 ℃。运输起点为大亚湾南澳养殖场，终点为中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地，全程柏油公路，较为平缓，运输时间为2.75 h。
1.2 样品采集与分析
各密度组运输到中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地后，分别暂养于控温池中的不同网箱(1.5 m×1 m×1 m)中，水温(27±0.5) ℃，盐度29，pH 8.0，整个实验过程中禁食。分别于运输后暂养的第0、第6、第12、第24和第48小时随机从各密度组中选9尾同时取样，以测定模拟增殖放流后一段时间内黑鲷鱼苗生理生化变化情况。其中，各个密度组完成运输 (2.75 h) 到达实验场后立即同时打开塑料袋并采样(第0小时)。样品鱼用无菌注射器进行尾静脉取血，取血时，用冰水混合物浸透的毛巾轻轻辅助，尽量减少其应激反应，血样静置1.5 h，放入4 ℃冰箱冷藏8 h后，用高速台式冷冻离心机(TGL-20bR) 3 500 r·min–1、4 ℃离心10 min，所得血清置于 – 80 ℃超低温冰箱冻存待测。样品鱼在取完血样后，于冰盘上快速取其背部肌肉，用电子天平称质量，按质量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入9倍0.86%的生理盐水，液氮研磨，2 500 r·min–1离心10 min，取上清液保存于 – 80 ℃超低温冰箱待测。对照组处理方式为现场采样，其采样方式与实验组相同。
血清和肌肉中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、总蛋白(TP)均使用南京建成生物工程试剂盒测定。
1.3 数据处理
实验数据经Excel 2010软件处理后，以密度和暂养时间为自变量，用SPSS 19.0软件进行双因素方差分析(Two-Way ANOVA)，如果出现显著交互影响，则固定其中一个因素水平，做另一个因素的单因素方差分析(One-Way ANOVA)，用邓肯分析(Duncan)进行组间差异显著性检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。数据以“平均值±标准差 (
$\overline {X} $ ±SD)”表示。2. 结果
2.1 不同运输密度的成活率
塑料袋密封充氧运输2.75 h过程中不同密度组的黑鲷鱼苗成活率均为100%，运输结束后48 h内其暂养成活率仍均为100%。
2.2 不同运输密度运输后的生理生化指标变化
不同运输密度和运输后不同暂养时间对黑鲷鱼苗血清和肌肉中的TP质量浓度、SOD活性、CAT活性和MDA浓度有显著(P<0.05)甚至极显著(P<0.01)影响，且两者之间存在显著的交互作用(表1)。
表 1 不同密度运输后黑鲷鱼苗各项生理生化指标的双因素方差分析结果Table 1. Two-Way ANOVA analysis of indicators of juvenile black seabream at different densities in post-transport来源
source因变量
dependent variable自由度
df均方
MSF P 密度组
density group血清中TP质量浓度 4 8.730 4.994 0.002 血清中SOD活性 4 48.526 25.407 0.000 血清中MDA浓度 4 80.338 40.242 0.000 血清中CAT活性 4 52.443 29.177 0.000 肌肉TP质量浓度 4 305.055 174.640 0.000 肌肉SOD活性 4 0.266 1 007.817 0.000 肌肉MDA浓度 4 0.005 52.693 0.000 肌肉CAT活性 4 0.065 205.320 0.000 暂养时间
temporary culture time血清中TP质量浓度 4 443.587 253.757 0.000 血清中SOD活性 4 76.791 40.205 0.000 血清中MDA浓度 4 929.431 465.566 0.000 血清中CAT活性 4 105.215 58.538 0.000 肌肉TP质量浓度 4 1 308.506 749.103 0.000 肌肉SOD活性 4 0.278 1 054.041 0.000 肌肉MDA浓度 4 0.006 61.077 0.000 肌肉CAT活性 4 0.096 301.276 0.000 密度组×暂养时间
density group × temporary culture time血清中TP质量浓度 16 3.969 2.271 0.013 血清中SOD活性 16 25.435 13.317 0.000 血清中MDA浓度 16 78.479 39.311 0.000 血清中CAT活性 16 18.861 10.494 0.000 肌肉TP质量浓度 16 111.804 64.006 0.000 肌肉SOD活性 16 0.033 125.371 0.000 肌肉MDA浓度 16 0.002 17.735 0.000 肌肉CAT活性 16 0.004 11.429 0.000 误差
error血清中TP质量浓度 52 1.748 血清中SOD活性 52 1.910 血清中MDA浓度 52 1.996 血清中CAT活性 52 1.797 肌肉TP质量浓度 52 1.747 肌肉SOD活性 52 0.000 肌肉MDA浓度 52 0.000 肌肉CAT活性 52 0.000 注：×. 因素A和因素B交互作用
Note: ×. interaction between Factor A and Factor B2.2.1 血清TP质量浓度
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗血清中TP质量浓度有显著的交互作用(P<0.05，表1)。10尾组和15尾组血清中TP质量浓度的整体水平低于30尾组；运输后第0小时，各密度组的TP质量浓度较对照组未有明显变化，随暂养时间的增加而逐渐上升，在第24小时各密度组的TP质量浓度升至峰值，其中10尾组TP质量浓度最低(P<0.05)，30尾组TP质量浓度最高(P>0.05)，15尾组、20尾组和25尾组无显著性差异(P>0.05)；而在第48小时各密度组TP质量浓度又降低且低于对照组水平(P<0.05，图1-a)。
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图 1 运输后不同暂养时间下不同运输密度组的血清中总蛋白质量浓度、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性和丙二醛浓度不同小写字母表示同一时间不同密度组有显著性差异(P<0.05)，不同大写字母表示同一密度组不同时间有显著性差异(P<0.05)，图2同此Figure 1. Total protein mass concentration, superoxide dismutase activity, catalase activity and malondialdehyde concentration in serum at different transport densities with different post-transport temporary culture timeDifferent lowercase letters indicate significant difference in different density groups at the same time (P<0.05). Different capital letters indicate significant difference in the same density group at different time (P<0.05). The same case in Fig.2.2.2.2 血清SOD活性
不同运输密度和运输后暂养时间对黑鲷鱼苗血清中SOD活性有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。其中，运输后第0小时，10尾组SOD活性较对照组显著升高(P<0.05)，且随暂养时间的增加SOD活性逐渐降低，第48小时基本恢复至运输前水平；15尾组的SOD活性在运输后第0小时无显著变化(P>0.05)，随时间增长呈微小波动，在第48小时略低于运输前水平；运输后20尾组和25尾组的SOD活性呈现先降低后逐渐升高的趋势，在第12小时达到峰值后降低，至第48小时略低于对照组；30尾组SOD活性在运输后明显降低(P<0.05)，后随暂养时间的增加，SOD活性有所恢复但仍低于对照组(图1-b)。
2.2.3 血清CAT活性
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗血清中CAT活性有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。总体来说，运输后各密度组的CAT活性呈波动性变化；除30尾组外，各密度组CAT活性均高于对照组；10尾组和15尾组的CAT活性均显著高于30尾组；从恢复水平上看，10尾组和15尾组浮动较大，20尾组和25尾组的CAT活性在暂养期间较稳定(P>0.05)，30尾组CAT活性随时间变化波动较小(图1-c)。
2.2.4 血清MDA浓度
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗血清中MDA浓度有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。运输后，各密度组MDA浓度在第0和第6小时变化不大，在第12小时显著升高(P<0.05)，其中，10尾组、15尾组、20尾组和25尾组的MDA浓度升至峰值(P<0.05)；在第24小时又显著低于对照组水平(P<0.05)，在第48小时，10尾组和15尾组的MDA浓度均恢复到接近对照组水平(P>0.05)，而30尾组的MDA浓度显著高于对照组(P<0.05，图1-d)。
2.2.5 肌肉TP质量浓度
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗肌肉中TP质量浓度有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。运输后第0和第6小时，除30尾组外，其他密度组TP质量浓度均略低于对照组，其中30尾组TP质量浓度高于10尾组和15尾组；在第12和第24小时，除10尾组外，其他密度组TP质量浓度均有显著升高(P<0.05)，且各密度组在第24小时升至最高(P<0.05)；在第48小时，10尾组、15尾组、20尾组和25尾组肌肉中TP质量浓度基本恢复至对照组水平，而30尾组的TP质量浓度低于对照组(P<0.05)；总体上，30尾组的TP质量浓度高于10尾组和15尾组(图2-a)。
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图 2 运输后不同暂养时间下不同运输密度组的肌肉中总蛋白质量浓度、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性和丙二醛浓度Figure 2. Total protein mass concentration, superoxide dismutase activity, catalase activity and malondialdehyde concentration in serum at different transport densities with different post-transport temporary culture time2.2.6 肌肉SOD活性
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗肌肉中SOD活性有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。运输后各密度组的SOD活性均高于对照组，与暂养时间呈负相关；在第48小时，10尾组、15尾组、20尾组和25尾组SOD活性基本恢复至对照组水平，30尾组显著低于对照组(P<0.05)；其中，10尾组SOD活性在运输后的第0小时显著升高(P<0.05)，其他各密度组也有不同程度的上升；总体上看，低密度组的SOD活性高于高密度组(图2-b)。
2.2.7 肌肉CAT活性
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗肌肉中CAT活性有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。运输后，除30尾组外，其他各密度组肌肉中CAT活性都随暂养时间降低，在第24和第48小时均显著低于对照组水平(P<0.05)；其中，10尾组、15尾组和20尾组肌肉中CAT活性变化幅度较大，而各密度组肌肉中CAT活性在第12、第24和第48小时趋于稳定且除10尾组外均低于对照组；总体来说，低密度组CAT活性高于高密度组(图2-c)。
2.2.8 肌肉MDA浓度
不同运输密度和暂养时间对黑鲷鱼苗肌肉MDA浓度有极显著的交互作用(P<0.01，表1)。运输后，10尾组和15尾组肌肉中MDA浓度波动幅度较大，暂养的第0至第24小时明显降低且在第12小时后均低于对照组，至第48小时MDA浓度有所升高，但仍低于对照组；25尾组和30尾组肌肉中MDA浓度波动幅度较小，仅在第12小时明显低于对照组；运输后第0小时，10尾组、15尾组和20尾组的MDA浓度较对照组显著升高(P<0.05)，3组间无明显差异(P>0.05)，而25尾组和30尾组肌肉中MDA浓度与对照组无明显差异(P>0.05)；在第12小时各密度组肌肉中MDA浓度均低于对照组水平(图2-d)。
3. 讨论
3.1 运输密度对肌肉和血清中TP的影响
鱼类能量的主要来源为糖类、脂肪和蛋白质，而它们在生化分解后可以经血液运送到鱼体各组织中，为各个器官提供能量；其中，TP的主要作用是维持血浆胶体渗透压与pH平衡，具有运输、凝血、免疫、供应能量等功能[10]；而物种、性别、生长速率、季节、活动、饥饿、疾病、休眠等对鱼类血清中TP有一定影响。根据高等动物血清蛋白测定的临床意义和鱼类血清蛋白检测的定义，说明其在判断鱼类代谢生长、抗应激胁迫等方面具有重要意义[11]；已有研究表明，肝脏结构上的变化能导致TP浓度升高，说明其可作为鱼类肝损伤的指示物[12]。本实验中，在运输后的第0、第6小时，各密度组血清和肌肉中的TP质量浓度变化都不大，而在第12小时逐步上升，在第24小时各密度组TP质量浓度最高，这与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)在急性拥挤胁迫后的第24小时TP质量浓度升高的实验结果相似[12]，可能是由于运输后第24小时黑鲷幼鱼肝损伤比较严重，进而导致TP质量浓度含量升高。另外，在暂养第48小时，30尾组肌肉和血清中TP水平基本上均低于对照组，有研究显示，牙鲆(Paralichthys olicaceus)随运输时间的延长，机体处于免疫应激状态，血液中TP浓度会逐渐下降，说明此时黑鲷幼鱼处于免疫应激状态[13]。总体上，10尾组和15尾组的TP质量浓度低于30尾组，且在恢复的第48小时较低密度组的TP质量浓度高于较高密度组，说明30尾组受影响较大，其肝损伤程度比较严重且免疫能力较低。
3.2 运输密度对血清和肌肉中抗氧化指标的影响
鱼体内含有SOD、CAT和GST等多种抗氧化酶，在正常生理条件下，抗氧化防御系统可有效清除鱼体内代谢产生的活性氧。但若是活性氧产生过多且抗氧化防御系统不能有效消除，就会对机体造成氧化胁迫，引起脂质过氧化等不良反应[14]。其中，SOD为抗氧化系统率先起作用的抗氧化酶之一，通常对氧化胁迫最为敏感。SOD既是超氧阴离子自由基的天然消除剂，还可以增强免疫细胞的吞噬能力，控制细胞膜脂质过氧化并保护机体的正常生理功能[15-16]。SOD清除过程中产生的过氧化氢(H2O2)将在CAT的催化作用下生成H2O和O2，从而对机体起保护作用[17-18]。已有研究表明，胁迫处理后，鱼体内的SOD和CAT都迅速升高[19-20]。本研究肌肉中SOD和CAT活性变化结果与上述研究相似。运输后各密度组肌肉中SOD和CAT活性趋势基本是先升后降；30尾组的SOD和CAT活性均低于10尾组和20尾组；其中，各密度组SOD活性均高于对照组，除30尾组外，其他密度组中SOD活性均在第48小时恢复至对照组水平左右，30尾组则低于对照组水平(P<0.05)。有研究表明胁迫影响越大，SOD越会受到抑制[21]，说明30尾组受运输影响较严重。肌肉中CAT活性整体呈下降趋势；暂养的第24小时各密度组CAT活性均显著降低(P<0.05），且至暂养的第48小时各密度组CAT活性均低于对照组(P<0.05）。血清中，各密度组的SOD活性在暂养的第48小时均低于对照组，其中10尾组最高，30尾组最低。说明运输后10尾组和15尾组的抗氧化能力较强且随暂养时间的增加恢复较快。10尾组血清中SOD活性在运输后第0小时升高，而后缓慢降低，在第48小时恢复至略低于对照组水平；15尾组、20尾组和25尾组在运输后第0小时SOD活性显著降低且密度越高降低幅度越大，其中，20尾组和25尾组均在第12小时恢复至基本与对照水平相近，在第48小时略低于对照组水平；30尾组SOD活性整体水平低于对照组，在第48小时显著低于对照组水平，说明运输后的10尾组和15尾组的黑鲷鱼苗产生较多的SOD来清除活性自由基，有较好的抗氧化能力，而30尾组的抗氧化能力受到抑制且抗氧化能力和免疫力较弱。而血清中各密度组的CAT活性在运输后第0小时均显著升高，10尾组和15尾组高于30尾组；其中，10尾组和15尾组CAT活性的变化幅度较大，20尾组和25尾组CAT活性变化幅度较小；30尾组CAT活性在第24和第48小时显著低于对照组水平(P<0.05)，说明短途运输密度胁迫会使密度组的抗氧化能力短时增强。此结果与尤宏争等[22]研究的短途运输胁迫对珍珠龙胆石斑鱼的影响相似，其认为可能是由于自由基的产生，诱导了抗氧化系统因清除自由基而升高。于丽娟等[23]通过中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)幼鱼的运动训练发现，训练组的SOD和CAT变化趋势不同，认为可能是由于运动胁迫后机体内各种促炎症分子(如：1 L-1)含量增加，促进SOD活性但抑制CAT活性，这种不平衡对机体存在潜在危害。
另外，生物体内当活性氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸时，引发的脂质过氧化最终会被降解进而产生具有很强生物毒性的MDA；而生物体内的MDA浓度是衡量机体自由基代谢和细胞损伤程度的敏感指标，是目前最能反映机体氧化损伤程度的指标之一[24-26]。本实验中运输后第0小时，10尾组和15尾组肌肉中MDA浓度明显升高，这是由于运输后，机体处于对胁迫的应激中，产生大量的自由基，虽然SOD和CAT也大量产生，但未能达到抗氧化系统的平衡；在暂养的第6小时，10尾组和15尾组MDA浓度恢复至对照组水平左右，说明达到了暂时的生理平衡；而在第12小时，10尾组和15尾组MDA浓度明显低于其他组，对照组的CAT活性偏高，说明此时10尾组和15尾组的抗氧化能力比较强；在暂养的第24和第48小时30尾组的MDA浓度高于10尾组和15尾组；其中20尾组和25尾组MDA浓度变化较小，其水平与对照组相近。血清中，各密度组MDA浓度呈波动性变化；10尾组MDA浓度在运输后第0小时较对照组降低(P<0.05)，说明此时该组抗氧化能力强；而其他各密度组在运输后第0、第6小时无明显变化，在第12小时，各密度组均高于对照组(P<0.05)，在暂养的第24小时，各密度组MDA浓度明显降低，暂养的第48小时，除30尾组外基本恢复至接近对照组水平，30尾组明显高于对照组。说明在胁迫恢复过程中，抗氧化系统一直处于动态平衡[27-28]，使得各密度组MDA浓度波动性变化。从恢复水平上看，30尾组在第48小时仍高于对照组，说明该组机体细胞损伤较严重。吴庆元等[29]发现，胁迫后鲻鱼(Mugil cephalus)幼鱼肌肉MDA浓度变化幅度比肠和鳃丝大，而本实验中，肌肉中MDA浓度较少，血清中较多，说明运输后血清内脂质反应较敏感。
从黑鲷鱼苗运输后血清中SOD、CAT活性及MDA浓度上看，血清应激反应比较明显，若以该类指标判断选择运输密度，可优先考虑血清取样。
4. 小结
由于人力、物力和项目资金所限，本研究以水产行业标准的运输时间为参考，设计从育苗场到实验场所所需的实际运输时间(2.75 h)作为实验运输时间，探讨了不同密度的塑料袋在密封充氧运输2.75 h后的黑鲷鱼苗主要生理生化指标变化情况，研究结果有一定局限性。有待进一步对不同规格、不同运输时间、不同运输密度的黑鲷鱼苗开展系统研究，以获得较完善的塑料袋密封充氧运输密度参数、运输后一段时间内鱼苗生理生化变化参数。
本研究中10尾组和15尾组黑鲷鱼苗的抗氧化能力较强且恢复能力较好，20尾组和25尾组在运输过程中机体损伤较小，30尾组抗氧化能力较弱且损伤较严重。实验数据显示，相比肌肉，血清中的SOD、CAT、MDA和TP含量检测黑鲷的抗氧化及代谢水平的效果较佳。在实际的黑鲷增殖放流过程中，考虑经济因素，与实验条件相似的情况(鱼苗规格、运输时间和运输路况等)，建议运输9~11.7 cm的黑鲷鱼苗，时长约为2.75 h时，用塑料袋密封充氧运输的最佳密度为每袋25尾。为保证增殖放流后的成活率，建议在制定增殖放流方案时不但要考虑拟增殖放流当天的天气、放流海域水环境等条件，还应考虑运输后至少两天的情况，以选定合适的增殖放流日期。在本研究中，运输后第48小时，黑鲷鱼苗的免疫及代谢能力已经基本恢复到运输实验前在育苗池的平静水平。
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图 1 运输后不同暂养时间下不同运输密度组的血清中总蛋白质量浓度、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性和丙二醛浓度
不同小写字母表示同一时间不同密度组有显著性差异(P<0.05)，不同大写字母表示同一密度组不同时间有显著性差异(P<0.05)，图2同此
Figure 1. Total protein mass concentration, superoxide dismutase activity, catalase activity and malondialdehyde concentration in serum at different transport densities with different post-transport temporary culture time
Different lowercase letters indicate significant difference in different density groups at the same time (P<0.05). Different capital letters indicate significant difference in the same density group at different time (P<0.05). The same case in Fig.2.
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图 2 运输后不同暂养时间下不同运输密度组的肌肉中总蛋白质量浓度、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性和丙二醛浓度
Figure 2. Total protein mass concentration, superoxide dismutase activity, catalase activity and malondialdehyde concentration in serum at different transport densities with different post-transport temporary culture time
表 1 不同密度运输后黑鲷鱼苗各项生理生化指标的双因素方差分析结果
Table 1 Two-Way ANOVA analysis of indicators of juvenile black seabream at different densities in post-transport
来源
source因变量
dependent variable自由度
df均方
MSF P 密度组
density group血清中TP质量浓度 4 8.730 4.994 0.002 血清中SOD活性 4 48.526 25.407 0.000 血清中MDA浓度 4 80.338 40.242 0.000 血清中CAT活性 4 52.443 29.177 0.000 肌肉TP质量浓度 4 305.055 174.640 0.000 肌肉SOD活性 4 0.266 1 007.817 0.000 肌肉MDA浓度 4 0.005 52.693 0.000 肌肉CAT活性 4 0.065 205.320 0.000 暂养时间
temporary culture time血清中TP质量浓度 4 443.587 253.757 0.000 血清中SOD活性 4 76.791 40.205 0.000 血清中MDA浓度 4 929.431 465.566 0.000 血清中CAT活性 4 105.215 58.538 0.000 肌肉TP质量浓度 4 1 308.506 749.103 0.000 肌肉SOD活性 4 0.278 1 054.041 0.000 肌肉MDA浓度 4 0.006 61.077 0.000 肌肉CAT活性 4 0.096 301.276 0.000 密度组×暂养时间
density group × temporary culture time血清中TP质量浓度 16 3.969 2.271 0.013 血清中SOD活性 16 25.435 13.317 0.000 血清中MDA浓度 16 78.479 39.311 0.000 血清中CAT活性 16 18.861 10.494 0.000 肌肉TP质量浓度 16 111.804 64.006 0.000 肌肉SOD活性 16 0.033 125.371 0.000 肌肉MDA浓度 16 0.002 17.735 0.000 肌肉CAT活性 16 0.004 11.429 0.000 误差
error血清中TP质量浓度 52 1.748 血清中SOD活性 52 1.910 血清中MDA浓度 52 1.996 血清中CAT活性 52 1.797 肌肉TP质量浓度 52 1.747 肌肉SOD活性 52 0.000 肌肉MDA浓度 52 0.000 肌肉CAT活性 52 0.000 注：×. 因素A和因素B交互作用
Note: ×. interaction between Factor A and Factor B
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