养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定

陈言峰, 周爱国, 陈冠锋, 陈建酬, 张继平, 张辉华

陈言峰, 周爱国, 陈冠锋, 陈建酬, 张继平, 张辉华. 养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定[J]. 南方水产科学, 2014, 10(5): 1-7. DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.001
引用本文: 陈言峰, 周爱国, 陈冠锋, 陈建酬, 张继平, 张辉华. 养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定[J]. 南方水产科学, 2014, 10(5): 1-7. DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.001
CHEN Yanfeng, ZHOU Aiguo, CHEN Guanfeng, CHEN Jianchou, ZHANG Jiping, ZHANG Huihua. Isolation of Edwardsiella tarda from cultured hybrid snakehead (Channa maculata♀×C.argus♂) and its identification[J]. South China Fisheries Science, 2014, 10(5): 1-7. DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.001
Citation: CHEN Yanfeng, ZHOU Aiguo, CHEN Guanfeng, CHEN Jianchou, ZHANG Jiping, ZHANG Huihua. Isolation of Edwardsiella tarda from cultured hybrid snakehead (Channa maculata♀×C.argus♂) and its identification[J]. South China Fisheries Science, 2014, 10(5): 1-7. DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.001

养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定

基金项目: 

佛山科学技术学院校级科研项目 

广东省教育部产学研项目 2010b090400255

详细信息
    作者简介:

    陈言峰(1981-),男,博士,助教,从事淡水养殖鱼类病害研究。E-mail:chyfwf@126.com

    通讯作者:

    张辉华(1971-),教授,从事淡水鱼类生态养殖技术研究。E-mail:hhzhang2@163.com

  • 中图分类号: S941.42

Isolation of Edwardsiella tarda from cultured hybrid snakehead (Channa maculata♀×C.argus♂) and its identification

  • 摘要:

    从患病杂交鳢[斑鳢(Channa maculata)♀×乌鳢(C.argus)♂]体内分离到2株致病菌(ZS201364-1和ZS201364-2),通过对其生化特性与16S rRNA基因序列进行分析,确定为迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)。该致病菌兼性厌氧,为革兰氏阴性短杆菌,能运动,能发酵葡萄糖、麦芽糖。吲哚试验和MR试验均为阳性。2株致病菌对杂交鳢的半致死剂量(LD50)分别为7.1×105 cfu · g-1和5.6×105 cfu · g-1。ZS201364-1最适生长温度为25~35 ℃、pH为7~8、氯化钠(NaCl)质量分数为1%,对头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星等抗生素高度敏感。

    Abstract:

    Two pathogenic bacteria (ZS201364-1, ZS201364-2) isolated from diseased hybrid snakeheads (Channa maculata♀×C. argus♂) were identified to be Edwardsiella tarda by analyses of biochemical features and 16S rDNA sequence. The anaerobic, gram negative, bacilliform and motile isolates utilized glucoses and maltose as energy. Both indole and M.R. tests proved positive. The LD50s of the isolates to healthy hybrid snakeheads were 7.1×105 cfu · g-1 and 5.6×105 cfu · g-1, respectively. The optimal growth conditions of strain ZS201364-1, which was highly susceptible to cefotaxime, ciprofloxacin and norfloxacin, were 25~35 ℃ pH 7~8 and 1% NaCl.

  • 乌鳢(Channa argus)和斑鳢(C.maculata)均属鲈形目,攀鲈亚目,鳢科,鳢属[1],两者均为淡水养殖的名优品种。杂交鳢[(C.maculata)♀×(C.argus)♂],俗称杂交生鱼,是以乌鳢为父本和斑鳢为母本杂交的子一代,具有明显的杂种优势。杂交鳢的成功培育和养殖推广克服了其父母本养殖的地域局限性,近年来已逐渐成为鳢科鱼类的主要养殖品种,具有广阔的养殖前景和巨大的经济效益[2]。目前,有关杂交鳢的研究主要涉及其染色体组型[3-4]、胚胎发育[5]、生长性能[6]、血液指标[7]与肌肉营养成分[8]等方面。自然条件下鳢科鱼类抗病能力较强,但高密度养殖条件下一旦养殖水体水质恶化,鳢科鱼类患病也时有发生,迄今已造成了严重的经济损失[9-15]。然而有关杂交鳢的细菌性病害的报道鲜少,除刘春等[16]报道过舒氏气单胞菌(Aeromonas schubertii)引起杂交鳢的结节病之外,国内外尚未见其他报道。笔者从广东省中山市某鱼场的患病杂交鳢分离得到2株致病菌,通过对其鉴定确定为迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda),研究了该致病菌的致病力、生长特性及对抗生素的敏感性,旨在为杂交鳢养殖过程中的病害防治提供参考。

    患病杂交鳢取自广东省中山市某杂交鳢养殖场,健康的杂交鳢购于广州市黄沙水产市场,体质量为(271±26)g,放于池中暂养,充气,水温维持在(25±2)℃,每天投喂饲料,适应1周后开始试验。革兰氏染色液、芽孢染色液、细菌微量生化鉴定管均购于广东环凯微生物有限公司;抗生素纸片购于杭州天和微生物试剂有限公司;细菌基因组DNA提取试剂盒购于广州维宁生物科技有限公司。

    无菌操作从患病濒死的杂交鳢的肝、脾、肾划线接种于营养琼脂平板上,37 ℃培养48 h后挑取单菌落在营养琼脂平板上划线,进行纯培养。对已分离纯化的细菌按染色液说明书进行格兰染色、芽孢染色,参照文献[18]的方法进行荚膜染色,光学显微镜下观察。

    将分离菌的新鲜菌落接种于LB(Luria-Bertani)肉汤培养基中,培养18 h后取80 μL菌液加入每种微量生化鉴定管,37 ℃培养12~48 h后判定结果。

    用上海英骏生物技术有限公司合成的通用引物[13]进行PCR扩增,正向引物为27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′[对应于大肠杆菌(E.coli)16S rRNA基因序列的第8~第27个碱基位置];反向引物1492R:5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′(对应于E.coli 16S rRNA基因序列的第1 492~1 510个碱基位置)。按试剂盒说明书提取细菌基因组DNA。反应体系为50 μL, 0.2 μg ·μL-1细菌DNA模板2 μL,10 mmol·L-1的正反向引物各1 μL,含Mg2+的10×PCR缓冲液5 μL,10 mmol·L-1 4×dNTP 2 μL,1 U·μL-1TaqDNA聚合酶2 μL,双蒸水37 μL。PCR采用反应条件为94 ℃预变性5 min 1次;94 ℃ 30 s,58 ℃ 45 s,72 ℃ 1 min 30 s,30个循环;PCR产物送上海美吉生物医药科技有限公司纯化并测序。测序结果通过NCBI的BLAST检索系统进行同源序列比对,从中选取相似序列,并使用MEGA 4.1与从GenBank数据库中获得的序列相似性较高的菌株的序列进行多序列匹配排列(multiple alignments),采用邻接法(neighbor joining method)构建系统发育树,并通过Bootstrap法(1 000次重复)检验。

    70尾健康的杂交鳢分为7组,每组10尾,6组为试验组,1组为对照组。取菌株ZS201364-1的新鲜菌落制成浓度为1.12×109 cfu·mL-1菌悬液,然后分别稀释至1.12×108 cfu·mL-1、1.12×107 cfu·mL-1、1.12×106 cfu·mL-1、1.12×105 cfu ·mL-1和1.12×104 cfu·mL-1。分别将以上几个浓度的菌液按照每尾0.5 mL的剂量,对健康杂交鳢腹腔注射进行感染。对照组的杂交鳢,则按照每尾0.5 mL的剂量在相同部位注射0.85%无菌生理盐水。该人工感染试验持续15 d,每日观察受试鱼的发病症状并记录死亡的尾数,并从濒死的鱼重新分离细菌,根据改进的寇氏法[17]计算半致死剂量(LD50)。lg LD50=Xk-dPi-0.5),其中Xk为最大对数剂量,d为相邻两组对数剂量之差数,Pi为死亡率,i为组号。同样的方法用于菌株ZS201364-2对杂交鳢的LD50的测定。

    将菌株ZS201364-1的单菌落接种到无菌LB肉汤中振荡(80 r·min-1)培养18 h,取25 μL菌液分别接种到24支盛有5 mL无菌营养肉汤的试管中,于5 ℃、10 ℃、15 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃下培养,每个温度设3个重复。18 h后取样分别测定不同培养温度下菌液的光密度(OD460 nm)。以培养温度为横坐标、OD460 nm为纵坐标绘制曲线。

    将菌株ZS201364-1的单菌落接种到无菌LB肉汤中振荡(80 r·min-1)培养18 h,取25 μL菌液分别接种到21支盛有pH为4、5、6、7、8、9和10的5 mL无菌营养肉汤的试管中,每个pH设3个重复,30 ℃下培养18 h后取样分别测定不同pH时菌液的OD460。以pH为横坐标、OD460为纵坐标绘制曲线。

    将菌株ZS201364-1的单菌落接种到无菌LB肉汤中振荡(80 r·min-1)培养18 h,取25 μL菌液分别接种到33支含NaCl质量分数分别为0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%和5.0%的5 mL无菌营养肉汤的试管中,每个NaCl质量分数设3个重复,30 ℃条件下培养18 h后取样分别测定不同NaCl质量分数时菌液的OD460。以NaCl质量分数为横坐标、OD460为纵坐标绘制曲线。

    采用纸片扩散法,无菌操作将菌株ZS201364-1的24 h培养物以无菌生理盐水洗下制成1.5×108 cfu·mL-1的菌悬液,取80 μL菌悬液涂布于营养琼脂培养基平板,用无菌镊子将抗生素纸片轻轻贴在琼脂表面,37 ℃恒温培养48 h后测量抑菌圈直径的大小。

    该致病菌为革兰氏阴性短杆菌,能运动,无芽孢,无荚膜。在普通营养琼脂培养基上37 ℃培养24 h,形成正圆形、凸起、灰白色、有光泽的菌落,直径0.5~1.0 mm。

    根据分离菌株的生理生化特性结果[18],鉴定2株致病菌均为迟缓爱德华菌(表 1)。

    表  1  分离菌的生理生化特征
    Table  1  Physiological and biochemical characteristics of isolates
    检测项目
    test item
    ZS201364-1 ZS201364-2 迟缓爱德华菌
    E.tarda
    动力  mobility + + +
    吲哚  indole + + +
    七叶苷 aesculin +
    硫化氢 H2S + + +
    尿素酶 urease
    西蒙氏柠檬酸盐  citrate
    M.R. methyl red + + +
    V-P V-P reaction
    苯丙氨酸脱氨酶  phenylalanine deaminase
    葡萄糖酸盐  glyconate
    三糖铁琼脂 triple sugar iron agar + + +
    鸟氨酸脱羧酶  ornithine decarboxylase + + +
    赖氨酸脱羧酶  lysine decarboxylase + + +
    精氨酸脱羧酶  arginine decarboxylase
    精氨酸双水解酶  arginine hydrolase
    葡萄糖 glucose + + +
    麦芽糖  D-maltose + + +
    乳糖  lactose
    木糖  D-xylose
    甘露醇 D-mannitol
    棉子糖  raffinose
    山梨醇  D-glucitol
    侧金盏花醇  adonite
    淀粉水解  amylolysis
    马尿酸盐  hippurate + + +
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    菌株ZS201364-1和ZS201364-2所扩增的16Sr RNA基因序列长度分别为1 428 bp和1 429 bp,将此2条序列(Accession No.KJ183027和KJ183028)分别与GenBank中的序列进行比较,结果与迟缓爱德华菌同源性均为99%,从而鉴定此2株菌为迟缓爱德华菌。

    根据菌株ZS201364-1和ZS201364-2的16S rRNA基因序列测定结果,选取相似序列使用MEGA 4.1采用邻接法构建系统发育树,并通过Bootstrap法(1 000次重复)检验。所构建的系统发育树见图 1。菌株ZS201364-1和ZS201364-2的16S rRNA基因序列与迟缓爱德华菌的16S rRNA基因序列自然聚类。从而鉴定菌株ZS201364-1和ZS201364-2均为迟缓爱德华菌。

    图  1  基于16S rRNA基因序列所构建的系统发育树
    Fig. 1  Phylogenetic tree based on 16S rRNA sequences using neighbour-joining method

    人工感染后的杂交鳢第3天开始死亡,从死亡鱼的肝、肾均可再次分离到原感染细菌。试验过程中,注射了0.85%无菌生理盐水的对照组鱼摄食正常,外观特征没有明显的变化。计算得到菌株ZS201364-1和ZS201364-2对杂交鳢LD50分别为7.1×105 cfu·g-1和5.6×105 cfu·g-1

    菌株ZS201364-1在温度10~45 ℃均能生长,最适生长温度为25~35 ℃(图 2)。

    图  2  温度对菌株ZS201364-1生长的影响
    不同字母标记的表示差异显著(P<0.05),误差线代表平均值的标准误差,后图同此
    Fig. 2  Effect of temperature on growth of strain ZS201364-1
    Different letters indicate significant difference among different treatments (P < 0.05), and bars represent standard errors of the means. The same as in the following figures.

    菌株ZS201364-1在pH 4~10均能够生长,其中最适生长pH为7~8(图 3)。

    图  3  pH对菌株ZS201364-1生长的影响
    Fig. 3  Effect of pH on growth of strain ZS201364-1

    菌株ZS201364-1在NaCl质量分数为0~4%均能生长,其中最适生长的NaCl质量分数为1%(图 4)。

    图  4  氯化钠质量分数对菌株ZS201364-1生长的影响
    Fig. 4  Effect of NaCl content on growth of strain ZS201364-1
    表  2  人工感染试验结果
    Table  2  Result of artificial infection experiment
    菌株
    strain
    菌液浓度/cfu·mL-1
    concentration of bacteria solution
    试验鱼数/尾
    number of samples
    死亡个数/尾
    number of death samples
    死亡率/%
    mortality
    半致死剂量/cfu·g-1
    LD50
    ZS201364-1 1.12×104 10 2 20 7.1×105
    1.12×105 10 4 40
    1.12×106 10 5 50
    1.12×107 10 6 60
    1.12×108 10 10 100
    1.12×109 10 10 100
    ZS201364-2 1.12×104 10 2 20 5.6×105
    1.12×105 10 3 30
    1.12×106 10 6 60
    1.12×107 10 7 70
    1.12×108 10 10 100
    1.12×109 10 10 100
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    药敏试验结果显示,菌株ZS201364-1对头孢噻肟、环丙沙星和诺氟沙星等抗生素高度敏感;对链霉素、复方新诺明、林可霉素、强力霉素和利福平等低度敏感。

    迟缓爱德华菌在分类上属于肠杆菌科、爱德华氏菌属,是水产养殖中常见的一种致病菌。迟缓爱德华菌感染的宿主广泛,自1962年首次报道了其对日本鳗鲡(Anguilla japonica)的感染以来[19],目前该菌已引起了多种鱼类如斑点叉尾(Ictnlurus punctatus)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)、尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)、高体革(Scortum barcoo)、黑鲷(Sparus macrocephlus)和漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigmo)等的病害[20-25]。该菌还可感染两栖类动物如牛蛙(Rana catesbiana)和大鲵(Andrias davidianus)[26-27]。除此之外,还有该菌感染爬行类、鸟类、哺乳动物甚至人类的一些报道。笔者从患病杂交鳢分离到迟缓爱德华菌在国内外尚属首次,表明对于迟缓爱德华菌,杂交鳢是一种新发现的宿主。

    表  3  菌株ZS201364-1对17种抗生素药敏试验结果
    Table  3  Sensibility of strain ZS201364-1 to 17 antibiotics
    抗生素  antibiotic 每片含量/μg  content 抑菌圈直径/mm  diameter of inhibition zone
    阿米卡星  amikacin 30 22
    卡那霉素  kanamycin 30 23
    链霉素  phytomycin 10 10
    复方新诺明  complex sinomin 23.75/1.25 6
    庆大霉素  gentamicin 10 20
    头孢唑啉  cephazoline 30 27
    四环素  tetracycline 30 11
    头孢拉定  cefradine 30 24
    利福平  rifampicin 5 6
    强力霉素  doxycycline 30 10
    林可霉素  lincomycin 2 7
    头孢噻肟  cefotaxime 30 41
    左氟沙星  levofloxacin 5 31
    诺氟沙星  norfloxacin 10 34
    多粘菌素  Bpolymyxin B 300 units 12
    新霉素  neomycin 30 25
    环丙沙星  ciprofloxacin 5 36
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    该研究中根据分离菌的形态学特征、生理生化特性的检测结果,参考《常见细菌系统鉴定手册》[18],鉴定2株致病菌均为迟缓爱德华菌。通过测定该菌株的16S rRNA基因序列并进行分析,显示该菌株与迟缓爱德华菌的同源性最高,达99%。经计算菌株ZS201364-1和ZS201364-2对杂交鳢LD50依次为7.1×105 cfu·g-1和5.6×105 cfu·g-1。根据鱼类致病菌划分标准[28],2株致病菌对杂交鳢均具有很强的致病力。

    关于迟缓爱德华菌的生长特性,WAKABAYASHI和EGUSA[29]研究表明,该菌在培养基中NaCl质量分数为0~4%内能生长,pH 5.5~9能生长,LB肉汤中培养时15~42 ℃能生长。该研究中的菌株ZS201364-1的生长特性与上述报道的相比,耐盐性基本一致,但pH和温度的范围有所不同。同时,菌株ZS201364-1与ISHIHAZA和KUSUDA [30]报道的最适生长温度为30 ℃的结论一致,但与XIAO等[31]报道的最适生长的NaCl质量分数为2%结论不同。这可能与菌株差异有关,也可能与不同菌株所处的咸淡水环境有关。

    菌株ZS201364-1对17种抗生素的敏感性的结果,可为在对由迟缓爱德华菌引起的杂交鳢感染症防治用药时提供参考。该研究的结果与薄清如等[32]报道的鳗鲡源迟缓爱德华菌菌株、叶旭红等[24]报道的高体革源迟缓爱德华菌菌株对链霉素的敏感性,以及邓显文等[20]报道的罗非鱼源迟缓爱德华菌菌株对四环素的敏感性,均有很大的差异。这种差异可能是由菌株自身引起,也可能是养殖过程中药物的使用导致了某些菌株对某些药物产生抗性的结果。

  • 图  1   基于16S rRNA基因序列所构建的系统发育树

    Figure  1.   Phylogenetic tree based on 16S rRNA sequences using neighbour-joining method

    图  2   温度对菌株ZS201364-1生长的影响

    不同字母标记的表示差异显著(P<0.05),误差线代表平均值的标准误差,后图同此

    Figure  2.   Effect of temperature on growth of strain ZS201364-1

    Different letters indicate significant difference among different treatments (P < 0.05), and bars represent standard errors of the means. The same as in the following figures.

    图  3   pH对菌株ZS201364-1生长的影响

    Figure  3.   Effect of pH on growth of strain ZS201364-1

    图  4   氯化钠质量分数对菌株ZS201364-1生长的影响

    Figure  4.   Effect of NaCl content on growth of strain ZS201364-1

    表  1   分离菌的生理生化特征

    Table  1   Physiological and biochemical characteristics of isolates

    检测项目
    test item
    ZS201364-1 ZS201364-2 迟缓爱德华菌
    E.tarda
    动力  mobility + + +
    吲哚  indole + + +
    七叶苷 aesculin +
    硫化氢 H2S + + +
    尿素酶 urease
    西蒙氏柠檬酸盐  citrate
    M.R. methyl red + + +
    V-P V-P reaction
    苯丙氨酸脱氨酶  phenylalanine deaminase
    葡萄糖酸盐  glyconate
    三糖铁琼脂 triple sugar iron agar + + +
    鸟氨酸脱羧酶  ornithine decarboxylase + + +
    赖氨酸脱羧酶  lysine decarboxylase + + +
    精氨酸脱羧酶  arginine decarboxylase
    精氨酸双水解酶  arginine hydrolase
    葡萄糖 glucose + + +
    麦芽糖  D-maltose + + +
    乳糖  lactose
    木糖  D-xylose
    甘露醇 D-mannitol
    棉子糖  raffinose
    山梨醇  D-glucitol
    侧金盏花醇  adonite
    淀粉水解  amylolysis
    马尿酸盐  hippurate + + +
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    表  2   人工感染试验结果

    Table  2   Result of artificial infection experiment

    菌株
    strain
    菌液浓度/cfu·mL-1
    concentration of bacteria solution
    试验鱼数/尾
    number of samples
    死亡个数/尾
    number of death samples
    死亡率/%
    mortality
    半致死剂量/cfu·g-1
    LD50
    ZS201364-1 1.12×104 10 2 20 7.1×105
    1.12×105 10 4 40
    1.12×106 10 5 50
    1.12×107 10 6 60
    1.12×108 10 10 100
    1.12×109 10 10 100
    ZS201364-2 1.12×104 10 2 20 5.6×105
    1.12×105 10 3 30
    1.12×106 10 6 60
    1.12×107 10 7 70
    1.12×108 10 10 100
    1.12×109 10 10 100
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    表  3   菌株ZS201364-1对17种抗生素药敏试验结果

    Table  3   Sensibility of strain ZS201364-1 to 17 antibiotics

    抗生素  antibiotic 每片含量/μg  content 抑菌圈直径/mm  diameter of inhibition zone
    阿米卡星  amikacin 30 22
    卡那霉素  kanamycin 30 23
    链霉素  phytomycin 10 10
    复方新诺明  complex sinomin 23.75/1.25 6
    庆大霉素  gentamicin 10 20
    头孢唑啉  cephazoline 30 27
    四环素  tetracycline 30 11
    头孢拉定  cefradine 30 24
    利福平  rifampicin 5 6
    强力霉素  doxycycline 30 10
    林可霉素  lincomycin 2 7
    头孢噻肟  cefotaxime 30 41
    左氟沙星  levofloxacin 5 31
    诺氟沙星  norfloxacin 10 34
    多粘菌素  Bpolymyxin B 300 units 12
    新霉素  neomycin 30 25
    环丙沙星  ciprofloxacin 5 36
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  • [1] 中国水产科学研究院珠江水产研究所, 上海水产大学, 华南师范大学, 等. 广东淡水鱼类志[M]. 广州: 广东科技出版社, 1990: 511-514. https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=a54a86f9561c78a32527635813e98cbe&site=xueshu_se
    [2] 马建波, 茅沈丽, 卓孝磊, 等. 杂交鳢池塘高效养殖技术[J]. 水产养殖, 2010(10): 33-35. doi: 10.3969/j.issn.1004-2091.2010.10.014
    [3] 杨小强. 闽香鳢遗传生物学研究Ⅰ-子代和亲本形态比较[J]. 福建水产, 2004, 10(2): 41-44. https://d.wanfangdata.com.cn/periodical/Ch9QZXJpb2RpY2FsQ0hJTmV3UzIwMjQxMTA1MTcxMzA0Eg5RSzIwMDQwMTcwNjYzMBoINDdtaXFqOTk%3D
    [4] 张诚, 刘年峰, 杨小强, 等. 闽香鳢及其亲本染色体组型的比较[J]. 上海海洋大学学报, 2005, 14(2): 103-107. doi: 10.3969/j.issn.1004-7271.2005.02.002
    [5] 姚桂桂, 刘新轶, 谢楠, 等. 杂交鳢杭鳢1号胚胎发育过程的观察[J]. 江西农业学报, 2010, 22(11): 133-135. doi: 10.3969/j.issn.1001-8581.2010.11.045
    [6] 王宇希, 冯晓宇, 李行先, 等. 杂交鳢和乌鳢池塘养殖对比试验[J]. 水产科学, 2009, 28 (11): 683-686. doi: 10.3969/j.issn.1003-1111.2009.11.017
    [7] 卓孝磊, 梁日深, 陈言峰, 等. 杂交鳢(乌鳢♂×斑鳢♀)及其亲本血液指标的比较分析[J]. 淡水渔业, 2010, 40(3): 72-75. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2010.03.013
    [8] 刘新铁, 王宇希, 谢楠, 等. 杂交鳢及其亲本肌肉营养成分分析[J]. 齐鲁渔业, 2010, 27(5): 24-26. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=8iF5fUaBjd5BASVQUISj9mKBTClCUohD1Be47TktP4esCrN7s4O7nenPbFnneZhWuC78_MZ_3QNSd17KQBJq2uIZliG8p_Nxed6cj0KvDkDTqMLDipRzg33C8-SB95hBK5sbRr_PEdvuk0ETGB_fIsBf4jdZmVqI_sqEN04g4gTDJW7Lk6eP1Lo_mQj9HbmG&uniplatform=NZKPT&language=CHS
    [9] 陈昌福, 刘毅. 斑鳢细菌性败血症病原菌的分离与鉴定[J]. 中国兽医学报, 1998, 18(2): 144-146. doi: CNKI:SUN:ZSYX.0.1998-02-011
    [10] 曹铮, 沈锦玉, 谢荣林, 等. 乌鳢结节病病原——诺卡氏菌的分离与鉴定[J]. 水生生物学报, 2009, 33(2): 338-341. doi: 10.3724/SP.J.0000.2009.20338
    [11]

    TUNG M C, TASAI S S, HO L F, et al. An acute septicemic infection of Pasteurella organism in pond-cultured Formosa snakehead fish (Channa maculata Lacepède) in Taiwan [J]. Fish Pathol, 1985, 20(2/3): 143-148. doi: 10.3147/jsfp.20.143

    [12]

    CHEN S C. Study on the pathogenicity of Nocardia asteroids to the Formosa snakehead, Channa maculata, and largemouth bass, Micropterus salmoides [J]. J Fish Dis, 1992, 15(1): 47-53. doi: 10.1111/j.1365-2761.1992.tb00635.x

    [13]

    CHEN Y F, LIANG R S, ZHUO X L, et al. Isolation and characterization of Aeromonas schubertii from diseased snakehead, Channa maculata (Lacepède) [J]. J Fish Dis, 2012, 35(6): 421-430. doi: 10.1111/j.1365-2761.2012.01362.x

    [14]

    LIU J Y, LI A H. First case of Aeromonas schubertii infection in the freshwater cultured snakehead fish, Ophiocephalus argus (Cantor), in China [J]. J Fish Dis, 2012, 35(5): 335-342. doi: 10.1111/j.1365-2761.2012.01350.x

    [15]

    CAO H, HOU S, HE S, et al. Identification of a Bacteriovorax sp. isolate as a potential biocontrol bacterium against snakehead fish-pathogenic Aeromonas veronii [J]. J Fish Dis, 2014, 37(3): 283-289. doi: 10.1111/jfd.12120

    [16] 刘春, 李凯彬, 王庆, 等. 杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)内脏类结节病病原菌的分离、鉴定与特性分析[J]. 水产学报, 2012, 36(7): 1119-1125. doi: 10.3724/SP.J.1231.2012.27916
    [17] 李杰. 致病性迟缓爱德华氏菌的鉴定、PCR检测及esaC基因的功能鉴定[D]. 青岛: 中国海洋大学, 2008. 10.7666/d.y1337609
    [18] 东秀珠, 蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册[M]. 北京: 科学出版社, 2001: 76-77. https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=92be5766cfb591d39903d20547aabf25&site=xueshu_se&hitarticle=1
    [19]

    HOSHINA T. On a new bacterium Paracolobactrum anguillimortiferum n. sp [J]. Bull Jpn Soc Sci Fish, 1962, 28: 162-164. doi: 10.2331/suisan.28.162

    [20] 邓显文, 谢芝勋, 刘加波, 等. 罗非鱼迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定[J]. 水生态学杂志, 2009, 2(1): 114-117. https://www.fabiao.com.cn/sstx/?msclkid=eb45d65e936011ca67e6b167026f9be1
    [21] 邓显文, 谢芝勋, 刘加波, 等. 广西斑点叉尾爱德华氏菌的分离鉴定[J]. 广西农业科学, 2008, 39(2): 231-235. doi: 10.3969/j.issn.2095-1191.2008.02.030
    [22] 闫茂仓, 王雪鹏, 丁雷. 养殖黑鲷迟缓爱德华菌的分离鉴定[J]. 山东畜牧兽医, 2010, 31(4): 19-22. doi: 10.3969/j.issn.1007-1733.2010.04.008
    [23] 贺宝玲, 张玉芬, 何生美, 等. 漠斑牙鲆迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定[J]. 安徽农业科学, 2009, 37(12): 5529-5530. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.12.089
    [24] 叶旭红, 林先贵, 王一明. 养殖澳洲宝石鱼迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及致病基因的检测[J]. 淡水渔业, 2010, 40(1): 50-54. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2010.01.009
    [25] 秦蕾, 王印庚, 张晓君. 迟钝爱德华氏菌感染大菱鲆的病理学研究[J]. 中国水产科学, 2009, 16(3): 411-419. doi: 10.3321/j.issn:1005-8737.2009.03.014
    [26]

    MAUEL M J, MILLER D L, FRAZIER K S, et al. Bacterial pathogens isolated from cultured bullfrogs (Rana castesbeiana) [J]. J Vet Diagn Invest, 2002, 14(5): 431-433. doi: 10.1177/104063870201400515

    [27] 吴中明, 王欢, 敖弟书, 等. 大鲵的迟钝爱德华菌感染[J]. 遵义医学院学报, 2007, 30(4): 464-466. doi: CNKI:SUN:ZYYB.0.2007-04-006
    [28]

    SANTOS Y, TORANZO A E, BARJA J L, et al. Virulence properties and enterotoxin production of Aeromonas strains isolated from fish [J]. Infect Immun, 1989, 56(12): 3285-3293. doi: 10.1128/IAI.56.12.3285-3293.1988

    [29]

    WAKABAYASHI H, EGUSA S. Edwardsiella tarda (Paracolobactrum anguillimortiferum) associated with pond-cultured eel disease [J]. Bull Jpn Soc Sci Fish, 1973, 39(9): 931-936. doi: 10.2331/suisan.39.931

    [30]

    ISHIHAZA S, KUSUDA R. Experimental infection of elvers and anguillettea with Edwardsiella tarda bacteria [J]. Bull Jpn Soc Sci Fish, 1981, 47(8): 999-1002. https://m2.cn.bing.com/images/search?q=experimental+infection+of+elvers+and+anguillettea+with+edwardsiella+tarda+bacteria&qpvt=Experimental+infection+of+elvers+and+anguillettea+with+Edwardsiella+tarda+bacteria&FORM=IGRE

    [31]

    XIAO J F, WANG Q Y, LIU Q, et al. Isolation and identification of fish pathogen Edwardsiella tarda from mariculture in China [J]. Aquac Res, 2009, 40(1): 13-17. doi: 10.1111/j.1365-2109.2008.02101.x

    [32] 薄清如, 黄新民, 郑帆, 等. 鳗鲡爱德华菌病的诊断和病原学研究[J]. 中国兽医学报, 1999, 19(3): 258-260. doi: 10.3969/j.issn.1005-4545.1999.03.015
  • 期刊类型引用(10)

    1. 张超,吕军. 鲤源豚鼠气单胞菌的分离鉴定与药敏特性研究. 河南农业科学. 2025(01): 153-159 . 百度学术
    2. 张超. 一例草鱼肌肉出血病的病原学分析. 西南农业学报. 2021(01): 208-213 . 百度学术
    3. 徐赟霞,王禹,韩进刚,陈浩楠,冯守明. 一株血鹦鹉迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及药敏试验. 河北渔业. 2021(06): 8-11+42 . 百度学术
    4. 孙敬,柯浩,于交平,冯国清,梁志凌,刘振兴,郝乐,马艳平,马江耀. 龟源迟缓爱德华氏菌分离鉴定及灭活疫苗研制. 四川农业大学学报. 2020(03): 353-358 . 百度学术
    5. 张超,莫延敬. 斑点叉尾鮰出血性败血症的病原鉴定及药敏试验. 南方农业学报. 2020(09): 2287-2295 . 百度学术
    6. 黄勇,龚望宝,陈海刚,孙西红. 基于高通量测序的杂交鳢转录组数据分析. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2019(05): 529-535 . 百度学术
    7. 吴勇亮,苗鹏飞,于辉,谭淑雯,杨虹,彭钟琴,杨映. 鳜鱼致病性迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及药敏试验. 南方农业学报. 2018(04): 794-799 . 百度学术
    8. 余露军,苗宗余,蔡磊,魏远征,黄韧,李建军. 诸氏鲻虾虎鱼“溃烂病”病原及其致病影响因子分析. 南方水产科学. 2018(05): 45-52 . 本站查看
    9. 王悦齐,李来好,蔡秋杏,吴燕燕,王锡昌,杨贤庆,赵永强. 分离自腌干鱼的抗氧化发酵菌株的筛选及鉴定. 南方水产科学. 2016(03): 74-83 . 本站查看
    10. 陈言峰. 感染迟缓爱德华氏菌杂交鳢血清指标动态变化. 安徽农业科学. 2015(16): 136-140 . 百度学术

    其他类型引用(6)

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出版历程
  • 收稿日期:  2014-01-23
  • 修回日期:  2014-03-18
  • 刊出日期:  2014-10-04

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