Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on growth performance, digestive enzymes and non-specific immunity of Litopennaus vannamei
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摘要:
设计9组试验组，测定饲料中添加不同浓度的复方中草药以及不同的投喂策略对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、消化酶及非特异性免疫功能的影响，饲料组分别为D0、D2、D4(连续投喂对照组、0.2%中草药组、0.4%中草药组)、1D2-1D0、1D4-1D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-1周对照饲料)、1D2-2D0、1D4-2D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-2周对照饲料)、1D2-3D0、1D4-3D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-3周对照饲料)。结果表明，D2组和1D4-2D0组的增重率显著高于D0组；D2组饵料系数显著低于D0组；D4组的成活率显著低于D0组和1D4-1D0组；D0组的肝胰腺蛋白酶活性和血淋巴总蛋白(TP)质量浓度低于其他各组，而血淋巴谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量显著高于其他组；超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶活性(AKP)以1D4-1D0组最高，过氧化物酶(POD)活性则以D0组最高。因此，连续投喂0.2%中草药饲料以及1周0.4%中草药饲料-2周对照饲料的策略可以使凡纳滨对虾获得较好的生长性能和免疫机能。
Abstract:Nine treatments are designed to assess the effects of different concentration and feeding strategy of dietary Chinese herbs on the growth performance, digestive enzymes and non-specific immunity of Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei. The treatments include group D0, D2, D4 (fed with basic diet, 0.2%, 0.4% Chinese herbs continuously); group 1D2-1D0, 1D4-1D0 (fed with 0.2%, 0.4% herb-containing diet for 1 week and then with basic diet for 1 week); group 1D2-2D0, 1D4-2D0 (fed with 0.2%, 0.4% herb-containing diet for 1 week and then with basic diet for 2 weeks); group 1D2-3D0, 1D4-3D0 (fed with 0.2%, 0.4% herb-containing diet for 1 week and then with basic diet for 3 weeks). The results indicate that the weight gain of group D2 and 1D4-2D0 are significantly higher than that of group D0;feed efficiency of shrimps fed with diet D2 is lower than those fed with diet D0;and the survival of group D4 is particularly lower than that of group D0 and 1D4-1D0. The activities of liver catharsis and the concentration of total protein (TP) in haemolymph of group D0 are lowest, while alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and peroxidase (POD) are highest. However, the highest activities of superoxide dismutase (SOD) and alkaline phosphatase (AKP) are observed in group 1D4-1D0. In conclusion, the strategies of feeding with 0.2% Chinese herb continuously and with 0.4% herb-containing diet for 1 week following with basic diet for 2 weeks can improve the growth performance and immunity of L.vannamei.
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Keywords:
- Litopenaeus vannamei /
- Chinese herbs /
- growth /
- blood biochemical index
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中草药含有丰富的有机酸类、生物碱、聚糖类等多种免疫活性因子，可通过影响非特异性免疫系统、激活和诱生多种细胞因子等途径提高生物体免疫力，并且具有天然、高效、低残留、不易导致耐药性等优点[1-2]。饲料中添加中草药不仅能提高养殖动物的抗病能力，同时也能通过提高养殖动物消化酶活性达到促生长的作用[3-5]。然而，中草药的过量使用并不能进一步提高水产动物的增重率和成活率[6-7]，不仅中草药的剂量变化会影响中草药发挥改善生长性能和提高免疫能力，投喂策略的变化更对中草药制剂、葡聚糖等免疫增强剂的效用发挥会产生巨大影响[8-9]。RENGPIPAT等[10]研究发现7 d投喂葡聚糖+7 d投喂对照饲料的间隔投喂方式可以使斑节对虾(Penaeus monodon)获得比连续摄食葡聚糖时更好的免疫能力，因为间隔投喂的方式可以在一定程度上消除因长时间投喂葡聚糖所造成的免疫疲劳；葡聚糖间隔投喂的策略可使凡纳滨对虾获得比连续投喂更高的增重率[9, 11]。因此，适当的投喂剂量和合理的投喂策略对于降低成本和提高生产效率都至关重要。
文章通过在饲料中添加不同浓度的复方中草药以及采用不同的投喂方式以评估投喂策略对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、消化酶及非特异性免疫功能的影响。
1. 材料与方法
1.1 试验饲料的配制
试验选取以黄芪(Astragalus membranaceus)、板蓝根(Baphicacanthus cusia)、藿香(Herba agastaches)、大青叶(Isatidis folium)等为主要成分的中草药饲料添加剂“健宝”为试验材料；分别按饲料质量0、0.2%、0.4%的比例加入饲料中，制成对照饲料、含0.2%中草药饲料和含0.4%中草药饲料等3种试验饲料。采用泰山牌对虾料(粉料)，加入复方中草药饲料添加剂，称量搅拌，再加水约40%，混匀，制成粒径1.5 mm饲料，晒干后于－20 ℃冰箱中保存、备用。饲料的营养组成为蛋白质(43.12±0.11)%，脂肪(5.36±0.15)%，水分(7.87±0.01)%，灰分(15.97±0.01)%。
1.2 试验对虾及养殖管理
试验凡纳滨对虾取自海南三亚红沙地区养殖场，在中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心进行试验。试验前在室外玻璃纤维桶(500 L)暂养2周，暂养期间投喂对照组饲料。暂养结束后挑选大小均匀的健康对虾(2.92±0.05)g随机分成9组，分别为D0组(对照饲料连续投喂)；D2组(含0.2%中草药饲料连续投喂)；D4组(含0.4%中草药饲料连续投喂)；1D2-1D0组(1周投喂含0.2%中草药饲料-1周投喂对照饲料)；1D4-1D0组(1周投喂含0.4%中草药饲料-1周投喂对照饲料)；1D2-2D0组(1周投喂含0.2%中草药饲料-2周投喂对照饲料)；1D4-2D0组(1周投喂含0.4%中草药饲料-2周投喂对照饲料)；1D2-3D0组(1周投喂含0.2%中草药饲料-3周投喂对照饲料)；1D4-3D0组(1周投喂含0.4%中草药饲料-3周投喂对照饲料)；每组设3个重复，每个重复40尾。每天投喂3次(08: 00、16: 00和21: 00)，饱食投喂，投喂量约为虾体质量的6%~8%，根据天气和对虾的摄食情况适当调节投喂量，试验周期为8周。连续充气，试验期间水质状况为水温28~31 ℃，pH 7.3~8.7，溶解氧4.2~6.2 mg · L-1。
1.3 样品采集及生长指标测定
饲养试验结束时，先空腹24 h，再分别测量每组对虾体质量、数量以及饲料用量，计算增重率、成活率和饲料系数，计算公式为：
增重率(%)=[(试验末均质量-试验初均质量)/试验初体质量]×100
成活率(%)=(试验末尾数/试验初尾数)×100
饲料系数=虾均饲料摄入量/(试验末均质量-试验初均质量)
每池随机选取13尾试验虾，其中3尾用于检测全虾体成分；另10尾使用1 mL注射器从试验虾的头胸甲后缘与第一腹节的连接处取血淋巴液，4 ℃、5 000 r · min-1离心15 min，取上清液置于-80 ℃冰箱保存备用；然后取对虾10尾，取肠道和肝胰腺，并去除肠道内杂质后置于-80 ℃冰箱保存备用。
1.4 全虾体成分分析
试验饲料、全虾样品中的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分分别根据AOAC[12]的标准方法进行测定。其中水分的测定采用105 ℃常压干燥法；粗蛋白采用凯氏定氮法(1030-Auto-analyzer，Tecator AB，Höganäs，Sweden)；粗脂肪采用索氏抽提法(HT6，Tecator AB，Höganäs，Sweden)；灰分采用550 ℃的灼烧法。
1.5 消化酶指标测定
样品制备参照WANG和XU[13]的方法。将各个消化器官的组织在磷酸缓冲液(0.02 mol · L-1，pH 7.5)(0.2 g · mL-1)中用玻璃匀浆器冰浴匀浆，然后用冷冻离心机在4 ℃、10 000 r · min-1离心30 min，所得到的上清液作为消化酶分析样品，在4 ℃保存，24 h内分析完毕。酶液中可溶性蛋白浓度用BRADFORD[14]方法测定，用牛血清蛋白做标准曲线。酶的活力单位定义为在37 ℃、相应的pH条件下每分钟催化底物释放1 μg的产物所需要的酶量。特定的酶比活力定义为酶活力单位每毫克蛋白(U · mg-1)。其中胃消化酶在pH 3.0时测定，其他组织消化酶在pH 7.5条件下测定。
蛋白酶的测定参照ANSON[15]的方法，用酪氨酸做标准曲线，以福林酚试剂作为显色剂，分别用1.5%的酪蛋白(Sigma)和1.5%的牛血红蛋白(Sigma)作为碱性蛋白酶和酸性蛋白酶的底物，测定吸光度(OD680 nm)。淀粉酶的测定参照BERNFELD[16]的方法，以DNS试剂为显色剂，用麦芽糖做标准曲线，以1%的可溶性淀粉做底物，测定吸光度(OD520 nm)。
1.6 血浆生化指标及非特异性免疫指标测定
血浆生化指标采用全自动生化分析仪(Hitachi 7170，日本产)及试剂盒(Daiichi Pure Chemicals Co.，Ltd，日本产)进行分析，主要测定谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)和尿素氮(BUN)等。
采用南京建成生物研究所生产的试剂盒，测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)等指标。
1.7 统计分析
采用Excel 2007和SPSS 13.0软件对数据进行统计分析。先对数据作单因素方差分析(ANOVA)，处理若有显著差异，再作Duncan′s法多重比较，P＜0.05表示差异显著，所有数值用平均数±标准差(x±SD)表示。
2. 结果
2.1 对生长性能及全虾体组成的影响
饲料中复方中草药剂量的递增及投喂方式的改变对凡纳滨对虾的生长性能产生了显著影响(表 1)。连续投喂含0.2%中草药饲料的D2组及1周投喂含0.4%中草药饲料-2周投喂对照饲料1D4-2D0组的增重率显著高于连续投喂基础饲料的D0组；1周投喂含0.2%中草药饲料-3周投喂对照饲料的1D2-3D0组的增重率显著低于D0组；而其他各组与D0组没有明显差别。终末均质量和饵料系数的变化规律与增重率基本相似；但D0组的终末均质量显著高于1D2-1D0、1D2-3D0和1D4-3D0组，却与D2和1D4-2D0 2组间没有明显区别；同时，D2组的饵料系数显著低于D0组，以及1D2-3D0组显著高于D0组，其他各组与D0组没有明显差别。此次试验的成活率均高于90%，D4组显著低于D0组和1D4-1D0组，其他各组间的成活率无显著性差异。
表 1 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾生长性能的影响Table 1. Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on growth performance of Pacific white shrimp, L.vannamei处理treatment 成活率/% survival 终末均质量/g final mean body weight 增重率/% weight gain 饵料系数feed efficiency D0 98.89±1.93bc 18.00±0.08bc 508.57±2.21b 1.64±0.04b D2 97.78±1.93abc 18.84±0.25c 545.14±5.62c 1.53±0.02a D4 92.22±5.09a 17.06±0.13ab 492.49±5.65ab 1.68±0.12b 1D2-1D0 96.67±3.34abc 16.71±0.76a 474.18±25.04ab 1.70±0.02bc 1D4-1D0 100.00±0.00c 17.79±0.44b 505.88±23.25b 1.65±0.03b 1D2-2D0 97.78±1.93abc 17.23±0.67ab 486.12±22.53ab 1.69±0.06bc 1D4-2D0 95.56±5.09abc 18.80±0.14c 546.47±11.73c 1.65±0.06b 1D2-3D0 93.33±3.34ab 16.46±1.00a 460.60±34.48a 1.80±0.09c 1D4-3D0 95.56±3.85abc 16.50±0.68a 470.72±21.42ab 1.72±0.01bc 注：同列数据不同字母者之间表示存在显著差异(P＜0.05)，后表同此
Note：Values in the same column with different letter are significantly different (P＜0.05), the same case in the following tables.投喂策略的改变对凡纳滨对虾全虾蛋白含量产生了一定的影响(表 2)。其中D2组的蛋白含量最高，且显著高于蛋白含量最低的1D4-3D0组，而其他各组与D2组、1D4-3D0组以及相互之间都没有显著性差异。全虾水分、全虾脂肪和全虾灰分都没有受到复方中草药投喂策略改变的影响。
表 2 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾全虾体组成的影响Table 2. Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on whole body composition of Pacific white shrimp, L.vannamei% 处理treatment 水分moisture 蛋白protein 脂肪lipid 灰分ash D0 74.57±0.30 18.55±0.20ab 1.36±0.27 3.15±0.16 D2 73.21±0.71 19.36±0.29b 1.27±0.14 3.10±0.13 D4 74.08±0.45 18.87±0.23ab 1.39±0.20 2.95±0.21 1D2-1D0 74.70±1.68 18.66±0.38ab 1.22±0.40 2.97±0.11 1D4-1D0 74.56±1.23 18.82±0.76ab 1.34±0.05 2.90±0.41 1D2-2D0 74.72±0.40 18.51±0.27ab 1.25±0.20 3.14±0.05 1D4-2D0 74.28±1.09 19.10±0.39ab 1.07±0.13 3.03±0.20 1D2-3D0 74.75±1.21 18.73±0.70ab 1.05±0.30 3.13±0.02 1D4-3D0 74.70±0.92 18.38±0.60a 1.44±0.16 3.14±0.03 2.2 对消化酶活性的影响
各个消化器官中蛋白酶和淀粉酶的活性受到了中草药投喂策略改变的明显影响(表 3)。所有摄食复方中草药的凡纳滨对虾的肝胰腺中蛋白酶活性均高于摄食对照饲料的D0组，并且仅有D4组的肝蛋白酶活性与D0组没有显著性差异；而凡纳滨对虾肠道中蛋白酶活性以1D4-2D0组和D2组最低，而1D2-3D0组最高，且均与其他各组具有显著性差异；肝胰腺中淀粉酶活性以1D4-2D0组最高，D2组次之，而1D4-3D0组最低，并且1D4-2D0组和1D4-3D0组与其他各组间均有显著性差异；肠道中淀粉酶活性以D2组最低，1D4-3D0组次之，而1D2-1D0组最高，并且D2组和1D2-1D0组的淀粉酶活性与其他各组有明显差异。
表 3 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾消化酶活性的影响Table 3. Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on digestive enzymes of Pacific white shrimp, L.vannameiU·mg·g-1 处理treatment 肝胰腺蛋白酶liver cathepsin 肠蛋白酶intestinal cathepsin 肝淀粉酶liver amylase 肠淀粉酶intestinal amylase D0 59.27±8.30a 32.23±2.18cd 217.59±8.67c 226.62±13.20e D2 75.61±8.96cd 16.22±0.40a 255.80±11.50e 78.29±4.91a D4 64.14±4.45ab 29.29±6.04bc 196.21±14.67b 120.75±12.17bc 1D2-1D0 76.27±7.50cd 24.63±1.57b 239.83±9.81de 272.40±13.94f 1D4-1D0 70.52±1.91bc 37.79±6.45de 237.48±6.68d 208.48±12.79de 1D2-2D0 80.35±1.78cd 40.40±5.20e 251.24±10.41de 203.79±11.59d 1D4-2D0 82.56±5.26d 14.81±4.02a 304.56±6.47f 135.79±12.22c 1D2-3D0 79.45±5.25cd 55.15±3.32f 185.95±7.96b 226.59±10.31e 1D4-3D0 82.39±0.95cd 36.07±2.99cde 164.46±10.38a 112.84±7.00b 2.3 对血淋巴生化及非特异性免疫指标的影响
复方中草药投喂策略的改变对凡纳滨对虾血淋巴生化指标产生了显著影响(表 4)。摄食对照饲料的D0组凡纳滨对虾的血淋巴中的AST和ALT含量显著高于摄食含有复方中草药饲料的其他各组，ALT的最低值则出现在1D2-3D0组，与此同时，AST的最低值则出现在D2组；D0组血淋巴中的TP值最低，而1D4-2D0组的TP值则最高，D2组和1D4-3D0组次之，并且均与其他各组具有显著性差异；血淋巴中BUN的最高水平出现在1D4-2D0组，而最低值则出现在D2组。
表 4 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾血淋巴生化及非特异性免疫指标的影响Table 4. Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on biochemical and non-specific immunity parameters of Pacific white shrimp, L.vannamei处理treatment 血淋巴生化指标haemolymph biochemical parameters 非特异性免疫指标non-specific immunity parameters 谷丙转氨酶/U·L-1 ALT 谷草转氨酶/U·L-1 AST 总蛋白/g·L-1 TP 尿素氮/mmol·L-1 BUN 超氧化物歧化酶/U·mL-1 SOD 过氧化物歧化酶/U·mL-1 POD 碱性磷酸酶/U·mL-1 AKP D0 285.00±4.00f 468.50±16.50e 6.07±0.74a 5.20±0.050cd 145.69±27.33b 474.07±17.05d 17.40±1.86abc D2 170.67±8.39d 350.33±13.80a 10.80±1.57c 3.80±0.20a 166.05±9.67bc 453.48±25.39cd 22.88±2.20d D4 105.33±4.04b 358.78±13.92a 16.47±1.48e 4.33±0.21ab 77.13±24.26a 433.78±3.08c 12.70±1.56a 1D2-1D0 151.33±6.11c 412.00±11.79cd 8.43±0.18b 4.70±0.46bc 221.75±22.27d 449.33±16.71cd 20.19±3.77bcd 1D4-1D0 189.67±8.39e 388.78±9.05bc 9.54±0.79bc 4.03±0.40a 258.18±18.66e 444.00±11.62cd 22.76±3.77d 1D2-2D0 137.67±8.50c 358.00±13.53a 13.28±1.25d 5.17±0.23cd 230.32±18.27de 361.78±12.81a 21.21±3.57cd 1D4-2D0 151.33±6.66c 369.22±18.04ab 19.34±2.03f 5.52±0.28d 169.63±10.33bc 398.67±26.77b 17.55±1.78abc 1D2-3D0 65.67±5.03a 392.11±13.84bc 7.75±0.55ab 4.63±0.15bc 178.90±10.33bc 362.07±8.25a 15.73±1.78ab 1D4-3D0 201.33±18.01e 419.67±12.34d 15.79±1.47e 4.93±0.21c 188.54±19.64c 383.56±27.24ab 18.64±2.52bcd 采用不同的复方中草药投喂策略饲养凡纳滨对虾会使其血淋巴中各种非特异性免疫相关酶的活性产生显著性差异(表 4)。血淋巴中SOD活性以D4组最低而1D4-1D0组最高，其中1D2-2D0组与1D4-1D0组没有显著性差异，其他各组与D4组和1D4-1D0组均有明显差别；D0组的POD活性最高，D2组、1D2-1D0组和1D4-1D0组紧随其后，其他各组的POD活性则显著低于D0组，其中以1D2-2D0组的活性最低；而血淋巴中AKP活性则以D2组和1D4-1D0组较高，D4组最低。
3. 讨论
董晓慧等[17]将对虾增重率与复方中草药添加水平进行回归分析，发现两者之间存在显著的正相关，可见复方中草药制剂与凡纳滨对虾生长之间存在一定的剂量效应关系。此试验中摄食含0.2%复方中草药饲料的D2组的增重率显著高于连续投喂基础饲料的D0组，而摄食含0.4%复方中草药饲料的D4组的增重率与D0组没有明显差别，这表明对于连续投喂策略，0.2%的复方中草药含量即可改善凡纳滨对虾的生长性能，继续增加饲料中复方中草药的含量并不能进一步提高增重率。这与其他学者的研究结果相似[6-7]。当采用对照饲料和试验饲料间隔投喂策略时，仅有1周投喂含0.4%中草药饲料-2周投喂对照饲料1D4-2D0组的增重率显著高于D0组；而其他各组的增重率与D0组持平甚至更低；说明1周投喂含0.4%中草药饲料-2周投喂对照饲料的方式能够明显改善凡纳滨对虾的生长性能。张健[9]研究证实，采用投喂2 d葡聚糖-5 d基础饲料的方式可显著提高凡纳滨对虾的生长。同样，LÓPEZ等[11]也发现采用投喂7 d葡聚糖-7 d基础饲料的方式可以使凡纳滨对虾获得更高的特定生长率。然而王芸等[8]采用6 d 1%中草药饲料-6 d基础饲料的投喂策略却未能明显改善凡纳滨对虾的生长性能，这可能与该种投喂策略未能契合凡纳滨对虾生理状态的变化规律有关。
复方中草药制剂对水产动物的促生长作用可能与中草药中含有多种营养成分、生物活性物质及通过调节对虾肠道消化酶和肠道菌群的组成而促进对饲料中营养成分的消化吸收有关[8, 18]。王芸等[19]认为黄芪含有黄芪多糖、黄酮类化合物、皂苷、葡萄糖、氨基酸等机体必需的营养成分，将黄芪添加到饲料中可以有效提高凡纳滨对虾的生长性能；而板蓝根及地上部分(大青叶)则含有包括板蓝根多糖、1-硫氰酸-2-羟基-3-丁烯、5-乙烯噁唑烷-2-硫酮、腺苷、B-谷甾醇、靛玉红及多种氨基酸等活性成分，具有清热泻火和提高免疫能力的功能[17, 20-21]；藿香属植物中主要含挥发油、萜类、黄酮类、醇、酸、酮、醛等类化合物，具有化湿和胃及祛暑解表的作用[22]。其中黄芪多糖、板蓝根多糖和黄酮类化合物对特异性及非特异性、体液免疫、细胞免疫均起到一定的促进作用，靛玉红和板蓝根二酮B是抗肿瘤的主要活性物质，能够有效提高对虾的免疫机能；皂苷、腺苷、B-谷甾醇等物质能促进甲壳动物蜕皮，藿香挥发油能促进消化液分泌，提高消化能力，从而提高对虾的生长性能；葡萄糖、氨基酸等营养物质对于对虾的生长也有促进作用[17, 19-23]。丁贤等[3]也证实了复方中草药可以显著提高水产动物肝胰腺和肠道中消化酶活性，促进营养物质的消化吸收，提高其生长性能。林黑着等[24]研究发现在饲料中添加复方中草药并不能连续不断地提高消化酶的活性，其活性会随着摄食中草药的时间出现先升高再降低的现象；并且中草药对淀粉酶的影响幅度小于蛋白酶，这可能是由于对虾的生长对饲料蛋白养分需求较高，复方中草药的添加促进了消化酶的分泌所引起；在笔者试验中也出现了类似的现象。凡纳滨对虾摄食复方中草药1周后蛋白酶活性出现最大值，3周时蛋白酶活性明显降低，并且0.4%中草药组的降低幅度高于0.2%中草药组，这可能是动物本身需要对消化机能的自我调节，保持相关机能的稳定，同时，也可能是中草药作用极限性的问题[24]。因此，试验中D2组和1D4-2D0组具有较高的肝蛋白酶、淀粉酶活性、体蛋白沉积以及增重率。
甲壳动物缺乏免疫球蛋白，其体液免疫依靠血淋巴中的一些非特异性酶或因子来进行[25]；AKP、SOD和POD是生物体中重要的酶类，参与多种生理代谢反应[4]；血淋巴中AST、ALT和TP含量则是评估水产动物健康的常用指标[26]。笔者试验中所有摄食含有复方中草药饲料的凡纳滨对虾血淋巴中AST和ALT值均低于摄食对照饲料的D0组，与此同时，TP值却高于D0组，说明复方中草药可以有效保护动物机体，降低肝胰腺的损伤。这可能是因为机体代谢与合成系统受激活，引起体液反应，合成了特异性的多肽；或者是血清蛋白含量的升高使血清中溶菌物质、杀菌物质等体液因子水平升高，从而提高虾自身抵抗疾病的能力[27]。同时，摄食复方中草药后，各试验组凡纳滨对虾血淋巴中SOD活性得到不同程度的提高，说明复方中草药中有效成分可以激活血清SOD活力[8]；但是D2组、D4组、1D2-3D0组和1D4-3D0组的SOD活性略低于其他试验组，D2组和D4组的SOD值相对较低是因为长时间的中草药刺激使凡纳滨对虾出现免疫疲劳[24, 28]，而1D2-3D0组和1D4-3D0组则是因为停止投喂含有中草药的饲料后，凡纳滨对虾体内被中草药所激活的SOD在清除自由基的过程中不断消耗而逐渐降低[8]。各试验组的AKP值也有类似的变化趋势。而摄食复方中草药的各组的POD值均低于D0组，并且随着间隔投喂时间的增加而略有降低，说明复方中草药对POD活力没有明显的激活作用，这与林黑着等[24]的研究结果相似。刘丽平等[29]用6味中药组成的制剂饲喂青虾(Macrobrachium nipponense)，也发现其肝胰脏组织中AKP和SOD显著高于对照组，而POD活性没有变化。中草药作为免疫增强剂，既可以抑制自由基的产生，又可直接消除自由基，还可以增强机体本身抗氧化系统的功能，从多个环节阻断自由基对机体的损伤作用[30]；然而中草药的调节作用是双向的，即对亢进的状态可抑制其降到正常水平，又可把抑制状态调至兴奋，直至正常状态[31]。试验通过1周投喂0.4%含中草药的饲料-1周投喂对照饲料的方式对连续投喂0.4%中草药所造成的免疫疲劳进行了有效缓解，使1D4-1D0组保持了最佳的抗应激状态和获得了最高的成活率；而1周投喂0.4%含中草药的饲料-2周投喂对照饲料的方式也能在一定程度上缓解连续投喂高剂量中草药所造成的免疫疲劳。BAI等[32]发现采用投喂β-葡聚糖7 d-对照饲料7 d或投喂β-葡聚糖2 d-对照饲料5 d的方式，可使凡纳滨对虾的PO酶和SOD酶活性一直保持较高的水平，并且明显高于对照组的水平。RENGPIPAT等[10]在养殖斑节对虾时，也发现7 d投喂葡聚糖-7 d投喂对照饲料的间隔投喂方式可以在一定程度上消除因长时间投喂葡聚糖所造成的免疫疲劳。因此，每天投喂高剂量的免疫增强剂会造成凡纳滨对虾的免疫疲劳，而间隔投喂可保持血淋巴细胞消耗与补偿之间的平衡，从而在较长的时间里保持虾体内较高的免疫水平[9, 11, 32]。
连续投喂含0.4%复方中草药的饲料会使凡纳滨对虾产生免疫疲劳，阻碍非特异性免疫因子发挥正常效用，降低凡纳滨对虾的成活率；连续投喂含0.2%复方中草药以及1周投喂0.4%含中草药的饲料-2周投喂对照饲料的策略可以通过避免或者缓解免疫疲劳的方式，使凡纳滨对虾具有较好的消化吸收以及抗应激的能力，从而获得较好的生长性能和保持最佳的免疫机能。
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表 1 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾生长性能的影响
Table 1 Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on growth performance of Pacific white shrimp, L.vannamei
处理treatment 成活率/% survival 终末均质量/g final mean body weight 增重率/% weight gain 饵料系数feed efficiency D0 98.89±1.93bc 18.00±0.08bc 508.57±2.21b 1.64±0.04b D2 97.78±1.93abc 18.84±0.25c 545.14±5.62c 1.53±0.02a D4 92.22±5.09a 17.06±0.13ab 492.49±5.65ab 1.68±0.12b 1D2-1D0 96.67±3.34abc 16.71±0.76a 474.18±25.04ab 1.70±0.02bc 1D4-1D0 100.00±0.00c 17.79±0.44b 505.88±23.25b 1.65±0.03b 1D2-2D0 97.78±1.93abc 17.23±0.67ab 486.12±22.53ab 1.69±0.06bc 1D4-2D0 95.56±5.09abc 18.80±0.14c 546.47±11.73c 1.65±0.06b 1D2-3D0 93.33±3.34ab 16.46±1.00a 460.60±34.48a 1.80±0.09c 1D4-3D0 95.56±3.85abc 16.50±0.68a 470.72±21.42ab 1.72±0.01bc 注：同列数据不同字母者之间表示存在显著差异(P＜0.05)，后表同此
Note：Values in the same column with different letter are significantly different (P＜0.05), the same case in the following tables.
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表 2 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾全虾体组成的影响
Table 2 Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on whole body composition of Pacific white shrimp, L.vannamei
% 处理treatment 水分moisture 蛋白protein 脂肪lipid 灰分ash D0 74.57±0.30 18.55±0.20ab 1.36±0.27 3.15±0.16 D2 73.21±0.71 19.36±0.29b 1.27±0.14 3.10±0.13 D4 74.08±0.45 18.87±0.23ab 1.39±0.20 2.95±0.21 1D2-1D0 74.70±1.68 18.66±0.38ab 1.22±0.40 2.97±0.11 1D4-1D0 74.56±1.23 18.82±0.76ab 1.34±0.05 2.90±0.41 1D2-2D0 74.72±0.40 18.51±0.27ab 1.25±0.20 3.14±0.05 1D4-2D0 74.28±1.09 19.10±0.39ab 1.07±0.13 3.03±0.20 1D2-3D0 74.75±1.21 18.73±0.70ab 1.05±0.30 3.13±0.02 1D4-3D0 74.70±0.92 18.38±0.60a 1.44±0.16 3.14±0.03
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表 3 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾消化酶活性的影响
Table 3 Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on digestive enzymes of Pacific white shrimp, L.vannamei
U·mg·g-1 处理treatment 肝胰腺蛋白酶liver cathepsin 肠蛋白酶intestinal cathepsin 肝淀粉酶liver amylase 肠淀粉酶intestinal amylase D0 59.27±8.30a 32.23±2.18cd 217.59±8.67c 226.62±13.20e D2 75.61±8.96cd 16.22±0.40a 255.80±11.50e 78.29±4.91a D4 64.14±4.45ab 29.29±6.04bc 196.21±14.67b 120.75±12.17bc 1D2-1D0 76.27±7.50cd 24.63±1.57b 239.83±9.81de 272.40±13.94f 1D4-1D0 70.52±1.91bc 37.79±6.45de 237.48±6.68d 208.48±12.79de 1D2-2D0 80.35±1.78cd 40.40±5.20e 251.24±10.41de 203.79±11.59d 1D4-2D0 82.56±5.26d 14.81±4.02a 304.56±6.47f 135.79±12.22c 1D2-3D0 79.45±5.25cd 55.15±3.32f 185.95±7.96b 226.59±10.31e 1D4-3D0 82.39±0.95cd 36.07±2.99cde 164.46±10.38a 112.84±7.00b
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表 4 复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾血淋巴生化及非特异性免疫指标的影响
Table 4 Effects of feeding strategy of dietary Chinese herbs on biochemical and non-specific immunity parameters of Pacific white shrimp, L.vannamei
处理treatment 血淋巴生化指标haemolymph biochemical parameters 非特异性免疫指标non-specific immunity parameters 谷丙转氨酶/U·L-1 ALT 谷草转氨酶/U·L-1 AST 总蛋白/g·L-1 TP 尿素氮/mmol·L-1 BUN 超氧化物歧化酶/U·mL-1 SOD 过氧化物歧化酶/U·mL-1 POD 碱性磷酸酶/U·mL-1 AKP D0 285.00±4.00f 468.50±16.50e 6.07±0.74a 5.20±0.050cd 145.69±27.33b 474.07±17.05d 17.40±1.86abc D2 170.67±8.39d 350.33±13.80a 10.80±1.57c 3.80±0.20a 166.05±9.67bc 453.48±25.39cd 22.88±2.20d D4 105.33±4.04b 358.78±13.92a 16.47±1.48e 4.33±0.21ab 77.13±24.26a 433.78±3.08c 12.70±1.56a 1D2-1D0 151.33±6.11c 412.00±11.79cd 8.43±0.18b 4.70±0.46bc 221.75±22.27d 449.33±16.71cd 20.19±3.77bcd 1D4-1D0 189.67±8.39e 388.78±9.05bc 9.54±0.79bc 4.03±0.40a 258.18±18.66e 444.00±11.62cd 22.76±3.77d 1D2-2D0 137.67±8.50c 358.00±13.53a 13.28±1.25d 5.17±0.23cd 230.32±18.27de 361.78±12.81a 21.21±3.57cd 1D4-2D0 151.33±6.66c 369.22±18.04ab 19.34±2.03f 5.52±0.28d 169.63±10.33bc 398.67±26.77b 17.55±1.78abc 1D2-3D0 65.67±5.03a 392.11±13.84bc 7.75±0.55ab 4.63±0.15bc 178.90±10.33bc 362.07±8.25a 15.73±1.78ab 1D4-3D0 201.33±18.01e 419.67±12.34d 15.79±1.47e 4.93±0.21c 188.54±19.64c 383.56±27.24ab 18.64±2.52bcd
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百度学术
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