Study on adhesion characteristics of fouling organisms of ultra-high molecular weight polyethylene and copper alloys mesh
-
摘要:
为研究不同材质网衣的污损生物附着效果，于2022年3—5月 (春季) 和6—8月 (夏季) 在福建莆田南日岛海域开展超高分子量聚乙烯网衣和铜合金网衣的现场挂网实验。结果表明：两种网衣污损生物的附着呈现出一定的季节性差异，两种网衣污损生物的密实度、种类数量、优势种种类数、湿质量和密度均表现为春季低于夏季。其中，超高分子量聚乙烯网衣春、夏季的密实度平均值分别为47.19%、86.98%，污损生物的湿质量平均值分别为 (144.83±15.69)、(1 054.59±34.81) g·网−1，密度平均值分别为 (2 699±49)、(4 630±53) 个·网−1，种类数分别为12、35种，优势种种类数分别为4、6种；铜合金网衣春、夏季的密实度平均值分别为41.04%、74.95%，污损生物的湿质量平均值分别为 (118.32±20.13)、(876.25±23.16) g·网−1，密度平均值分别为 (2 678±42)、(3 870±64) 个·网−1，种类数分别为12、19种，优势种种类数分别为3、4种。春、夏季高分子量聚乙烯网衣污损生物的密实度、种类数 (春季相同)、优势种种类数 (春季相同)、湿质量和密度平均值均高于铜合金网衣。海水温度的变化是污损生物季节性差异的主要原因，铜合金网衣的防污损生物附着效果优于高分子量聚乙烯网衣。
-
关键词:
- 污损生物 /
- 超高分子量聚乙烯网衣 /
- 铜合金网衣 /
- 附着特征
Abstract:In order to study the adhesion characteristics of fouled organisms on different materials of mesh, we had carried out on-site hanging experiments of ultra-high molecular weight polyethylene mesh and copper alloy mesh in the waters of Nanri Island, Putian City, Fujian Province during March−May 2022 (Spring) and June−August 2022 (Summer). The results reveal that the attachment of the two kinds of fouled organisms showed certain seasonal differences. The compactness, quantity of species, quantity of dominant species, wet mass and density of the two net-coated stained organisms were lower in spring than in summer. In spring and summer, for ultra-high molecular weight polyethylene mesh, the average compactnesses were 47.19% and 86.98%, respectively; the average wet masses of fouling organisms were (144.83±15.69) and (1 054.59±34.81) g·net−1, respectively; the average densities were (2 699±49) and (4 630±53) ind·net−1, respectively; the quantities of species were 12 and 35, respectively; the quantities of dominant species were 4 and 6, respectively. In spring and summer, for copper alloy mesh, the average compactnesses were 41.04% and 74.95%, respectively; the average wet masses of fouling organisms were (118.32±20.13) and (876.25±23.16) g·net−1, respectively; the average densities were (2 678±42) and (3 870±64) ind·net−1, respectively; the quantities of species were 12 and 19, respectively; the quantities of dominant species were 3 and 4, respectively. The compactness, quantity of species (The same in spring), quantity of dominant species (The same in spring), wet mass and density of ultra-high molecular weight polyethylene mesh were higher than those of copper alloy mesh in spring and summer. The change of seawater temperature is the main reason for the seasonal difference of fouling organisms, and the anti-fouling biological adhesion effect of copper alloy mesh is better than that of ultra-high molecular weight polyethylene mesh.
-
微卫星(microsatellite)DNA是由1~6个核苷酸为单位多次串联重复的简单序列，又称简短串联重复序列(short tandem repeat，STR)、简单序列重复(simple sequence repeat，SSR) 或简单序列长度多态性(simple sequence length polymorphism，SSLP)，是20世纪80年代末发展起来的一种分子标记。微卫星具有高度的多态性[1]和共显性，在真核生物基因组中随机分布，每代变异超过2%[2]。其分析可以分辨一个碱基对的差异[3]，且等位基因的条带易于识别和解释，比其它分子标记带来更多的信息量[4]。因此在种群遗传结构分析、种群遗传多样性检测、遗传图谱的构建及生产性状位点的连锁分析与QTL定位分析中得到了广泛的应用[5-7]。
由于不同种类之间的微卫星引物序列通用性较差。因此必须首先从实验生物基因组中获得微卫星DNA序列，设计引物，筛选多态性微卫星标记。然而筛选微卫星座位的工作繁重，其使用受到一定的限制。随着分子生物学技术的发展，相继产生了一些新的微卫星DNA分离方法。本文对几种微卫星位点分离技术进行介绍并对其进行分析比较，为选择适合的方法提供参考。
1. 微卫星位点的分离方法
1.1 生物信息学方法(Data mining)与近缘种交叉扩增(cross amplification)
获得微卫星最简捷的途径就是通过互连网从公共数据库(如EMBL、GenBank、EST数据库等)查找微卫星DNA，如河豚(Fugu rubripes)[8]、中国明对虾(Fenneropenaeus orientalis)[9]和栉孔扇贝(Chlamys farreri)[10]等。徐鹏等[9]利用生物信息学方法从10 446个中国明对虾ESTs序列中筛选微卫星DNA，共发现微卫星序列229个，占整个ESTs数据的2.19%，其中含双碱基重复序列146个和3碱基重复序列58个，分别占在ESTs微卫星序列总数的63.76%和25.33%，大部分为完美型(perfect)的重复序列。根据筛选的微卫星序列设计19对引物并进行多态性检测，在有扩增产物的16对引物中，首次筛选得到8个中国明对虾微卫星标记。其次，利用近缘种的已知微卫星引物进行交叉扩增(cross amplification)筛选也可获得一定的有效微卫星引物。鲁双庆等[11]研究了鲤(Cyprinus carpio)微卫星引物对远缘种黄鳝(Monopteras albus)的适用性。结果显示，31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模板扩增出特异性带谱。每对引物扩增的等位基因数3~13个，平均每个位点5.6个，显示了较高的多态性。林凯东等[12]首次将鲤的微卫星引物用于草鱼(Ctenopharyngodon idellus)基因组分析。
1.2 小片段DNA克隆法(small DNA fragments cloning)
此方法的基本原理是构建目标生物基因组小片段DNA文库，通过杂交筛选出含有微卫星序列的阳性克隆。首先用限制性内切酶充分消化DNA，琼脂糖凝胶电泳，选取400~900 bp片段克隆，构建基因组文库。然后将重组克隆转移到杂交膜上，采用32P标记的重复序列探针如(AT)n进行杂交，放射自显影，获得阳性克隆、测序，设计PCR引物并进行扩增筛选(图 1)。
![]()
图 1 微卫星分离的小片段克隆法(左)和PIMA方法(右)简图(仿ZANE等，2002)Fig. 1 Schematic presentation of small DNA fragment cloning (left) and PIMA approach (right) for isolation of microsatellite DNA(from: ZANE, et al.2002)孙效文等[13]利用上述方法从鲤鱼文库中筛选2 000个菌落，获得阳性克隆45个，有22个含有微卫星，其中完美型的占63.6%，非完美型的占22.7%，混合型的占13.7%。陈微等[14]用此方法从牙鲆(Paralichthys olivaceus)文库中筛选阳性克隆45个，共得到20个微卫星序列，其中完美型13个，非完美型5个，混合型2个。PANIEGO等[15]也用此方法分离向日葵(Helianthus annnus)微卫星标记。测序503个微卫星克隆，设计了271对微卫星引物。
利用微卫星重复序列作探针筛选基因组文库是一种耗时费力的方法[16]。获得阳性克隆的比例通常较少(0.04%~12%之间)。对于那些基因组中微卫星DNA含量不是很丰富的种类(比如鸟类和植物)，或需要大量的微卫星标记用于研究种群遗传结构[17-18]或构建遗传图谱[19]时，用此方法分离微卫星难以满足需要。
1.3 以RAPD为基础的PCR分离微卫星法(RAPD-based PIMA approach)
为了避免基因组文库的构建和筛选的繁琐性，一些国外学者先后报道用随机扩增多态DNA(RAPD)方法去扩增未知的微卫星序列[20-21]。其中用PCR分离微卫星(PCR isolation of microsatellite approach，PIMA)[22]就是用RAPD引物从目标生物基因组中获得随机扩增片段，这些扩增产物克隆到T-载体上，然后用含有重复序列引物和载体引物筛选阳性克隆、测序(图 1，PIMA支路)。RAPD片段比随机基因组克隆含有较多的微卫星重复序列[23-25]。与传统的方法相比，PIMA省略了DNA酶切、片段大小选择以及接头连接这些步骤，虽然实验操作简单但研究报道较少。
1.4 引物伸长法(Primer extension approach)
基因组DNA酶切后，选一定大小的片段插入到质粒(pBluescript)或噬菌体(M13mp18)载体上，然后转化、洗脱获得含有单链环状DNA(ssDNA)并构建文库。以ssDNA为模板，与含有重复序列的寡聚核苷酸或带有生物素标记的重复序列进行伸长反应，获得富含微卫星位点双链DNA的次级文库。最后Southern杂交或PCR筛选阳性克隆并测序(图 2)。
![]()
图 2 引物伸长富集法PAETKAU(左)和OSTRANDER等(右)的微卫星分离步骤简图(仿ZANE等，2002)Fig. 2 Primer extension enrichment protocolsProcedures of microsatellites isolation from PAETKAU(left)and OSTRANDER, et al.(right) (from: ZANE, et al.2002)OSTRANDER等[26]和PAETKAU[27]运用引物伸长法分别对犬齿类和鲍鱼基因组文库进行实验，并分别获得40%~50%和最高达100%阳性克隆。OSTRANDER等构建了含60 000克隆的单链DNA文库，对于基因组频率低于1%的特定重复序列有600座位(含所需的重复序列)在富集文库中表现出来。并且该方法对分离富含2个寡核苷酸重复序列如(AC)n比较有效，对分离3个和4个寡核苷酸重复序列是否有效还不肯定。此方法实验步骤繁琐使其适用性受到一定限制。
1.5 选择性杂交法(selective hybridization method)
选择性杂交法第一步与传统方法一样，也是基因组DNA经过酶切后与接头或载体连接，用连有接头的DNA片段与标记的重复序列探针选择性杂交，捕获含有微卫星序列的DNA片段。最后PCR扩增、克隆。对重组克隆可直接测序、PCR筛选或Southern blot筛选(图 3)。
![]()
图 3 选择杂交法简图(仿ZANE等，2002)Fig. 3 Schematic representation of selective hybridization protocols(from ZANE, et al.2002)此方法实验步骤简单，报道较多[28-32]。其中酶切片段与接头或载体连接是非常重要的一步，因为连接插入片段的量不足和多联体的形成都会限制下一步的实验。酶切片段大小的选择可以在酶切后[30]或在连接后[31]进行，在连接后选择片段大小有利于去除非特异性连接。重复序列探针与DNA的杂交既可在尼龙膜上[28, 32]也可在包被有链霉亲和素的磁珠上[30-31]进行。LI等[33-34]采用选择杂交法已成功分离出8个皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)微卫星标记。
1.6 磁珠富集法(magnetic beads enrichment method)
磁珠富集法分离微卫星分子标记是一种简单高效的方法[31, 35], 已经应用于一些植物和动物微卫星分子标记的分离[26, 36-37]。实验生物基因组DNA经酶切，连上接头，PCR扩增，与生物素标记的重复序列探针杂交，磁珠富集，构建PCR富集文库(图 4)。然后再进行筛选即可得到微卫星分子标记。可用不同的酶和接头进行酶切、连接。如果按AFLP的方法进行酶切、连接、扩增，再富集，即为FIASCO法(fast isolation by AFLP of sequences containing repeats)[38]。包括单酶切扩增产物富集[38]和双酶切预扩增产物富集[36]。
![]()
图 4 采用磁珠富集法从AFLP片段中分离微卫星标记简图(仿GAO等，2003)Fig. 4 Schematic representation of SSR isolation by magnetic beads from AFLP fragments(from GAO, et al.2003)孙效文等[13]用此方法筛选鲤鱼微卫星标记。获得微卫星314个，完美型占79.0 %，非完美型占14.3 %，混合型占6.7 %，重复次数超过10的有293个，占93.3 %。孙效文等[38]用磁珠富集法分离草鱼微卫星DNA标记。筛选获得阳性克隆132个，86.36 %含有微卫星序列。高国庆等[36]用FIASCO法从AFLP片段中分离花生(Arachis hypogaeal)微卫星DNA标记，结果回收纯化14个片段，测序后发现都含有简单重复序列。从预扩增的AFLP片段中富集SSR可获得较多的含简单重复序列的片段，而选择性扩增的AFLP片段不经富集直接测序的方法效率较低[39]。此方法在其他种类(比如一些鸟类、鱼类、甲壳类和红珊瑚)的富集率在50%~90%[38]。这些研究表明，用生物素-磁珠富集法克隆微卫星效率高，成本低，所获微卫星质量高。
2. 结语
直接克隆法耗时费力且筛选的效率也比较低。引物伸长法虽有所报道，其实验操作繁琐使其适用性受到限制。磁珠富集法是一种高效而简单快速的分离方法，已经应用于一些植物和动物微卫星分子标记的分离。整个过程可在一星期完成。如果利用篮白斑筛选克隆，从理论上讲，每一个白色菌斑都应当含有微卫星序列。但是操作过程中一些因素会影响筛选微卫星效率。最主要的影响因素是磁珠的平衡及洗液和洗涤温度的严格控制。从国内发表的文献上看，目前从基因组分离微卫星的主要方法是小片段克隆法和磁珠富集法以及稍作改进的一些方法。还有一些从基因组中克隆微卫星的方法，但最有效的还是基于PCR扩增的磁珠富集法。
从整体上看，微卫星分子标记在陆生动植物的分离和应用比较早，水产动物起步较晚，大多还处于分离筛选的初级阶段。在国内，只有鲤[41]，对虾[9, 42]，栉孔扇贝[10]等少数种类已分离出微卫星分子标记。网上基因库可利用的资源也还非常有限，远不能满足研究和应用的需要。而我国是一个渔业大国，水产动物种类多，遗传差异大，在遗传多样性分析、连锁图谱构建、数量性状基因(quantitative trait loci, QTL)定位分析、分子标记辅助育种等方面需要大量的微卫星标记。因此，选择有效的分离方法可以加速水产动物尤其主要养殖种类的微卫星分子标记的筛选及其应用进程。随着水产养殖生物的基因组测序和大规模cDNA测序，生物信息学方法分离微卫星DNA及其在近缘种的扩增筛选将越来越受到重视。
-
![]()
图 1 铜合金网衣 (左) 和超高分子量聚乙烯网衣 (右)
Figure 1. Copper alloy mesh (Left) and ultra-high molecular weight polyethylene mesh (Right)
![]()
图 5 不同季节高分子量聚乙烯网衣和铜合金网衣的密实度
Figure 5. Water permeability of ultra-high molecular weight polyethylene mesh and copper alloy mesh in different seasons
![]()
图 6 春、夏季 2 种网衣污损生物的附着情况
注：图中sp代表春季，su代表夏季；3—8代表月份；c代表铜合金网衣，h代表高分子量聚乙烯网衣。
Figure 6. Adhesion of fouled organisms of ultra high molecular polyethylene mesh and copper alloy mesh in different seasons
Note: In the figure, sp represents spring, and su represents autumn; 3−8 represent months, c represents copper alloy mesh, and h represents ultra high molecular polyethylene mesh.
表 1 春、夏季2种网衣污损生物的优势种类统计
Table 1 Statistics of dominant species of fouled organisms for two kinds of net in spring and summer
网衣类型
Type of mesh春季 Spring 夏季 Summer 种名
Species
name数量
Quantity/
(个·网–1)湿质量
Wet mass/
(g·网–1)相对
重要性
指数
IRI种名
Species
name数量
Quantity/
(个·网–1)湿质量
Wet mass/
(g·网–1)相对
重要性
指数
IRI高分子量聚乙烯网衣
Ultra-high molecular
weight polyethylene mesh长颈麦杆虫
Caprella equilibra19 647 25.02 4 740 理石叶钩虾
Jassa marmorata13 326 13.65 3 285 中胚花筒螅
Tubularia mesembryanthemum131 202.42 3 970 长颈麦杆虫
Caprella equilibra10 325 10.17 2 544 理石叶钩虾
Jassa marmorata15 582 7.18 3 451 翡翠股贻贝
Perna viridis4 024 766.58 1 718 厚壳贻贝
Mytilus coruscus2 389 89.44 1 073 中胚花筒螅
Tubularia mesembryanthemum139 349.86 1 549 — — — — 背棘麦杆虫
Caprella caura5 407 13.35 1 367 — — — — 网纹藤壶
Amphibalanus
reticulatu393 639.55 1 146 铜合金网衣
Copper alloy mesh长颈麦杆虫
Caprella equilibra11 300 14.28 3 676 翡翠股贻贝
Perna viridis3 435 675.28 4 138 理石叶钩虾
Jassa marmorata8 929 4.06 2 641 长颈麦杆虫
Caprella equilibra5 392 5.91 2 813 厚壳贻贝
Mytilus coruscus2 520 129.50 1 356 理石叶钩虾
Jassa marmorata4 845 5.60 2 529 — — — — 中胚花筒螅
Tubularia mesembryanthemum103 208.87 1 641 注：—. 未鉴定出。 Note: —. Not identified. 
下载: 导出CSV
-
[1] EDWARDS P, ZHANG W, BELTON B, et al. Misunderstandings, myths and mantras in aquaculture: its contribution to world food supplies has been systematically over reported[J]. Mar Policy, 2019, 106: 103547. doi: 10.1016/j.marpol.2019.103547
[2] BRAITHWAITE R A, CARRASCOSA M C C, MCEVOY L A. Biofouling of salmon cage netting and the efficacy of a typical copper-based antifoulant[J]. Aquaculture, 2007, 262(2/3/4): 219-226.
[3] PHILLIPPI A L, O'CONNOR N J, LEWIS A F, et al. Surface flocking as a possible anti-biofoulant[J]. Aquaculture, 2001, 195(3/4): 225-238.
[4] ECKMAN J E, THISTLE D, BURNETT W C, et al. Performance of cages as large animal-exclusion devices in the deep sea[J]. J Mar Res, 2001, 59(1): 79-95. doi: 10.1357/002224001321237371
[5] CRONIN E R, CHESHIRE A C, CLARKE S M, et al. An investigation into the composition, biomass and oxygen budget of the fouling community on a tuna aquaculture farm[J]. Biofouling, 1999, 13(4): 279-299. doi: 10.1080/08927019909378386
[6] TAN C K F, NOWAK B F, HODSON S L. Biofouling as a reservoir of Neoparamoeba pemaquidensis (Page, 1970), the causative agent of amoebic gill disease in Atlantic salmon[J]. Aquaculture, 2002, 210(1/2/3/4): 49-58.
[7] WADDY S L, BURRIDGE L E, HAMILTON M N, et al. Emamectin benzoate induces molting in American lobster, Homarus americanus[J]. Can J Fish Aquat Sci, 2002, 59(7): 1096-1099. doi: 10.1139/f02-106
[8] HODSON S L, BURKE C M, BISSETT A P. Biofouling of fish-cage netting: the efficacy of a silicone coating and the effect of netting colour[J]. Aquaculture, 2000, 184(3/4): 277-290.
[9] KALANTZI I, ZERI C, CATSIKI V, et al. Assessment of the use of copper alloy aquaculture nets: potential impacts on the marine environment and on the farmed fish[J]. Aquaculture, 2016, 465: 209-222. doi: 10.1016/j.aquaculture.2016.09.016
[10] 石建高, 余雯雯, 赵奎, 等. 海水网箱网衣防污技术的研究进展[J]. 水产学报, 2021, 45(3): 472-485. [11] GONZÁLEZ E P, HURTADO C F, GACE L, et al. Economic impacts of using copper alloy mesh in trout aquaculture: Chilean example[J]. Aquac Econ Manag, 2013, 17(1): 71-86. doi: 10.1080/13657305.2013.747227
[12] 周文博, 余雯雯, 石建高, 等. 超高分子量聚乙烯纤维在渔业领域的应用与研究进展[J]. 渔业信息与战略, 2018, 33(3): 186-194. [13] 吴加文, 李众, 林和山, 等. 兴化湾污损生物群落结构及其时空格局[J]. 应用海洋学学报, 2019, 38(4): 578-584. doi: 10.3969/J.ISSN.2095-4972.2019.04.013 [14] BI C W, ZHAO Y P, DONG G H, et al. Drag on and flow through the hydroid-fouled nets in currents[J]. Ocean Eng, 2018, 161: 195-204. doi: 10.1016/j.oceaneng.2018.05.005
[15] 张明明, 赵文, 于世超. 我国海洋污损生物的研究概况[J]. 水产科学, 2008, 27(10): 545-549. [16] 严涛, 刘姗姗, 曹文浩. 中国沿海水产设施污损生物特点及防除途径[J]. 海洋通报, 2008, 27(1): 102-110. doi: 10.3969/j.issn.1001-6392.2008.01.015 [17] CLARE A S, HØEG J T. Balanus amphitrite or Amphibalanus amphitrite? A note on barnacle nomenclature[J]. Biofouling, 2008, 24(1): 55-57. doi: 10.1080/08927010701830194
[18] CALLOW M E, CALLOW J E. Marine biofouling: a sticky problem[J]. Biologist, 2002, 49(1): 10-14.
[19] 周家丽, 刘丽, 王学锋, 等. 中国沿海污损生物研究进展综述[J]. 南方论坛, 2021, 52(10): 27-32. [20] 林和山, 王建军, 郑成兴, 等. 东山湾污损生物生态研究[J]. 海洋学报, 2012, 34(6): 160-169. [21] 林更铭, 项鹏, 李炳乾, 等. 厦门港污损生物物种多样性和分布特征[J]. 海洋湖沼通报, 2010, 12(3): 65-72. doi: 10.3969/j.issn.1003-6482.2010.03.011 [22] CARVALHO M L, DOMA J, SZTYLER M, et al. The study of marine corrosion of copper alloys in chlorinated condenser cooling circuits: the role of microbiological components[J]. Bioelectrochemistry, 2014, 97: 2-6. doi: 10.1016/j.bioelechem.2013.12.005
[23] CHAMBERS M. Comparative growth and survival of juvenile Atlantic cod (Gadus morhua) cultured in copper and nylon net pens[J]. J Aquac Res Dev, 2012, 3(5): 137-142.
[24] BUYUKATES Y. Environmental monitoring around an offshore fish farm with copper alloy mesh pens in the Northern Aegean Sea[J]. J Environ Prot, 2017, 6(2): 50-61.
-
期刊类型引用(4)
1. 毛嘉烜，汪振华，章守宇，林军，邹沁东，陈怡卉. 大陈岛海域潮下带岩礁生境鱼类群聚特征. 上海海洋大学学报. 2025(03): 604-617 . 
百度学术
2. 廖东荣，黎傲雪，陈宁，吕少梁，王学锋. 湛江港皮氏叫姑鱼种群生物学特征和资源开发状态. 南方水产科学. 2024(03): 27-35 . 本站查看
3. Wen Yang，Wenjia Hu，Bin Chen，Hongjian Tan，Shangke Su，Like Ding，Peng Dong，Weiwei Yu，Jianguo Du. Impact of climate change on potential habitat distribution of Sciaenidae in the coastal waters of China. Acta Oceanologica Sinica. 2023(04): 59-71 . 必应学术
4. 杨雯，胡文佳，陈彬，谭红建，董鹏，俞炜炜，杜建国. 基于MaxEnt模型的中国近海主要石首鱼科鱼类潜在适生区. 生态学杂志. 2022(09): 1825-1834 . 百度学术
其他类型引用(6)
计量
- 文章访问数: 311
- HTML全文浏览量: 42
- PDF下载量: 49
- 被引次数: 10
粤公网安备 44010502001741号
