鱼类血清中的生化指标是重要的生理、病理和毒理学指标，可反映鱼的生理代谢、健康状况以及对环境的适应情况，并在环境监测、营养吸收、饲料开发等方面具有重要意义^[1-3]。当外界条件变化时，鱼类的血清生理生化指标会在一定程度上发生改变。转氨酶是蛋白质、糖类与脂肪三大物质代谢的关键酶，其中最重要的是谷草转氨酶 (AST)和谷丙转氨酶 (ALT) ^[4]。这两种酶在肝脏中合成，当肝脏受到不同程度的损伤时，血液中的AST或ALT会增多，因此可被用作监测鱼体生理胁迫状况的指标^[5-6]。AST和ALT是反映肝功能的重要指标，其活性的变化对肝病的诊断与治疗有重要价值^[7]。白蛋白是血清中功能较多的一类蛋白质，可以维持机体的渗透压、运输营养物质。甘油三酯是机体储存的能源物质，参与脂类代谢，血液指标过高或过低均会产生不良的影响^[8]。胆固醇是参与细胞膜形成的重要物质，可以形成胆汁酸以及甾体激素，在机体细胞中不可缺少^[4]。磷酸酶在鱼类的生长发育、能量代谢及免疫调节等方面发挥着重要作用，是研究鱼类生理代谢的重要指示参数，包括酸性磷酸酶和碱性磷酸酶。前者是溶酶体的标志酶，可用以判断鱼类的免疫调节情况^[9]；后者是一种在生物界中分布广泛的磷酸酯酶，是生物体的一种重要的代谢调控酶^[10]。碱性磷酸酶浓度的升高有利于提高鱼类对外界环境变化的抵抗能力^[11]。溶菌酶广泛存在于皮肤黏液、组织和血液中，为低等动物进行非特异性免疫非常重要的指标之一^[12]。目前，国内已对人工养殖鲙鱼 (Epinephelus drummondhayi)、团头鲂 (Megalobrama amblycephala)^[13]、鲈鲤 (Percocypris pingi)^[14]、莫桑比克罗非鱼 (Oreochromis mossambicus)^[15]等多种鱼类的血液指标进行了研究，然而对黄鳍金枪鱼 (Thunnus albacares) 的血液指标研究报道较少。

黄鳍金枪鱼属鲭科、金枪鱼属，最大体长可达3 m，体质量可达225 kg，是广泛生活于热带和亚热带的大型中上层鱼类^[16]。金枪鱼有南北洄游的习性，因其味道鲜美、营养丰富而倍受欢迎^[17]。黄鳍金枪鱼人工养殖的主要国家有澳大利亚、日本、墨西哥、巴拿马等，其养殖育苗主要来源于野生幼鱼和部分人工繁育的幼鱼。我国黄鳍金枪鱼人工养殖起步较晚，中国水产科学研究院南海水产研究所深远海养殖技术与品种开发创新团队先后实现了黄鳍金枪鱼的深水网箱养殖和室内循环水养殖^[18-20]，实验和测试正在持续进行中。目前关于养殖黄鳍金枪鱼幼鱼的生理生化数据较少，不同体质量血清指标差异的研究尚未见报道。本文以黄鳍金枪鱼为研究对象，根据体质量大小分类，研究其体质量和血液指标的关系，以期为黄鳍金枪鱼血液生化指标研究积累基础资料，为开发黄鳍金枪鱼人工养殖提供科学依据。

1.   材料与方法

1.1   材料来源与实验方法

实验用的黄鳍金枪鱼幼鱼体长25.78~49.21 cm，体质量400~1 900 g，共计21尾，自诱捕后在中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心陵水试验基地的循环水系统中进行驯化养殖，养殖池规格为长8.6 m×宽5.6 m×高2.8 m。养殖环境参数：水温(22.5±0.5) ℃，溶解氧质量浓度>8.50 mg·L⁻¹，pH 7.93±0.12，盐度 33‰，氨氮质量浓度<0.1 mg·L⁻¹，亚硝态氮质量浓度<0.1 mg·L⁻¹。驯化养殖期间采用饱食量法，每日按体质量的5%~8%投喂新鲜杂鱼，驯化成功后通过正态分布统计，根据体质量将其分为3组：W1 (400~900 g)、W2 (900~1 400 g)、W3 (1 400~1 900 g)。每组7尾，并随机抽取3尾立即测定血清指标等。

1.2   实验样品采集与检测

黄鳍金枪鱼幼鱼经丁香酚 (10~30 μg·L⁻¹) 麻醉后，用一次性注射器 (注射器用抗凝剂肝素润洗) 从其尾部抽取血液样品，于4 ℃中保存静置约1 h，然后用台式高速冷冻离心机 (EXPERT 18K-R) 离心 (温度4 ℃，转速3 000 r·min⁻¹，时长10 min)，放置在−80 ℃下保存直至分析。所有指标均使用商业试剂盒 (中国南京建成生物工程研究所) 进行测定，分别为白蛋白 (A028-2-1)、甘油三酯 (A110-1-1)、总胆固醇 (A111-1-1)、AST (C010-2-1)、ALT (C009-2-1)、溶菌酶 (A050-1-1)、酸性磷酸酶 (A060-1-1) 和碱性磷酸酶 (A059-2-2)。

1.3   统计分析

采用Excel 2016软件整理数据、Origin 2021软件作图、SPSS 26.0软件进行显著性差异分析，P<0.05为显著差异，误差控制在95%置信区间以内。

2.   结果

2.1   不同体质量黄鳍金枪鱼幼鱼血清中白蛋白、甘油三酯、总胆固醇和转氨酶的差异

本实验中不同体质量组的黄鳍金枪鱼幼鱼血清白蛋白质量浓度 (图1-a) 和甘油三酯浓度(图1-b) 之间差异显著 (P<0.05)，均随着体质量的增长呈现先下降后上升的变化趋势，以W3组浓度最高[白蛋白 (9.01±0.42) g·L⁻¹、甘油三酯 (0.74±0.02) mmol·L⁻¹]且显著高于其余两组，W2组浓度最低 [白蛋白 (5.38±0.13) g·L⁻¹、甘油三酯 (0.38±0.02) mmol·L⁻¹]。总胆固醇浓度 (图1-c) 也符合这一规律，相邻组间差异较显著 (P<0.05)，W3组最高，W2组最低，W1与W3组之间的平均总胆固醇浓度相近且无显著性差异 (P>0.05)，分别为 (2.44±0.17)和(2.34±0.08) mmol·L⁻¹。黄鳍金枪鱼幼鱼ALT和AST活性随着体质量的升高呈现先下降后上升的变化趋势 (图1-d) ，均为W1组最高，分别为 (7.07±0.92)和 (77.19±5.59) U·L⁻¹；W2组最低，分别为 (2.89±0.62) 和 (21.41±1.12) U·L⁻¹。不同的是，AST活性存在显著性差异 (P<0.05)，W1组显著高于其余两组，ALT活性在相邻组间差异显著 (P<0.05)。AST活性明显高于ALT 活性 (P<0.05)。

图  1  黄鳍金枪鱼幼鱼体质量与白蛋白、甘油三酯、总胆固醇和转氨酶的关系

注：不同字母间表示差异显著 (P<0.05)，字母相同则差异不显著 (P>0.05)，图2同此。

Fig. 1  Relationship between albumin, triglyceride, total cholesterol, transaminase and body mass of juvenile T. albacares

Note: Different and same letters indicate significant difference (P<0.05) and insignificant difference (P>0.05), respectively. The same case in Fig. 2.

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2.2   不同体质量黄鳍金枪鱼幼鱼血清中溶菌酶和磷酸酶的差异

黄鳍金枪鱼幼鱼血清中溶菌酶质量浓度随着体质量的升高呈现先上升后下降的趋势 (图2-a) ，其中W2组最高，且显著高于W3组 (P<0.05)，分别为 (31.46±6.95)和(14.94±5.62) μg·mL⁻¹。血清中酸性磷酸酶活性随体质量升高由 (23.19±2.73) 降至 (10.69±0.53) 金式单位·100 mL⁻¹，W1组显著高于其余两组 (P<0.05)，W2和W3组无显著性差异 (P>0.05)。黄鳍金枪鱼血清碱性磷酸酶活性随体质量升高呈现先下降后上升的趋势，但组间无显著性差异 (P>0.05)，波动较小。不同体质量的黄鳍金枪鱼幼鱼血清酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性之间存在显著性差异 (P<0.05) (图2-b)。

图  2  黄鳍金枪鱼幼鱼体质量与溶菌酶和磷酸酶的关系

Fig. 2  Relationship between lysozyme, phosphatase and body mass of juvenile T. albacares

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3.   讨论

血清中的甘油三酯、总胆固醇和转氨酶等是血液的重要组成成分，对肝脏、心脏健康等有重要指示作用，也是反映机体健康与否的重要指标。血清中的溶菌酶和磷酸酶等是鱼体健康检查的重要血液指标。目前国内的研究报道主要针对黄鳍金枪鱼血液中的重要离子、葡萄糖、血红蛋白浓度和消化酶方面^[3,21]，而有关其血清、血脂指标和免疫相关酶方面的研究较少见。

3.1   不同体质量与白蛋白、甘油三酯、总胆固醇和转氨酶的关系

在鱼类养殖过程中经常出现饲料营养不平衡、滥用药物等问题，导致鱼类肝功能受损^[22]。血清中的白蛋白是由肝实质细胞合成的运输蛋白，可以维持渗透压，也可以在血浆中反映肝损伤程度^[23]，肝功能损伤时白蛋白浓度降低。研究发现，体质量为 (758±0.22) g的日本鳗鲡 (Anguilla japonica) 雌鱼血清中的白蛋白浓度显著高于体质量为(245±0.09) g的雄鱼^[24]。本研究显示，W3组白蛋白浓度显著高于其余两组，与前述研究相似。这可能是由于体质量较小的机体肝脏功能发育不完全，随着肝脏的逐步发育，血清中的白蛋白逐渐被分配，发育成熟后肝功能完全具备，并具有一定的抵御病菌的能力，白蛋白浓度达到最高点。鱼类甘油三酯和胆固醇同样主要由肝脏合成，经血液运送至全身^[25]。血清中甘油三酯、胆固醇浓度过高通常可能由机体所处的非健康状态所引起^[26]。体质量为 (245±0.09) g的日本鳗鲡雄鱼血清中的甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇浓度显著高于体质量 (758±0.22) g的雌鱼^[24]。比较平均体质量为65.2 g的黄鳝 (Monopterus albus)、515.0 g的鲤(Cyprinus carpio)和680.7 g的草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 血清中的总胆固醇，黄鳝和草鱼的总胆固醇浓度显著高于鲤，且黄鳝和草鱼无显著性差异^[27]。本研究显示，W2组总胆固醇浓度显著低于其余两组，且其余两组无显著性差异，与上述研究结果相似。甘油三酯相邻组间差异性不显著，国内尚未见类似的研究报道。日本鳗鲡的差异可能与其性别有关，本研究结果可能与鱼龄和生长速度相关，血清中总胆固醇与甘油三酯浓度会随着各器官的发育而降低，生长到一定的体型时鱼类摄食量变大，总胆固醇和甘油三酯会升高，有关黄鳍金枪鱼幼鱼甘油三酯和总胆固醇的数据尚未见报道。本研究表明，白蛋白及甘油三酯浓度与体质量有较大的相关性。总胆固醇浓度变化趋势与甘油三酯相似，但差异性不同，为正常范围内的波动。

血清AST和ALT是反映肝脏或心脏健康状态的酶学指标。正常情况下，这两种酶在鱼体肝脏中的含量最丰富，ALT绝大部分位于细胞浆，AST主要位于线粒体；肝损伤较轻时，细胞浆中的ALT进入血液中；肝细胞损伤严重时, 线粒体里的AST进入血液中^[28-29]。转氨酶的增高与病变严重程度成正比^[30]。有研究表明，匙吻鲟 (Polyodonspathala)、史氏鲟 (Acipenser schrencki)、虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)、兰州鲇 (Silurus lanzhouensis) 和花羔红点鲑 (Salvelinus malma) 等鱼类的AST远高于ALT^[31-35]，本研究结果与其相似。本研究中，ALT和AST活性均随鱼体质量的增加先下降后上升。这可能是由于肝脏发育不成熟所致，随着鱼体的增长，AST和ALT由肝脏储存，在血液中的浓度逐渐减少，体质量增长到一定程度，肝脏承受的压力逐渐变大，受到一定程度的损伤后，在血液中的浓度逐渐增加但低于体质量较小的黄鳍金枪鱼。研究发现，大多数鱼类食用高糖分高脂肪的饲料后会出现生长变慢、摄食能力变弱等症状，此类鱼大多患有脂肪肝且肝脏肥大，肝细胞排列混乱，胞浆含有脂滴，肝脏空泡化^[36]。因此，应注重体质量较大成鱼的饲料水平配比，但目前有关正常营养调控对鱼类肝功能影响的研究较少。

3.2   黄鳍金枪鱼不同体质量与溶菌酶和磷酸酶的关系

溶菌酶是体现水产动物吞噬细胞吞噬病原菌能力的重要指标，在非特异性免疫体系中具有重要功能^[37]，其来源于巨噬细胞，对外源物有破坏功能，主要通过破坏细胞壁中的肽聚糖使鱼类死亡，反映出鱼体对寄生虫、细菌和病毒的抵抗能力^[38-39]。鱼类血清溶菌酶活性升高，其免疫能力也相应增强^[40]。本研究中黄鳍金枪鱼幼鱼W3组溶菌酶活性最低，显著低于W2组，但与W1组差异不显著。刘金兰和李其雨^[12]研究发现，在体质量分别为38.4~46.4、126.7~166.9和186.5~240.1 g的黄颡鱼 (Pelteobagrus fuvidraco)、黄鳝和鲫 (Carassius auratus) 中，黄鳝血清中的溶菌酶活性最高，黄颡鱼次之，鲫最低，本研究结果与之相似。本研究表明，体质量较大的黄鳍金枪鱼吞噬细胞吞噬病原菌的能力较弱，而体质量较小的黄鳍金枪鱼溶菌酶活性略低，这可能由其免疫系统发育不完全所致。因此，在养殖过程中应注意增强体质量较大的黄鳍金枪鱼的免疫力。

一般来说，鱼类的特异性免疫比高等脊椎动物弱，大多依赖于非特异性免疫抵御病害侵袭，从而维持机体健康。磷酸酶和溶菌酶作为重要的非特异性免疫指标，其活性可反映机体应对外界环境胁迫的免疫能力变化^[41]。磷酸酶又称磷酸单酯水解酶，存在于各种生物组织中，具有促使含磷物质的消化、代谢和吸收等功能，在细胞磷酸化和去磷酸化可逆性调节机制中起着重要作用，反映对外来物质的分解能力，可分为酸性磷酸酶和碱性磷酸酶^[42-44]。酸性磷酸酶是溶酶体的标志之一，不仅能催化磷酸单酯水解，还能直接参加磷酸基团的转移，其水平上升代表抗应激能力提升，是免疫能力增强的表现之一。本研究中，酸性磷酸酶和体质量成反比，随着体质量的升高逐渐降低，在实验过程中并未出现疾病和死亡，说明随着鱼体的发育，各器官的组织功能逐渐完善，酸性磷酸酶被逐渐分配到肠道、肌肉和肝脏等其余器官中^[21]。碱性磷酸酶显著低于酸性磷酸酶，这与其他研究结果相似^[45-47]，可能因为酸性磷酸酶为主要的免疫酶，而碱性磷酸酶则起辅助作用。碱性磷酸酶是很重要的解毒体系，参与生物体对物质的消化、吸收和运输等功能，调节动物体内钙 (Ca)、磷 (P)的吸收，维持Ca、P的平衡，是生长发育的重要酶类之一^[46-48]。 本研究中，碱性磷酸酶各组之间无显著性差异 (P>0.05)，数值相近，波动较小，说明水体环境良好，并无明显外来刺激，Ca、P的消化吸收和内环境较稳定；可作为消化方向疾病诊断的依据。本研究表明鱼体质量对碱性磷酸酶浓度的影响较小，影响其变化的主要因子有待进一步研究。

4.   结论

综上所述，本研究中黄鳍金枪鱼幼鱼在3个体质量组的碱性磷酸酶指标较稳定，无显著性差异，是随着体质量变化较稳定的指标，可用来判断鱼类对外界环境变化的抵抗能力大小，为黄鳍金枪鱼免疫疾病研究提供了基础数据。本研究发现，体质量较高的黄鳍金枪鱼免疫力较差，其脂类浓度高，在养殖过程中应注意增强其免疫力，降低饲料中脂肪和糖类的比例，适当提高蛋白质比例，并设置合理的养殖密度。白蛋白、甘油三酯、AST活性均随着体质量的增加呈现先下降后升高的趋势，是随着体质量增加变化较明显的指标，可为黄鳍金枪鱼的血液生化检测提供参考。