Studies on immunotoxicity of phenol and SDBS to hybrid tilapia (Tilapia nilotica×T.aurea)
-
摘要:
用5种浓度的十二烷基苯磺酸钠(sodium dodecyl benzene sulfonic，SDBS)浸泡刺激奥尼罗非鱼(Tilapia nilotica ♀×T.aurea ♂)8周，每2周采血样1次，测定免疫指标。0.05和0.10 mg · L-1组对奥尼罗非鱼的氯化硝基四氮唑兰(nitro blue tetrazolium，NBT)阳性细胞和IgM含量无影响。0.40 mg · L-1组在第8周时，IgM含量显著下降，而NBT阳性细胞突然急剧下降，与对照组相比差异极显著。0.70 mg · L-1组从第4周起，NBT阳性细胞和IgM含量开始减少，第6周时差异显著。1.00 mg · L-1组NBT阳性细胞数在第2周时量就已经有减少，但与对照组相比差异不显著，到第4周时差异极其显著；在第4周时IgM含量有显著差异，第6周后差异极显著。攻毒试验表明，0.40、0.70和1.00 mg · L-1组的死亡率均高于对照组。以上结果表明，当SDBS浓度大于0.40 mg · L-1时，奥尼罗非鱼免疫功能不同程度受到抑制，对NBT阳性细胞和IgM的影响存在着时间与剂量效应。
-
关键词:
- 十二烷基苯磺酸钠(SDBS) /
- 奥尼罗非鱼 /
- 免疫指标 /
- NBT阳性细胞 /
- IgM
Abstract:The main immune indexes of hybrid tilapia (Tilapia nilotica ♀×T.aurea ♂) were measured every two weeks. The 0.05 and 0.10 mg · L-1 sodium dodecyl benzene sulfonic (SDBS) had not affected the numbers of NBT-positive cells and content of IgM. The 0.40 mg · L-1 SDBS significantly reduced the numbers of NBT-positive cells and content of IgM in eighth week. The 0.70 mg · L-1 SDBS significantly reduced the numbers of NBT-positive cells and content of IgM in sixth week. The 0.10 mg · L-1 SDBS significantly reduced the numbers of NBT-positive cells and content of IgM in fourth week. Mortality of hybrid tilapia after injection of Aeromonas hydrophila (0.40, 0.70 and 1.00 mg · L-1 SDBS) was higher than the control. These results indicated that low concentration of SDBS (0.05 and 0.10 mg · L-1) did not affect the immune function of hybrid tilapia, but the higher concentrations of SDBS (0.40, 0.70 and 1.00 mg · L-1) will apparently reduce the immune function of hybrid tilapia along with time changed.
-
Keywords:
- sodium dodecyl benzene sulfonic (SDBS) /
- hybrid tilapia /
- immune index /
- NBT-positive cell /
- IgM
-
雪卡毒素是一种可引起人类中毒的珊瑚鱼毒素，毒性极强。近年来，由于海上捕捞及潜水猎鱼日益增多，有将近400种珊瑚鱼成了水产食谱和高档酒楼的海鲜美食，使原本多发生于渔船上的热带亚热带珊瑚鱼雪卡中毒事件转而发生于家庭或海鲜餐厅，造成对消费者健康的威胁。带有雪卡毒素的鱼类主要存在于太平洋、印度洋、大西洋等热带、亚热带海域。集中分布在南纬至北纬35°之间最常见含有雪卡毒素的鱼类，以聚居于珊瑚礁一带觅食的海鱼为主，主要有老虎斑、金钱龙趸、蓝瓜子斑、老鼠斑、苏眉、西星斑、豹星斑、燕尾星斑、杉斑及东星斑[1]。虽然因食用含雪卡毒素的珊瑚鱼而中毒的事件时常发生，然而很少有人知道雪卡毒素是一种什么物质，对它的分子结构和化学性质更是不了解。因此，本文不仅对雪卡毒素作一简单介绍，而且对它的研究进展也作一综述，这将为减少和防止雪卡中毒事件的发生具有重要的意义。
1. 雪卡毒素结构和化学性质
雪卡毒素(ciguatoxin，CTX)，又称西加毒素，分子内包含13个相连的环醚，醚环的大小包括有5、6、7、8、9元环，整个骨架具有反式或顺式的立体化学特征。化学结构式如下：
雪卡毒素是一种无色、耐热、非结晶体，能溶于极性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮，但不溶于苯和水，也不易被胃酸破坏[2]，是一种脂溶性的有机化合物。雪卡毒素属神经毒素，按毒素毒性程度可分为4个等级：猛毒，如食入有毒鱼肉200 g即能致死；强毒，产生严重的运动神经麻痹，不可起立；轻毒，产生轻度知觉麻痹或运动麻痹；微毒，症状极轻或不显毒性。雪卡毒素对灵长类动物的半致死量为2.0 μg · kg-1[3]。
2. 雪卡毒素的药理作用与提取及合成
雪卡毒素主要存在于鱼肉、内脏、尤其是生殖腺的鱼卵中。雪卡毒素具有抑制钙离子作用，低浓度有强烈的和不可逆的胆碱酶抑制作用，能增强肌肉和神经细胞中钠离子通透性，使细胞膜去极化而引发神经系统的中毒症状。此外，由于雪卡毒素对脑外伤造成的昏迷有很好的疗效，对癌症等也有一定的抑制作用，所以雪卡毒素在国际市场上有贵黄金之称，其售价1.785亿美元· kg-1。为了获得纯的雪卡毒素，一方面采用从鱼中提取的方法。日本从1909年开始，花费49年才从珊瑚鱼的卵巢中提取分离出雪卡毒素，又用了近10年才完成其工业提取的研究。由于从珊瑚鱼提取雪卡毒素的工艺复杂，而且珊瑚鱼资源提取的量也少，世界上仅有少数国家能完成这项研究。1982年我国大连海洋渔业公司医师王维国先生，用他多年研究海洋药物的经验，独辟蹊径，带领有关人员仅用2年时间，在我国首次从河豚鱼肝脏中提取雪卡毒素，又用2年时间完成其工业提取的研究并转入商业性生产阶段，成为我国独家批量生产雪卡毒素的单位，并进入国际市场[4]。另一方面，用化学合成的方法可以获得雪卡毒素，化学合成雪卡毒素的研究工作主要集中在日本。据报道，日本科学家已能精确合成雪卡毒素的碳架结构，并将合成的雪卡毒素碳架结构用于雪卡毒素免疫分析抗体制备的人工抗原研究[5-7]。
3. 雪卡毒素的中毒症状及中毒现状
雪卡毒素主要来自于涡鞭藻——冈比尔盘藻(Cambierdisc toxicus)，是该藻产生的毒素。冈比尔盘藻通常生活在珊瑚礁周围，也附着在其它海藻上生长，在太平洋、大西洋中广泛分布。其它微藻如P.lima、Ostreopsis siamensis和O.ovata等也能产生雪卡毒素[1]。通过食物链，由小鱼吃冈比尔盘藻或附着冈比尔盘藻的海藻，大鱼吃小鱼层层积聚并累积。雪卡毒素不会被高温分解，故烹煮过程并不能除去毒素。雪卡毒素中毒有临界值，毒素进入血液后，需要很长时间才能将毒素排出，患者日后若再次接触到雪卡毒素，就算吃下很少的份量，超过临界值时也会产生中毒症状。中毒症状表现为在进食含雪卡毒素的珊瑚鱼数小时后，会出现肠胃或神经系统不适等现象，主要病征包括呕吐、腹泻、口角及四肢麻痹、冷热感觉颠倒、关节及肌肉疼痛等，病症可维持数天至数星期不等。
据报道全世界每年至少2万人不同程度的遭受雪卡毒素的伤害[8-9]。在香港，1997年发生16宗食用珊瑚鱼雪卡中毒的案例，103人中毒；1998年1月发生70多人被怀疑吃了在珊瑚礁附近觅食的含有珊瑚鱼毒素的深海大鱼而中毒；1999年3~5月爆发因食用“杉斑”等珊瑚鱼雪卡中毒的案例27宗，118人中毒[10]。特别是近年，因食用珊瑚鱼导致的雪卡中毒事件更是频繁发生，据香港卫生署统计2004年香港累计雪卡中毒人数超过255人，为2003年雪卡中毒27人的9倍(人民网香港2005年1月27日电，http://news.163.com/05/0127/11/1B3MBF860001124U.html)。雪卡中毒事件在沿海城市如上海、青岛、北海、广州、湛江、汕头和深圳多次发生，尤其自2004年以来，发生雪卡中毒事件更多，累计仅在广东雪卡中毒的人数已超过200人，如2004年11月中山市小榄镇发生一起婚宴80多人因食用珊瑚鱼而致雪卡中毒[羊城晚报，2004-11-24(A2)]，因此，雪卡中毒被评为2004年广东食品安全八大事件之一。2005年，雪卡中毒事件仍然时有发生，在广州、大连、深圳等地常有因食用珊瑚鱼而中毒的事件报道。2005年“十一”黄金周期间，香港报道了10人吃鱼中毒[新明日报，2005-10-6(A)]。截止到2005年10月，香港雪卡中毒的事件累计达到40余起[11]。为此，世界卫生组织和海洋渔业工作组多次召开会议商讨雪卡中毒的预防措施和分析方法，并鼓励发展雪卡毒素的现场快速检测方法。
4. 雪卡毒素的检测分析现状
现有对雪卡毒素的仪器分析如气相色谱、液相色谱和质谱等方法[12-14]，由于对于样品的前处理操作繁琐，不适应现场简单快速和大批量样品残留检测的要求。有学者采用生物标志物和细胞活性测定间接反应雪卡毒素的含量[15-16]，但测试过程时间长，灵敏度低，未广泛使用。另有学者通过制备雪卡毒素的多克隆和单克隆抗体，采用免疫方法测定雪卡毒素，但测试过程需要多次温育和洗涤，使用致癌性的邻苯二胺作为显色底物，步骤繁琐，也不适于现场测定[17-19]。目前，国内外对雪卡毒素的测定主要采用美国Oceanit Test Systems, Inc.(www.cigua.com)公司研制的免疫膜测定试剂盒[15]，国内多家单位和项目申请者购买该试剂盒进行雪卡毒素分析，测试1个样本需要成本100多元。可见，对雪卡毒素的分析尚缺乏快速准确并适应现场的检测方法。
-
![]()
图 1 攻毒感染后奥尼罗非鱼的死亡率
Figure 1. Mortality of hybrid tilapia (T.nilotica×T.aurea) after injection of A.hydrophila
表 1 SDBS对奥尼罗非鱼NBT阳性细胞的影响
Table 1 Effects of SDBS on NBT-positive cells of hybrid tilapia (T.nilotica×T.aurea)
时间/周
timeNBT阳性细胞/个NBT-positive cell 2 4 6 8 空白对照contrast 27.1±7.4 28.8±4.8 24.7±4.2 26.2±3.0 试验组/mg·L-1
experiment group0.05 24.5±4.0 25.1±3.8 28.8±7.3 24.4±3.7 0.10 26.2±5.0 24.4±6.1 26.1±7.0 26.1±7.0 0.40 22.3±4.3 24.9±3.6 24.5±3.0 14.8±2.5** 0.70 22.3±4.8 25.0±5.3 15.9±2.9** 13.3±2.5** 1.00 25.1±3.3 16.4±3.0** 14.3±2.7** 10.1±2.1** 注：* *. 极显著差异(P < 0.01)
Note：* *. significant at 0.01 level
下载: 导出CSV
表 2 SDBS对奥尼罗非鱼血清IgM含量的影响
Table 2 Effect of SDBS on the content of IgM of serum of hybrid tilapia (T.nilotica×T.aurea)
时间/周
time/weekNBT阳性细胞/个NBT-positive cell 2 4 6 8 空白对照contrast 2.119±0.366 2.045±0.508 2.150±0.384 2.120±0.411 试验组/mg·L-1 experiment group 0.05 2.038±0.328 2.049±0.372 2.000±0.362 2.114±0.337 0.10 2.127±0.393 2.094±0.458 2.099±0.407 2.049±0.336 0.40 2.059±0.403 2.102±0.329 1.817±0.445 1.568±0.470* 0.70 2.106±0.386 1.516±0.612 1.400±0.501** 1.456±0.455** 1.00 2.166±0.365 1.482±0.518* 1.261±0.357** 1.214±0.330** 注：*. 显著差异(P < 0.05)；* *. 极显著差异(P < 0.01)
Note：*. significant at 0.05 level；* *. significant at 0.01 level.
下载: 导出CSV
-
[1] WATZE D W, TOM F J. Terrstrial risk assessment for linear alkyl benzene sulfonate (LAS) in sludge amended soils[J]. Chemosphere, 1998, 36(6): 1 319-1 343. doi: 10.1016/S0045-6535(97)10021-2
[2] 袁峻峰, 陈浩文, 吴宝玲, 等. 南极麦克斯韦尔海湾阴离子洗涤剂污染研究[J]. 中国环境科学, 1998, 18(2): 151-153. doi: 10.3321/j.issn:1000-6923.1998.02.013 [3] YE Xiaoli, LI Xuegang, SHU Changbin, et al. The effects of surfactants on the activity of invertase and superoxide dismutae of soybean leaf in vitro in vivo[J]. CoHoids Surfaces A: Physicochem Engin Aspects, 2000, 175(1/2): 249-255. doi: 10.1016/S0927-7757(00)00462-3
[4] da SILVA M E F, NICE C M. Interaction of nonionic surfactants with hepatic CYP in Prochilodus scrofa[J]. Toxicol In Vitro, 2004, 18(6): 859-867. doi: 10.1016/j.tiv.2004.04.006
[5] WU Jifa, YU Zhiming, SONG Xiuxian, et al. Comparative researches on effects of sodium dodecylbenzene sulfonate and sodium dodecyl sulfate upon Lateolabrax japonicus biomarker system[J]. Environ Toxicol Pharmacol, 2005, 20(3): 465-470. doi: 10.1016/j.etap.2005.05.006
[6] 张娜. 鱼类急性毒性试验及其条件选择[J]. 水利渔业, 1999, 9(6): 6. https://cstj.cqvip.com/Qikan/Article/Detail?id=3659860 [7] ANDERSON D P, MORITAMO T, GROOTH R. Neutrophil, glass-adhrent, nitroblue tetrazolium assay give early indication of immumzation effectiveness in rainbow trout[J]. Veterinary lmmunol lmmunopathol, 1992, 30(4): 419-429. doi: 10.1016/0165-2427(92)90110-C
[8] 朱立军, 陈学清. 免疫学常用实验方法[M]. 北京: 人民军医出版社, 2000: 352-356. https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=14289f9b5047da0bd1c2f6549a59bef3 [9] SIWICKI A K, COSSARINI-DUNIER M, STUDICKA M, et al. In vivo effect of the organophosphorus insecticide trichlophon on immune response of carp (Cyprinus carpio): II. Effect of high doses of trichlorphon on nonspecific innune response[J]. Ectoxicol Environ Saf, 1990, 19(1): 99-105. doi: 10.1016/0147-6513(90)90084-I
[10] 柳垂亮, 李玉娟. 中性粒细胞凋亡与炎症反应[J]. 广东医学, 2002, 23(11): 1 218-1 220. doi: 10.3969/j.issn.1001-9448.2002.11.059 [11] 唐伟, 孙晓怡. pH值对酚类化合物毒性的影响[J]. 黑龙江环境通报, 2005, 29(1): 45-48. [12] UCHIDA D, HIROSE H, CHANG P K, et al. Characterization of Japanese eel immunoglobulin M and its level in serum[J]. Comp Biochem Physiol, 2000, 127B(4): 525-532. doi: 10.1016/S0305-0491(00)00290-X
[13] 黄艳青. 黄颡鱼基础免疫的的研究[D]. 武汉: 华中农业大学, 2003. 10.7666/d.Y547973 [14] COSSARINI-DUNIER M, DEMAEL A, SIWICKI A K. In vivo effect of the organophosphorus insecticide trichlorphon on the immune response of carp (Cyprinus carpio): I. Effect of contamination on antibody production in relation to residue level in organs[J]. Ectoxicol Environ Saf, 1990, 19(1): 93-98. doi: 10.1016/0147-6513(90)90083-H
[15] KNOWLES J F. The effect of chronic radiation on the humoral immune response of rainbow trout (Onchorhynchus mykiss Walbaum) [J]. Int J Radiat Boil, 1992, 62(2): 239-248. doi: 10.1080/09553009214552061
计量
- 文章访问数: 5867
- HTML全文浏览量: 159
- PDF下载量: 3603
粤公网安备 44010502001741号
