漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)属鲽形目(Pleuronectiformes)，鲆科(Bothidae)，牙鲆属(Paralichthys)，又称南方鲆(southern flounder)。是一种具有较高营养价值和商业价值的比目鱼类，主要分布在大西洋河口和大陆架水域以及从美国的北卡罗来那州到墨西哥北部的墨西哥湾沿岸^[1]。漠斑牙鲆具有抗病力强、生长快、广温、广盐的特点^[2-3]，成为美国目前重点开发的水产养殖品种之一^[4]。自2002年引入我国以来，包括育苗养成在内的各项技术得到突破。漠斑牙鲆经过淡化以后，可以像在沿海地区一样，在内陆淡水、咸水湖或可循环利用的池塘养殖^[5-7]，开发潜力巨大。

1.   材料与方法

1.1   材料

2005年11~12月在山东胶南市忠海水产有限公司，漠斑牙鲆亲鱼经暂养驯化、环境调控诱导性腺成熟，在12月20~22日4 h 52 min，雌雄亲鱼同时排卵、排精并完成了自然受精过程。受精卵培育条件为水温18.5±0.5℃，孵化网箱微流水充气孵化，海水盐度保持在32~33，刚孵化仔鱼的培育水温为21±0.5℃，随着仔鱼发育，逐渐降至20.5±0.5℃，维持此温度培育。其它培养条件与受精卵相同。

1.2   方法

培育期间按照其发育的各个时期定期取样，在Nikon光学显微镜下观察漠斑牙鲆胚胎发育和胚后发育各时期的形态特征，并进行记录、拍照。各时期测定样品数30~50个。在显微镜下测定卵子直径、鱼体体长、全长和体高等生物学特征，计算各指标的方差。

2.   结果

2.1   胚胎发育

漠斑牙鲆的成熟卵为浮性卵，圆球形，卵黄透明、均匀，卵中有1个油球，卵径1.05±0.12 mm。受精卵在18~19℃水温下历时49 h脱膜孵出仔鱼，其各期发育阶段特征及发育速度见表 1。

表  1  漠斑牙鲆的胚胎发育

Table  1  Embryonic development of southern flounder P.lethostigma

	发育时期 development stage	发育时间/h：min development hours	各时期简要发育特征 brief characteristica at each embronic development	图例 figure ordinal
卵裂前 one-cell stage	卵膜举起 membrane lift	0：30	受精膜举起，卵周隙狭小
	胚盘突起 blastodisc formation	1：00	胚盘形成
卵裂期 cleavage stage	2细胞 2-cell	2：00	经裂，在胚盘顶部中央出现一纵沟，将胚盘分为2个均等的细胞	图版Ⅰ-1、2
	4细胞 4-cell	2：18	经裂，卵裂沟与第一次卵裂垂直，细胞等大
	8细胞 8-cell	3：00	经裂，卵裂沟与第一次的平行，形成2排，每排4个等大的细胞	图版Ⅰ-3
	16细胞16-cell	3：45	经裂，卵裂沟与第二次的平行，自此次卵裂开始卵裂球大小不一
	32细胞32-cell	4：30	经裂
	64细胞64-cell	5：42	纬裂，形成2层细胞，排列不均	图版Ⅰ-4
	128细胞128-cell	7：12	卵裂球大小形状不规则，卵裂不同步
	桑椹期 morula	8：30	细胞不断分裂，在动物极形成多层	图版Ⅰ-5
囊胚期 blastula stage	高囊胚 high blastula	10：00	和桑椹期相比，此时细胞数量明显增多、体积变小	图版Ⅰ-6
	低囊胚 low blastula	11：46	细胞不断分裂，囊胚层开始变薄向扁平发展	图版Ⅰ-7
	囊胚末期 late blastula	13：12	开始下包作用，形成胚环
原肠期 gastrula stage	原肠早期 early gastrula	14：30	开始下包作用，形成胚环	图版Ⅰ-8
	原肠中期 mid gastrula	17：00	胚环下包1/2	图版Ⅰ-9
	原肠晚期 late gastrula	20：12	胚环下包约3/4
神经胚 neurula stage	神经板 neural plate	21：00	胚体有一部分明显加厚，形成神经板	图版Ⅰ-10
	神经沟 neural groove	23：00	神经板的两侧加厚，隆起，形成神经褶
	神经管 neural tube	26：31	神经褶从神经沟中部开始愈合，后逐渐向两端愈合
器官发生期 organ formation stage	眼泡形成 formation of optic vesicle	28：03	胚体头部两侧向外隆起，眼泡形成	图版Ⅰ-11
	体节形成 formation of somite	30：00	身体中部形成多个体节
	嗅板形成 formation of olfactory plate	32：58	在眼泡前部形成嗅板，色素细胞开始出现，在胚体上可见零星散布的黑点，晶体还不明显，但视泡已经变成视杯
	晶体形成 formation of eye lens	39：07	晶体明显，和视杯一起构成眼睛，胚体具有10对体节, 克氏泡出现	图版Ⅰ-12
	听囊形成 formation of optic capsule	42：00	胚体绕卵黄约3/5，在眼泡后方可见一对泡状结构的听囊，胚体尾部开始扭转，胚体呈"V"形附于卵黄囊上	图版Ⅰ-13
	肌肉效应 muscular contraction	44：00	胚体绕卵黄约4/5，胚体尾部开始出现肌肉效应，出现间断性收缩	图版Ⅰ-14
	心跳出现 heart pulsation	45：00	开始出现心跳，但是频率很慢
	耳石形成 formation of otolithes	47：00	听囊出现，里面有2个黑粒状的耳石
	脱膜孵化 hatching	49：00	胚体已经将近绕卵黄一周，肌肉收缩力度加大，频率提高，其中尾部颤动最为剧烈，将卵膜顶起，脱膜而出	图版Ⅰ-15

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  图版Ⅰ  漠斑牙鲆胚胎发育及胚后发育

1. 2细胞；2. 4细胞；3. 16细胞；4. 64细胞；5. 桑椹期；6. 高囊胚；7. 低囊胚；8. 原肠早期；9. 原肠中期；10. 神经胚；11. 眼泡形成；12. 晶体形成；13. 听囊形成；14. 肌肉效应；15. 脱膜孵化；16. 初孵仔鱼；17. 10日龄仔鱼；18. 20日龄仔鱼；19. 26日龄仔鱼；20. 50日龄

  图版Ⅰ  Embryonic and larval development of southern flounder(P.lethostigma)

1. 2-cell stage; 2. 4-cell stage; 3. 16-cell stage; 4. 64-cell stage; 5. morula stage; 6. high blastula stage; 7. low blastula stage; 8. early gastrula stage; 9. mid gastrula stage; 10. neurula stage; 11. formation of optic vesicle; 12. formation of eye lens; 13. formation of optic capsule; 14. muscular contraction; 15. hatching; 16. newly-hatched larval; 17. 10-day old larval; 18. 20-day old larval; 19. 26-day old larval; 20. 50-day old

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2.2.1   初孵仔鱼

体长2.23±0.35 mm，全长2.32±0.42 mm，刚出膜的仔鱼身体仍保持弯曲，约30 min以后，才能逐渐展直，仔鱼在水体中做间歇性运动。卵黄囊较大，呈扁椭圆形，长径1.51±0.25 mm，短径1.05±0.13 mm。油球一个，位于卵黄囊的后上方，油球径0.23±0.04 mm。27~28对肌节。视囊和晶体无色透明。头部分化为5部分，耳石清晰。从外观上看可以见到已经成形但未与外界连通的膀胱，肠道不清晰(图版Ⅰ-16)。躯干中部左右两侧的背鳍和腹鳍上有较多的星状黑色素分布，油球上也有零星色素分布，其它部位色素较少。此时仔鱼的形态及个体大小和牙鲆(P.olivaceus)相似。

2.2.2   12 h仔鱼

体长2.73±0.22 mm，全长2.8±0.25 mm，头部展直，突出于卵黄囊之前。卵黄囊仍较大。38~39对肌节，耳石清晰，为2个油色发亮的点状体；脑分为3部分，头为5部分。色素分布和初孵仔鱼相仿，在靠近身体后端1/4处的背鳍和腹鳍的边缘开始出现零星的树枝状色素分布。

2.2.3   1日龄

体长2.80±0.32 mm，全长2.90±0.35 mm，卵黄囊体积减小近一半。视囊和晶体颜色加深，呈淡灰色。肠道直管状，位于卵黄囊上方，从表面上可以看出肠道细胞形成的狭窄肠腔，心脏为长带状，未开口，肛门未开通。油球未有明显的变化。下颌和头部有黄褐色色素，除尾鳍膜外，背鳍和腹鳍的中间段和躯干分布有黑色点状色素，其中躯干处最多，躯干还有长带状黄褐色素，背鳍和腹鳍中间部分和卵黄、油球上油黄褐色枝状色素分布。

2.2.4   3日龄

体长3.18±0.38 mm，全长3.30±0.40 mm，油球仍可见，卵黄被大量吸收。视囊和晶体呈黑色。肠道形成，呈倒“V”字型，肠前端直线形，肠内褶清晰可见，肛门开通。在消化道腹面出现点状黑色素；躯干两缘的菊花状黑色素更加浓密，鳍膜上分布有枝状黑色素和点状的黄色素。

2.2.5   6日龄

体长3.42±0.45 mm，全长3.58±0.48 mm，卵黄囊已经基本消失。鳍膜边缘分布点状、星状黄色素，躯干上下两缘分布菊花状黑色素，尾端2/5无色素。仔鱼开口，消化系统发育完成，此时开始投喂轮虫等小型饵料。由于仔鱼开始摄食外源性生物饵料，进入了快速生长期。

2.2.6   10日龄

体长3.83±0.55 mm，全长4.0±0.58 mm，前段肠道弯曲，透明无色，后段肠道黄色直管状。在躯干上下缘和肠胃团腹面的黑色素面积增大，呈枫叶片状。尚未出现冠状鳍条原基(图版Ⅰ-17)。

2.2.7   14日龄

体长4.85±0.48 mm，全长5.15±0.50 mm，消化道内食物饱满，在体内盘绕数圈。色素细胞开始由身体向外扩散，但鳍膜上色素仍不多，色素主要集中在躯干两侧和消化道腹面。

2.2.8   20日龄

体长5.82±0.62 mm，全长6.17±0.65 mm，消化道在体内进一步盘绕，紧缩。尾部椎骨上翘，下部鳍膜增厚，颜色加深呈灰色，开始形成尾扇，并出现色素沉积。冠状鳍条开始形成，长约0.25±0.15 mm，分前后2支鳍条；鳍条的边缘为黄色素，内部为数个个体较大的枝状黑色素；头顶、脑腔后部、眼后、下颌、咽部、消化道腹面、躯干主体两侧、消化道背面等处的菊花状黑色素更加密集，并逐渐扩伸；鳍膜上仍为数个枝状黑色素，边缘为点状和星状的黄色素。现在仔鱼开始摄食卤虫初孵无节幼体。个体生长加快，体表色素加深(图版Ⅰ-18)。

2.2.9   26日龄

体长7.53±0.58 mm，全长8.70±0.54 mm，体宽4.52±0.32 mm，冠状鳍条1.45±0.55 mm，由4~6根鳍条组成。尾扇形成，尾扇基部分布多个枝状黑色素。仔鱼进入变态期，右眼开始上升，冠状鳍条开始被吸收，缩短。树枝状黑色素逐渐收缩，出现均匀分布的叶片状黑色素。此时身体迅速伸长增高，并向扁平发展(图版Ⅰ-19)。

2.2.10   40日龄

体长10.55±1.52 mm，全长13.15±1.75 mm，体宽5.90±1.20 mm，冠状鳍条缩短，成为背鳍的一部分，冠状鳍上的色素也逐渐消失。大部分个体正处于变态期的末期，右眼已经转到左侧，个体在培育池中全部伏底。全身开始布满点状、星状和叶片状的黑色素，其中头部的黑色素最为均匀密集。躯干仍为无色素透明，内部结构清晰可见。尾鳍条16，背鳍条89，臀鳍条68。此时鱼苗摄食量大，肠胃饱满，生长迅速。

2.2.11   50日龄

体长12.15±2.35 mm，全长16.42±2.35 mm，体宽15.32±3.15 mm，躯干上和背腹鳍上有许多乳白色的斑点，右眼已经转过头顶，个体外观上与成体除色素外已无区别(图版Ⅰ-20)。

2.2.12   60日龄

体长14.52±3.86 mm，全长18.22±4.64 mm，体宽19.59±5.15 mm，体呈灰白色，与成鱼相似。

3.   讨论

漠斑牙鲆为单油球的浮性卵，卵膜光滑，卵径较小。卵裂方式为盘状卵裂，以下包的形式形成原肠胚。这些特点与牙鲆、大菱鲆(Scophthalmus maximus)等其他一些鱼类相似^[8-10]。

漠斑牙鲆胚胎发育过程和其它的鲽形目鱼类相似，但比牙鲆和大菱鲆等鱼类的胚胎发育时间要短^{[8, 11]}。可能与其适宜胚胎发育和生长发育过程中所需的温度较高有关。

和其它鲽形目鱼类一样，漠斑牙鲆仔鱼在脱膜孵化之前，胚体绕卵约4/5。在出膜前的数分钟内肌肉收缩频率增快，收缩力度增大。脱膜孵化的速度很快，在几秒钟即可完成，和牙鲆一样也是头部先出膜^[8]。初孵仔鱼体长2.23±0.21 mm，相比其它的鲆鲽鱼类，如牙鲆2.25±0.18 mm、大菱鲆2.68±0.16 mm等，差异不大。漠斑牙鲆初孵仔鱼油球位于卵黄囊的后上方，这和牙鲆初孵仔鱼油球位于卵黄囊的后下方稍有差异^[12]，朱杰等^[13]报道，大菱鲆仔鱼在孵化后3日龄开口，开口时卵黄囊几乎已经消耗殆尽。王开顺等^[14]观察无油球的圆斑星鲽(Verasper variegatus)仔鱼在孵化后6日龄开口，此时卵黄仍有相当一部分尚未被消化完毕，随着发育的继续，卵黄被逐渐消化而分成几块，最后在开口后6日龄左右卵黄囊才被消耗完毕。据笔者观察，漠斑牙鲆在4日龄时开口摄食，而此时卵黄囊已基本消耗完毕，这种卵黄囊在开口时已经消耗殆尽的特点和圆斑星鲽存在差异，而和大菱鲆相似。李恒颂等^[15]报道，银鲈(Bidyanus bidyanus)在卵黄囊完全消化后2日龄开口，他认为油球在从内源性营养转为外源性营养时有提供能量的作用。笔者观察的漠斑牙鲆虽然多数只有一个大油球，但结论仍验证了此观点。

鲽形目类在早期的生长发育过程中，变态之前，会出现冠状鳍条的发生、生长和消失的过程。漠斑牙鲆的冠状鳍条在18日龄出现，在26日龄进入变态期，在40日龄即将完成变态时消失。这比牙鲆出现冠状鳍条和进入变态期的时间要晚^[8]。冠状鳍条的出现与仔鱼早期的浮游生活关系密切，在完成变态，进入伏底期以后，冠状鳍条逐渐缩短，最终和后面的鳍膜连结在一起，成为背鳍膜的一部分。漠斑牙鲆的冠状鳍条形态和牙鲆属的其它鱼类相似，都是和背鳍膜相连结，前面的5~7根鳍条延长突出，形成冠状鳍的结构^{[8, 11]}。冠状鳍条在发生之初即分布上枝状的黄色素和黑色素，随变态完成，冠状鳍条缩短成为背鳍膜的一部分，这些色素也随之消失。而后面的背鳍膜的色素发生与之明显不同，说明冠状鳍条在早期的发育中具有特殊的作用。

漠斑牙鲆的冠状鳍条和同为鲽形目鱼类的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、印度舌鳎(Cynoglossus arel)和高眼舌鳎(Cynoglossus monopus)^[16]等舌鳎科种类差异较大，后3种鱼类的冠状鳍条相对漠斑牙鲆的更长，和后面的背鳍膜的形态上也存在很大差异，舌鳎种类的冠状鳍条是一长扁板状，没有明显的鳍条和鳍膜的区分，基部和端部的形状也有差异，中间1/2处至基部较宽，至端部较窄，呈细棒状，韧性较强；这种结构上的差异可能与之早期的发育和活动存在的差异有关。并且舌鳎种类的鳍条在其变态即将结束时，鳍条分开为2~4根无色透明的棒状鳍条，后逐渐消失。有关鲽形目鱼类冠状鳍条的发生、生长、消失的机制以及其在发育变态过程中的作用，不同鱼类之间的对比差异等问题值得仔细、深入研究，完善对鲽形目鱼类早期的发育变态机制的认识，为完善人工鱼苗技术提供理论依据。

漠斑牙鲆仔鱼的色素细胞分布和牙鲆^[8]、大菱鲆^[13]的相似，都是鱼体在进入变态伏底期之前，先分布上点状和星状的黑色素，随着发育数量逐渐增多，面积增大，向外扩散；尾端2/5部分，初始无色透明，在尾椎骨上翘，鳍膜增后开始形成尾扇时，才开始出现色素沉着，在尾扇基部出现7~15个枝状黑色素。鱼苗进入变态期后，色素细胞逐渐收缩，原来的枝状黑色素逐渐变为叶片状，并逐渐趋于均匀分布。在完成变态伏底后，鱼苗体表均匀分布不规则的片状黑色素，这一特点和朱杰等^[13]报道的大菱鲆仔鱼在发育过程中体色的转变相似。笔者认为，仔鱼体表色素颜色的变化与其在不同时期摄食的营养结构，和其生活史中的变态机制有关，营养的变化造成早期的色素颜色和大小出现变化。而进入的变态期以后，幼体色素细胞逐渐消失，有眼侧逐渐出现成体色素细胞。

在变态过程中，有极少数个体体表的幼体色素细胞逐渐缩小，呈细点状，后消失以后，在有眼侧或者局部没有出现个体较大的点状黑色素，形成了白化或者半白化的个体。有关漠斑牙鲆白化机理，以及其是否和牙鲆、大菱鲆白化现象存在的差异，还需要进一步的研究。