西施舌Coelomactra antiquata隶属于瓣鳃纲，异齿亚纲，帘蛤目，蛤蜊科，是一种有发展前途的海洋双壳贝类。自20世纪60年代起，国内便开始对其生物学、人工育苗进行研究^[1-8]，目前福建、广东、山东省已开展一定规模的育苗工作。但现有的人工育苗方式是以大量换水来改善培苗的水质条件，这种方式浪费水资源，而且受气候、海况条件的制约明显，遇到海区风浪大(特别是台风天气)或发生赤潮将影响供水。另外，这种方式无法避免由于换水而导致的贝类传染病发生。本试验采用不换水而利用光合细菌和芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂来调节和改善育苗水质，以期为改变这种传统的育苗方式提供一定的数据参考。

光合细菌作为水质净化剂和饲料添加剂应用于水产养殖的报道较多^[9]，已试用于栉孔扇贝、海湾扇贝、马氏珠母贝、鲍的育苗^[10-14]；芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂则已试用于鱼类养殖池塘的水质改良^[15-16]；把这两者综合运用于西施舌育苗则未见报道。

1.   材料与方法

1.1   材料

实验所用幼虫取自广东省惠来县海洋与水产局育苗场，规格为壳长90.1 μm, 壳高74.4 μm；试验用容器为42 cm(长)×28 cm(宽)×36 cm(深)的无毒塑料水槽；所用复合微生物为南海水产研究所饲料公司所生产的光合细菌菌液(密度达10×10⁹~20×10⁹ cell · mL^-1)和芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂(每g含活细胞10⁹个)。

1.2   方法

实验设A、B 2个大组，各分6个小组，每个小组设1个平行组，每组加入20 L过滤海水，水温为(24.6±0.025)℃、盐度33.2±0.65、溶氧(6.64±0.065)mg · L^-1、pH值8.02±0.023、NH₃-N为(30±2.5)μg · L^-1、NO₂-N为(4.5±0.5)μg · L^-1、NO₃-N为(32±5.5)μg · L^-1；A组幼虫密度为0.5 ind · mL^-1，B组幼虫培育密度为1 ind · mL^-1，A、B组的前4个小组加入不同量的光合细菌和复合微生物制剂，浓度如表 1。第5、第6组作为不加微生物的对照组，除了第6组每天换水外，其它组不换水；各组充气培养，初始投喂同量的扁藻(0.05×10⁴ cell · mL^-1 · d^-1)，以后每天视水中饵料及幼虫胃含物确定投饵量。控制实验室的光照为70~125 lx，温度为24.2~25.2℃，组间的温差不超过0.1℃。实验共进行8 d，每天早晚2次测量温度、溶氧、pH值；结束实验时测量各组幼虫的大小(随机测量10个幼虫的壳长、壳高)、存活率和水中氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐(采用美国HACH公司的水质分析仪DR/890进行测定)，每个项目的测定重复3次。重复实验一次。实验数据的处理采用生物统计方法。

表  1  各组光合细菌和复合微生物制剂的浓度

Table  1.  The concentrations of photosynthetic bacteria and Bacillus of different groups

组别 group	光合细菌/μL·L-1 photosynthetic bacteria	复合微生物制剂/μg·L-1 Bacillus
A1、B1	20	1
A2、B2	40	1
A3、B3	20	2
A4、B4	40	2
A5、B5	0	0
A6、B6	0	0

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2.   结果

2.1   实验的水质条件

实验期间所测水质的pH值在8.13~8.19之间变化，各组间同一时间所测值的差异不超过0.02；溶氧值在(6.50~6.74)mg · L^-1之间变化, 各组间的差异不超过0.14。实验结束时所测的水质指标分A、B两大组分别进行单因素方差分析，无论是A组或B组，各小组间的溶氧值、pH值的差异不显著(P>0.05)；A组的各小组间，NH₃-N值差异显著(P < 0.05)，多重比较显示A6的NH₃-N值除了与A4的差异不显著外，与其它组的差异显著，其它组之间的NH₃-N值差异不显著；NO₂-N、NO₃-N的值在A组各小组间差异不显著；NH₃-N、NO₂-N、NO₃-N的值分别在B组各小组间差异显著(P < 0.05)，多重比较结果显示：B6组的NH₃-N值与B3、B4的差异不显著，与B1、B2、B5的差异显著；B6组的NO₂-N值除了与B4的差异不显著，与其它组的差异显著；B6组的NO₃-N值与任一组的值差异显著。实验结束时各组水质状况的平均值如表 2所示。

表  2  各组的水质状况

Table  2.  The condition of water quality of different groups

组别 group	温度/℃ temperature	溶氧/mg·L-1 dissolved oxygen	pH值 pH value	NH3-N/μg·L-1	NO2-N/μg·L-1	NO3-N/μg·L-1
A1	24.75±0.023	6.68±0.042	8.18±0.015	55±5.8	4.8±0.96	42.5±9.5
A2	24.80±0.023	6.67±0.07	8.18±0.009	52.5±9.6	4.25±1.25	47.5±5
A3	24.75±0.023	6.64±0.064	8.17±0.018	50±8.2	4.5±0.58	47.5±5
A4	24.70±0.025	6.69±0.056	8.16±0.013	35±5.8	4.5±0.58	45±5.8
A5	24.75±0.023	6.68±0.065	8.18±0.018	47.5±5	5.5±5.8	50±8.2
A6	24.70±0.020	6.67±0.054	8.16±0.016	32.5±5	4.5±5.8	35±5.8
B1	24.75±0.020	6.67±0.065	8.18±0.023	105±12.9	13±2.2	60±11.5
B2	24.70±0.025	6.68±0.048	8.17±0.034	95±5.7	8.5±0.6	55±5.5
B3	24.75±0.025	6.68±0.042	8.18±0.021	72.5±9.5	7.5±0.6	62.5±12.6
B4	24.70±0.025	6.68±0.042	8.17±0.012	52.5±18.8	5.5±1.3	55±5.8
B5	24.75±0.025	6.67±0.068	8.18±0.018	107.5±15	6.75±9.5	65±5.8
B6	24.75±0.020	6.69±0.048	8.16±0.019	57.5±9.6	5.5±0.6	37.5±5

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综合以上分析可知，A组中，除了A6与A4的NH₃-N值比其它组小之外，其它水质指标没有显著差异；而对于B组来说，添加光合细菌和复合微生物量比较多的B4组，其NH₃-N、NO₂-N明显比其它组的低，与换水的对照组(B6)没有显著差异；对A组与B组相对应的小组进行比较，A组水体的NH₃-N、NO₂-N、NO₃-N含量比较低。

2.2   幼虫的生长及存活状况

对实验结束时所测A、B组幼虫的大小、成活率的数据分别进行单因素方差分析，结果显示：A组各小组之间的壳长、壳高具有差异显著性(P < 0.05)，成活率不存在差异显著性；B组各小组之间的壳长、壳高、成活率都具有差异显著性(P < 0.05)。多重分析显示A组中A4组的壳长、壳高与其它组的差异显著，其它小组之间的差异不显著；B组中B4组的壳长、壳高与其它小组的差异显著，其它小组之间的差异不显著，B1、B2、B5组的成活率都与B4、B6的差异显著，与其它小组之间的差异不显著，B4、B3、B6之间的成活率差异不显著。各小组幼虫的规格及成活率的平均值如表 3。

表  3  各组幼虫的规格及成活率

Table  3.  The larva size and survival rate of different groups

组别 group	壳长/μm shell length	壳高/μm shell height	成活率/% survival rate
A1	155.17±4.87	142.72±4.81	78±2.5
A2	154.40±5.91	143.36±5.27	77.5±2.6
A3	162.48±12.01	149.78±9.17	77.6±1.9
A4	171.89±3.48	154.61±4.49	77.2±2.4
A5	160.11±8.79	143.94±6.11	76.9±3.1
A6	160.92±8.41	147.33±8.29	77.5±2.4
B1	151.09±6.93	140.71±4.01	66.46±2.4
B2	153.69±4.77	141.73±3.59	66.74±3.06
B3	156.89±6.08	143.76±3.55	68.18±2.15
B4	166.60±5.89	152.00±3.27	71.84±3.86
B5	154.30±9.59	142.43±5.85	65.1±3.63
B6	157.81±8.45	144.61±7.49	71.08±2.86

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从上表可看出，A组中A4的壳长、壳高平均值最大，成活率与其它组的差别不大，B组中也是B4的壳长、壳高最大，其成活率与B6的相差无几，比其它组略高。从这些分析可以看出对于添加光合细菌和复合微生物最多的A4、B4组，幼虫的生长最佳；幼虫培育密度较小的A组，添加光合细菌和复合微生物对于幼虫成活率影响不大，而对于B组，添加光合细菌和复合微生物最多的B4组，幼虫的成活率比不换水的对照组(B5)高，与换水的对照组差异不显著。

3.   讨论

3.1   贝类的育苗方式

传统的贝类人工育苗是以换水来改善育苗的水质条件，这种方式既浪费人力和水资源, 又受气候、海况条件等的制约。国内的一些学者已开始对这种育苗方式的改变作了一些研究，如刘鹰等用封闭循环流水方式培育海湾扇贝、菲律宾蛤仔等贝类幼虫^[17]，林旋等采用添加光合细菌、减少换水量的方法进行鲍鱼人工育苗^[14]。本实验用添加光合细菌、芽胞杆菌属为主的微生物制剂而不换水的育苗方式。实验结果表明西施舌幼虫的培育密度为0.5 ind · mL^-1时，8 d内换水与不换水，对于幼虫的生长及成活率影响不大; 幼虫密度为1 ind · mL^-1时，添加光合细菌40 μL · L^-1、微生物制剂2 μg ·L^-1，可达到与换水对照组同样高的成活率而且幼虫的生长比对照组的快。南方的室内育苗生产中，西施舌幼虫的培育密度一般为1 ind · mL^-1左右，在这个密度下, 可借助有益微生物来改善育苗水质而不换水。

3.2   光合细菌、芽胞杆菌的作用

许多学者的研究表明，光合细菌、芽胞杆菌属为主的复合微生物可以降低养殖水体中氨氮、亚硝酸盐，促进养殖生物的生长及抑制病原菌的生长^[9-16]。如张庆等^[16]在罗非鱼养殖池中投放以芽孢杆菌为主的复合微生物后，鱼池底层溶氧量增加，氨氮和亚硝酸盐有效地降低，罗非鱼生长速度提高；原永党等^[12]在海湾扇贝育苗中施加光合细菌，结果促使浮游幼虫生长速度提高了18.3%，成活率提高20.3%。采用单一微生物菌种来控制、净化水质的方法存在一定的局限性^[9]，本实验把光合细菌、芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂综合应用起来试验其效果，从实验结果看，这两者的作用效果与其添加的浓度及幼虫的培育密度有关。对于幼虫培育密度比较小的A组，其水质状况比B组的好，除了A6、A4组的NH₃-N值比其它组的小、A4组的幼虫生长最快之外，添加光合细菌和复合微生物制剂对于其它水质指标及幼虫的成活率影响不大；而对于B组来说，添加光合细菌和复合微生物量比较多的B4组，其NH₃-N和NO₂-N明显比其它组的低，与换水的对照组(B6)没有显著差异，B4组的幼虫生长最快，成活率与B6的没有显著差异，比其它组的高。本实验中，添加光合细菌和复合微生物量最多的组合，其效果最佳，是否有更佳的组合，有待进一步研究。