光合细菌和复合微生物制剂在西施舌幼虫培育的应用

陈素文, 陈利雄, 吴进锋

陈素文, 陈利雄, 吴进锋. 光合细菌和复合微生物制剂在西施舌幼虫培育的应用[J]. 南方水产科学, 2005, 1(2): 26-30.
引用本文: 陈素文, 陈利雄, 吴进锋. 光合细菌和复合微生物制剂在西施舌幼虫培育的应用[J]. 南方水产科学, 2005, 1(2): 26-30.
CHEN Su-wen, CHEN Li-xiong, WU Jin-feng. Application of photosynthetic bacteria and Bacillus for rearing Coelomatra antiquate larvae[J]. South China Fisheries Science, 2005, 1(2): 26-30.
Citation: CHEN Su-wen, CHEN Li-xiong, WU Jin-feng. Application of photosynthetic bacteria and Bacillus for rearing Coelomatra antiquate larvae[J]. South China Fisheries Science, 2005, 1(2): 26-30.

光合细菌和复合微生物制剂在西施舌幼虫培育的应用

基金项目: 

农业部农业结构调整重大专项 20021302A

详细信息
    作者简介:

    陈素文(1968-), 女, 副研究员, 主要从事海水养殖研究。E-mail: chensuwen407@163.com

    通讯作者:

    吴进锋, E-mail: WU-jinfeng@163.com

  • 中图分类号: S917.1; S968.31+9

Application of photosynthetic bacteria and Bacillus for rearing Coelomatra antiquate larvae

  • 摘要:

    研究了不换水、添加以光合细菌和芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂于水中对西施舌(Coelomactra antiquata)育苗的影响。以幼虫培育密度为0.5,1 ind · mL-1,分2大试验组进行不换水而添加不同浓度光合细菌和复合微生物制剂的试验,结果表明:这2大组中都是添加光合细菌40 μL · L-1、微生物制剂2 μg · L-1的小组, 其幼虫生长最快;幼虫密度为0.5 ind · mL-1的试验组,8 d内换水与不换水,添加与不添加复合微生物, 对于幼虫成活率影响不大,而幼虫密度为1 ind · mL-1的试验组必需添加一定量的微生物(光合细菌40 μL · L-1、微生物制剂2 μg · L-1)才可达到与换水对照组同样高的成活率。

    Abstract:

    A mode of using photosynthetic bacteria and Bacillus for rearing Coelomatra antiquate larvae under no water exchange was studied. The experiment was designed in which two groups of larval density(0.5, 1 ind · mL-1) were treated with different concentration of probiotic bacteria without water exchange, and control group with and without water exchange. The best growth rate was found in group treated with 40 μL · L-1 photosynthetic bacteria and 2 μg · L-1 Bacillus in this experiment. For the groups reared at 0.5 ind · mL-1, survival was not significantly different. For the groups reared at 1 ind · mL-1, only when treated with 40 μL · L-1 photosynthetic bacteria and 2 μg · L-1 Bacillus, was larvae survival not significanty different from the control group with water exchange.

  • 紫菜(Porphyra)属于红藻门、红毛菜科,已经报道有134个物种,广泛分布于从寒带到亚热带的潮间带海域。紫菜是一类重要的经济红藻,作为目前世界上人工养殖海藻中经济价值最高的种类,仅中、日、韩三国紫菜的初级加工品年产值就超过20×109美元[1]。中国是世界紫菜的主要生产国和出口国,主要栽培种类包括条斑紫菜(P.yezoensis)和坛紫菜(P.haitanensis)。长期以来紫菜的遗传育种研究以诱变育种、单性生殖、选择育种等经典育种技术为主,相对于蓬勃发展的动植物分子育种研究而言,分子标记技术尤其是共显性分子标记数量少、应用种类有限,制约了紫菜遗传改良工作的快速发展。微卫星又称为简单序列重复(simple sequence repeat,SSR),作为一种共显性遗传标记,具有多态性高、重复性好等优点[2],已被广泛应用到海带属(Laminaria; Saccharina)[3-4]、江蓠属(Gracilaria)[5]、龙须菜属(Gracilariopsis)[6]、紫菜属(Porphyra)[7-8]等重要大型海藻的遗传多样性、遗传图谱构建和QTL定位研究中。

    皱紫菜(P.crispata)是中国南方沿海野生紫菜的主要种类之一,具有重要的经济价值和药用价值。研究表明,皱紫菜的高温耐受性较坛紫菜和条斑紫菜要强,对环境具有更强的适应能力[9]。目前中国已经进行皱紫菜人工栽培试验,增加紫菜栽培新种类对于解决坛紫菜栽培生产中因高温而出现“烂菜”等问题具有重要的意义。半叶紫菜(P.katadai)和少精紫菜(P.oligospermatangia)均为野生种类,主要分布于北方沿海地区,和条斑紫菜都属于雌雄同体的紫菜种类,也是紫菜属遗传学研究的良好试验材料。微卫星标记在紫菜属不同物种中的研究应用较少,关于皱紫菜、半叶紫菜和少精紫菜等紫菜属物种的微卫星标记尚未见报道。笔者利用微卫星DNA分子标记技术分析皱紫菜等5个紫菜属物种的遗传结构及种质,以便更有效地推动紫菜种质资源评价并辅助紫菜遗传改良,同时对微卫星标记在紫菜属物种遗传分析中的通用性进行探讨,以期为紫菜属的分子遗传学研究提供依据。

    试验所用的紫菜属5个物种10个品系自由丝状体(表 1)由中国海洋大学汤晓荣老师惠赠,培养于中国海洋大学海洋生物遗传育种研究室。

    表  1  此试验所用的10个品系紫菜丝状体信息表
    Table  1  Information of 10 lines of Porphyra conchocelis in this study
    序号
    No.
    品系代码
    line code
    物种名称
    species name
    1 PH1 坛紫菜P.haitanensis
    2 PH2 坛紫菜P.haitanensis
    3 PH3 坛紫菜P.haitanensis
    4 PH4 坛紫菜P.haitanensis
    5 PK1 半叶紫菜P.katadai
    6 PK2 半叶紫菜P.katadai
    7 PY1 条斑紫菜P.yezoensis
    8 PY2 条斑紫菜P.yezoensis
    9 PO 少精紫菜P.oligospermatangia
    10 PC 皱紫菜P.crispata
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    紫菜丝状体基因组DNA的提取均采用植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)法提取,用Nanodrop 1000分光光度计测定DNA的光密度(OD)和浓度,并在1.0%琼脂糖凝胶上电泳(100 V 30 min)检测,用JS-380A自动凝胶图像分析仪拍照并进一步检验DNA的质量和浓度。

    现有的文献报道紫菜微卫星引物共68对:25对引自SUN等[10]发布的微卫星引物,10对引自刘必谦等[11]发布的微卫星引物,11对引自ZUO[12]发布的微卫星引物,8对引自XIE等[13]发布的微卫星引物,14对引自KONG等[14]发布的微卫星引物,引物由华大基因公司合成。以5个不同物种的丝状体(PH2, PK2, PY2, PO和PC)DNA样品为模板,对所有引物进行PCR筛选,从中选择扩增稳定且条带清晰的微卫星引物(引物信息见表 2)。

    表  2  20对微卫星引物序列和特异退火温度
    Table  2  Sequence of 20 pairs of microsatellite marker primers and specific annealing temperature for PCR amplification
    引物编号
    primer No.
    引物序列(5′→3′)
    primer sequence
    重复序列
    repetitive sequence
    退火温度/℃
    annealing temperature
    片段范围
    fragment range
    GenBank登录号
    GenBank accession No.
    参考文献
    reference
    SSR-ZC1 TTCGCTGCGTTTCACCTTACATTT (TGCG)6 60 205 AV434771 [10]
    ACAAGGCCAACCCGAACACA
    SSR-ZC2 GGCTGCGGCTGAGTCACAGA (AGC)8 60 235 AU194221 [10]
    GTCGCTCCAACTCCTCCTGCT
    SSR-ZC3 TGGTGCTGTCTTCCAACGAGTA (AGC)13 60 245 AU196122 [10]
    CGGCTGTCGCACCTCGTTATA
    SSR-ZC7 CGCTCAACCACTTCGTCAG (AAC)10+1 58 261 AU191538 [10]
    CATTGTTGGCGTTGTTGTCATA
    SSR-ZC9 CCGTCGTCAGCAGGAGCA (GGC)7 60 200 AV434560 [10]
    ATGTGAGAAGCCAGTAGGGAAAGT
    SSR-ZC10 ACTTCCATCGCTGTCTTCGCT (AGC)8 60 196 AU192094 [10]
    CTGAGCTGCGTGTTGTGGTT
    SSR-ZC12 TCAACCATCAGCCATACCGAC (ACC)11 58 192 AV435510 [10]
    GACATGTCCGCCACCTTGTA
    SSR-ZC15 TGACTTCCTCATCGACATTGT (AGC)8 55 319 AU187439 [10]
    GCCATAGTACATTTGTTGCTG
    SSR-ZC16 TACCAGGTCGACCAGGAGCA (AGC)11 60 291 AU193458 [10]
    TCCAACTCTGCAGTGTCCGTT
    SSR-ZC19 ACCTCCTCGGCTACTTCAGA (AGC)7 58 276 AV431181 [10]
    GGATACAACGCCTGCTCCAT
    SSR-ZC20 GGCAGCAGCCATGATGTA (AGC)8+8 55 339 AV433675 [10]
    CCGTCAGGCAGAAGAGAAT
    SSR-ZC23 CAAGGGCTACTGCTACTA CAA (AAC)17 55 249 AU195299 [10]
    TACAAAAAGACTCTCGTG GCA
    SSR-ZC25 CCGTGCTACTACGGCTA CAA (AAC)9+11 58 302 DN606134 [10]
    GTCCGGTGCAGGTTG TTCT
    SSR-ZC36 CCAACGATGGGTTTCTTCAA 55 300 [7]
    ACTTCATGCCCCTGCCGATG
    SSR-ZC38 GGACAAGGGGTAATGGCT (CA)17 50 212~226 DQ831155 [12]
    TGGAAAACTTCCTGGGTG
    SSR-ZC43 GGAATGCCTTGCACCTGG (GT)26 55 408~420 DQ831185 [12]
    CACTATTGACCGAATCCGCTAC
    SSR-ZC44 CGTGCGAGTCATAGTCTGCT (GTGA)26 55 191~200 DQ831194 [12]
    ACAGCCAGTGCAAGAACACC
    SSR-ZC47 CTAGACGGAGTGCGGCTGAC (CA)9 58 176~196 DQ831197 [12]
    GCTCCTCCACGAGCATCAGG
    SSR-ZC54 GGTGGCAGTGAAGCGAAACA (CG)7 60 229 DN607742 [13]
    ACCCAGCAAGTGCGTGAGC
    SSR-ZC61 AACAGAGATACGGAGAGC (GT)8..(TG)11 50 276 EU670707 [14]
    ATCAGATTGGACTTGCCT
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    利用筛选出的微卫星引物对5个物种的10个丝状体品系进行PCR扩增。

    PCR反应在PCR仪(BIOER)上进行。反应体系为20 μL,试剂终浓度分别为1.5 mmol·L-1,10×PCR buffer[含氯化镁(MgCl2)], 0.125 mmol·L-1dNTP, 20 ng模板DNA,0.05 U TaqDNA聚合酶,微卫星引物1.0 μL。

    PCR反应程序为94 ℃变性5 min;接35个循环为94 ℃ 50 s,退火45 s(退火温度因引物而定),72 ℃ 1 min;72 ℃最后延伸10 min, 4 ℃保存,1.0%琼脂糖电泳,100 V 50 min,检测PCR产物。取部分选扩产物(3 μL)与等体积的上样缓冲液(3 μL)充分混匀,95 ℃变性5 min。点样6 μL,在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,仪器为DYY-12C电泳仪(北京市六一仪器厂出品),电泳前进行30 min预电泳,最大功率恒功率电泳2 h。银染程序参照SANGUINETTI等[15]报道的方法。室温下自然干燥,用扫描仪扫描并保存图像。

    微卫星标记按共显性标记进行数据统计及分析。根据分子量大小对扩增结果读带,以二倍体形式记录,从大到小依次记为A,B,C……。利用POPGENE32(V 1.31) (ftp://ftp.microsoft.com/Softlib/MSLFILES/HPGL.EXE)软件计算各群体的观测有效等位基因数(Ne)、多态位点百分率(P)、基因多样性指数(Nei′s)、Shannon信息指数(I)、表观杂合度(Ho)和预期杂合度(He)、Nei′s标准遗传距离(D)、遗传相似度和遗传分化指数(Fst)。根据Nei′s标准遗传距离,利用MEGA 4.0 (http://www.megasoftware. net/)中的非加权平均算术法(UPGMA)对各种群进行聚类分析,自展检验1 000次。

    所提取的紫菜丝状体基因组DNA,OD260/OD280为1.7~1.9,质量浓度为20~40 ng·μL-1,没有DNA降解、RNA残留及蛋白质污染,可以满足微卫星遗传分析的需要(图 1)。

    图  1  紫菜丝状体基因组DNA在1.0%的琼脂糖电泳检测结果
    M.DL 2 000分子量标准;1~4. PH1、PH2、PH3、PH4,坛紫菜; 5~6. PK1、PK2,半叶紫菜; 7~8. PY1、PY2, 条斑紫菜;9. PO,少精紫菜;10.PC, 皱紫菜
    Fig. 1  Electrophoresis in 1% agarosegel of genomic DNA obtained from conchocelis of Porphyra
    M. DL 2 000 DNA marker; 1~4. PH1, PH2, PH3, PH4, P.haitanensis; 5~6. PK1, PK2, P.katadai; 7~8. PY1, PY2, P.yezoensis; 9. PO, P.oligospermatangia; 10. PC, P.crispata

    从68对微卫星引物中筛选出20对扩增稳定、多态性高的引物(表 2),其部分扩增结果见图 2。其中有14对引物在5个物种中均可扩增出稳定的条带,扩增片段大小为192~420 bp,且这14对引物中有10对可在10个丝状体中扩增出稳定的条带。

    图  2  部分微卫星引物(左:SSR-ZC15;右:SSR-ZC20)在10个紫菜丝状体中的扩增结果
    M.DL100分子量标准;1~10. PH1,PH2,PH3,PH4,PK1,PK2,PY1,PY2,PO,PC
    Fig. 2  Electrophoresis of part of microsatellite primer-pairs (L: SSR-ZC15; R: SSR-ZC20) in 10 lines of Porphyra conchocelis
    M. DNA maker DL100; 1~10. PH1, PH2, PH3, PH4, PK1, PK2, PY1, PY2, PO, PC

    10个紫菜丝状体个体间的平均Ne为2.37,平均He为0.550 9,I为0.899 9,Fst为0.400 0~1.000 0,平均为0.733 3。10个品系的紫菜丝状体具有良好的遗传多样性,且不同材料之间遗传分化较明显(表 3)。

    表  3  20个微卫星的遗传多样性指数
    Table  3  Genetic diversity index of 20 microsatellite loci
    locus 表观杂合度
    Ho
    预期杂合度
    He
    有效等位基因数
    Ne
    Shannon信息指数
    I
    遗传分化指数
    Fst
    基因流
    Nm
    SSR-ZC1 0.700 0 0.647 4 2.60 1.010 4 0.430 9 0.330 2
    SSR-ZC2 1.000 0 0.733 3 2.57 1.011 4 0.844 6 0.046 0
    SSR-ZC3 0.333 3 0.333 3 1.38 0.450 6 0.946 5 0.014 1
    SSR-ZC7 0.000 0 0.484 8 1.80 0.636 5 1.000 0 0
    SSR-ZC9 0.000 0 0.189 5 1.22 0.325 1 1.000 0 0
    SSR-ZC10 0.100 0 0.721 1 3.17 1.565 4 0.927 0 0.019 7
    SSR-ZC12 0.600 0 0.526 3 2.00 0.693 1 0.400 0 0.375 0
    SSR-ZC15 0.100 0 0.415 8 1.65 0.687 4 0.873 4 0.036 2
    SSR-ZC16 0.444 4 0.679 7 2.79 1.161 6 0.718 3 0.098 0
    SSR-ZC19 0.666 7 0.797 4 4.05 1.565 4 0.625 0 0.150 0
    SSR-ZC20 0.784 2 0.784 2 3.92 1.449 0 0.932 9 0.018 0
    SSR-ZC23 0.500 0 0.575 0 2.17 0.921 5 0.716 3 0.099 0
    SSR-ZC25 0.600 0 0.563 2 2.15 0.845 1 0.439 3 0.319 1
    SSR-ZC36 0.111 1 0.385 6 1.57 0.654 7 0.896 9 0.028 7
    SSR-ZC38 0.500 0 0.763 2 3.64 1.415 0 0.655 2 0.131 6
    SSR-ZC43 0.666 7 0.732 0 3.24 1.239 5 0.600 0 0.166 7
    SSR-ZC44 0.571 4 0.571 4 2.13 0.991 1 0.740 3 0.087 7
    SSR-ZC47 0.285 7 0.439 6 1.69 0.598 3 0.859 2 0.041 0
    SSR-ZC54 0.100 0 0.542 1 2.06 0.823 7 0.902 9 0.026 9
    SSR-ZC61 0.500 0 0.684 2 2.86 1.161 1 0.615 4 0.156 3
    平均mean 0.375 2 0.550 9 2.37 0.899 9 0.733 0 0.091 1
    标准差
    standard deviation
    0.288 5 0.205 5 0.872 7 0.392 6
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    10个品系紫菜丝状体的遗传相似指数为0.254 6~0.899 4,平均为0.474 9,最小值出现在皱紫菜(PC)和半叶紫菜(PK1)中,最大值出现在条斑紫菜的2个不同品系中;遗传距离为0.106 0~1.406 6,平均为0.792 3,最大值出现在坛紫菜(PH1)和少精紫菜(PO)中,最小值出现在条斑紫菜的2个不同品系中(表 4)。

    表  4  10个紫菜品系遗传距离(左下方)和相似性系数(右上方)矩阵
    Table  4  Genetic distance (lower-trangular data matrix) and genetic similarity (upper-triangular data matrix) of 10 Porphyra lines
    POP ID 坛紫菜1
    PH1
    坛紫菜2
    PH2
    坛紫菜3
    PH3
    坛紫菜4
    PH4
    半叶紫菜1
    PK1
    半叶紫菜2
    PK2
    条斑紫菜1
    PY1
    条斑紫菜2
    PY2
    少精紫菜
    PO
    皱紫菜
    PC
    坛紫菜1 PH1
    P.haitanensis 1
    0.445 4 0.471 9 0.506 0 0.307 7 0.302 2 0.296 9 0.373 1 0.245 0 0.423 1
    坛紫菜2 PH2
    P.haitanensis 2
    0.808 9 0.753 8 0.619 8 0.335 0 0.296 1 0.348 5 0.377 2 0.384 7 0.477 0
    坛紫菜3 PH3
    P.haitanensis 3
    0.751 1 0.282 7 0.860 8 0.555 6 0.527 4 0.485 8 0.465 1 0.391 2 0.436 4
    坛紫菜4 PH4
    P.haitanensis 4
    0.681 2 0.478 4 0.149 8 0.474 3 0.414 0 0.444 9 0.380 4 0.338 9 0.379 5
    半叶紫菜1 PK1
    P.katadai 1
    1.178 5 1.093 6 0.587 8 0.745 8 0.872 9 0.502 5 0.465 1 0.425 3 0.254 6
    半叶紫菜2 PK2
    P.katadai 2
    1.196 7 1.217 1 0.639 9 0.881 8 0.136 0 0.526 4 0.488 2 0.467 7 0.357 1
    条斑紫菜1 PY1
    P.yezoensis 1
    1.214 3 1.054 2 0.722 0 0.809 8 0.688 1 0.641 8 0.899 4 0.692 4 0.493 5
    条斑紫菜2 PY2
    P.yezoensis 2
    0.985 9 0.975 1 0.765 5 0.966 6 0.765 5 0.717 0 0.106 0 0.721 8 0.519 7
    少精紫菜PO
    P.oligospermatangia
    1.406 6 0.955 4 0.938 4 1.082 1 0.855 1 0.759 9 0.367 6 0.326 0 0.567 9
    皱紫菜PC
    P.crispata
    0.860 2 0.740 2 0.829 1 0.968 8 1.368 1 1.029 6 0.706 3 0.654 5 0.565 8
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    根据各个体间的遗传距离进行UPGMA聚类分析(图 3),这5个物种的10个品系的紫菜丝状体可以分成2个亚群,坛紫菜单独聚为一支;半叶紫菜、条斑紫菜、少精紫菜和皱紫菜聚为另一支,其中条斑紫菜的2个品系首先聚在一块,再与少精紫菜聚在一起,接着与皱紫菜相聚,最后与半叶紫菜汇聚。

    图  3  10个紫菜品系的UPGMA聚类图
    Fig. 3  Phylogenetic tree of 10 Porphyra lines using method of UPGMA

    微卫星标记的缺点在于微卫星引物具有种属特异性,在对一个物种首次进行微卫星分析时必须要进行微卫星引物的开发,较费时耗力[10]。有关研究认为微卫星引物可以在近缘物种间进行转移应用,但能否转移以及转移的成功率在不同的物种间表现较大的差异[16-17]。SUN等[10]、刘必谦等[11]、XIE等[13]和KONG等[14]通过对一个紫菜属物种设计的微卫星引物进行了引物种间转移扩增研究,证明微卫星引物在不同物种间具有高的通用性。笔者从68对微卫星引物中筛选出20对通用微卫星引物,筛选比例为29.4%,其中14对引物均能在5个物种中进行有效扩增,证实上述选扩的微卫星位点的侧翼序列在坛紫菜、条斑紫菜、少精紫菜、半叶紫菜及皱紫菜具有比较高的保守性。

    所研究的68对微卫星引物中63.24%来自紫菜EST序列,36.76%来自基因组文库,而筛选出的20对引物中有15对来自GenBank中紫菜EST数据库,占34.88%,5对来自基因组,占20%。EST序列来自于有表达意义的mRNA反转录的cDNA,相对于含有内含子的基因组文库,在物种进化中更具保守性,来自于EST序列的微卫星引物可以在更大范围的紫菜属内扩增出多态性位点。因此,EST-SSR与基因组SSR相比更容易在不同物种中进行转移扩增。

    Ne作为衡量SSR引物多态性高低的一个标准,表明了物种或品系间的遗传多样性。Ne越高,物种或品系间的遗传多样性越高,在笔者的研究中每对引物可扩增的Ne平均为2.37。张鹏等[18]对坛紫菜9个品系的亲缘关系进行SSR标记分析,平均Ne为1.72。KONG等[14]用微卫星标记对条斑紫菜进行遗传分析,平均Ne为1.81。XIE等[13]用相同标记分析了坛紫菜15品系的遗传多样性,平均Ne为2.81,此研究获得的Ne结果与前人研究相似,同时显示种间的遗传多样性高于种内。

    DAYANANDAN等[19]用4个微卫星引物对就可区分白杨(Populus tremuloides)的34个品系,只有2个品系没有被区分开;BECHER等[20]用3对引物就可以很好区分44个天竺葵(Pelargonium)品系。此研究从68对微卫星引物中筛选出20对引物,多态性比例高达95.25%,这可能与引物来源有关,笔者所用的引物63.24%来自EST序列。然而,刘必谦等[7]认为从基因组DNA筛选出的微卫星,其信息量要比来自EST的丰富,而此研究结果并不支持这一观点。崔灵英等[21]用ISSR标记对4种紫菜叶状体进行分析,获得多态性条带比例达95.5%。贾建航等[22]在对15个紫菜种(系)的丝状体进行RAPD分析时得到多态性比例达97.1%;杨锐等[23]用AFLP对坛紫菜8个品系的丝状体进行分析得到96.97%的多态性位点,这些结果与笔者的研究结果相似,进一步显示了紫菜物种的遗传变异相当丰富。

    5个紫菜属物种10个品系丝状体的遗传相似指数平均为0.474 9,说明个体间的亲缘关系比较远。曾呈奎等[1]曾根据叶片边缘的细胞排列方式将真紫菜亚属分为全缘紫菜组、刺缘紫菜组和边缘紫菜组,并且认为该特征具有进化上的意义。根据这一分类系统皱紫菜、坛紫菜均属于刺缘紫菜组,条斑紫菜、半叶紫菜和少精紫菜属于全缘紫菜组。此研究中5个物种中少精紫菜和条斑紫菜首先聚在一起,两者的遗传距离最为接近,这一结果与崔灵英等[21]用ISSR分子标记对紫菜叶状体分析的结果一致,也符合经典分类学结果;根据笔者的研究结果,皱紫菜聚类在条斑紫菜、半叶紫菜和少精紫菜的内部,而不是与坛紫菜聚类为一支,这与杨立恩等[24]对紫菜叶状体进行rbcL基因分类分析结果相矛盾,同时此研究结果与经典形态分类学认为皱紫菜和坛紫菜都属于刺缘紫菜组的结论也不一致。造成这些差异的原因可能是:1)试验材料不一样,笔者采用的试验材料为丝状体,而其他学者为叶状体;2)各种标记手段本身也存在着差异。

    前人的研究表明,坛紫菜、条斑紫菜、皱紫菜、半叶紫菜和少精紫菜这5种紫菜之间具有重要生物学特征的差异,例如少精紫菜和条斑紫菜染色体n=3,皱紫菜、半叶紫菜和坛紫菜染色体n=5[1],这一研究结果与笔者的聚类分析结果有一定的相关性。通过聚类分析结果可以较真实地反映这10个品系紫菜丝状体间的亲缘关系,进一步显示微卫星分子标记在大型海藻分类学上具有一定的应用价值。

  • 表  1   各组光合细菌和复合微生物制剂的浓度

    Table  1   The concentrations of photosynthetic bacteria and Bacillus of different groups

    组别
    group
    光合细菌/μL·L-1
    photosynthetic bacteria
    复合微生物制剂/μg·L-1
    Bacillus
    A1、B1 20 1
    A2、B2 40 1
    A3、B3 20 2
    A4、B4 40 2
    A5、B5 0 0
    A6、B6 0 0
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    表  2   各组的水质状况

    Table  2   The condition of water quality of different groups

    组别
    group
    温度/℃
    temperature
    溶氧/mg·L-1
    dissolved oxygen
    pH值
    pH value
    NH3-N/μg·L-1 NO2-N/μg·L-1 NO3-N/μg·L-1
    A1 24.75±0.023 6.68±0.042 8.18±0.015 55±5.8 4.8±0.96 42.5±9.5
    A2 24.80±0.023 6.67±0.07 8.18±0.009 52.5±9.6 4.25±1.25 47.5±5
    A3 24.75±0.023 6.64±0.064 8.17±0.018 50±8.2 4.5±0.58 47.5±5
    A4 24.70±0.025 6.69±0.056 8.16±0.013 35±5.8 4.5±0.58 45±5.8
    A5 24.75±0.023 6.68±0.065 8.18±0.018 47.5±5 5.5±5.8 50±8.2
    A6 24.70±0.020 6.67±0.054 8.16±0.016 32.5±5 4.5±5.8 35±5.8
    B1 24.75±0.020 6.67±0.065 8.18±0.023 105±12.9 13±2.2 60±11.5
    B2 24.70±0.025 6.68±0.048 8.17±0.034 95±5.7 8.5±0.6 55±5.5
    B3 24.75±0.025 6.68±0.042 8.18±0.021 72.5±9.5 7.5±0.6 62.5±12.6
    B4 24.70±0.025 6.68±0.042 8.17±0.012 52.5±18.8 5.5±1.3 55±5.8
    B5 24.75±0.025 6.67±0.068 8.18±0.018 107.5±15 6.75±9.5 65±5.8
    B6 24.75±0.020 6.69±0.048 8.16±0.019 57.5±9.6 5.5±0.6 37.5±5
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    表  3   各组幼虫的规格及成活率

    Table  3   The larva size and survival rate of different groups

    组别
    group
    壳长/μm
    shell length
    壳高/μm
    shell height
    成活率/%
    survival rate
    A1 155.17±4.87 142.72±4.81 78±2.5
    A2 154.40±5.91 143.36±5.27 77.5±2.6
    A3 162.48±12.01 149.78±9.17 77.6±1.9
    A4 171.89±3.48 154.61±4.49 77.2±2.4
    A5 160.11±8.79 143.94±6.11 76.9±3.1
    A6 160.92±8.41 147.33±8.29 77.5±2.4
    B1 151.09±6.93 140.71±4.01 66.46±2.4
    B2 153.69±4.77 141.73±3.59 66.74±3.06
    B3 156.89±6.08 143.76±3.55 68.18±2.15
    B4 166.60±5.89 152.00±3.27 71.84±3.86
    B5 154.30±9.59 142.43±5.85 65.1±3.63
    B6 157.81±8.45 144.61±7.49 71.08±2.86
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  • 收稿日期:  2005-02-21
  • 刊出日期:  2005-05-19

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