遮目鱼(Chanos chanos)隶属于鲱形目、遮目鱼科、遮目鱼属^[1]，又称虱目鱼，广泛分布于印度洋至太平洋的热带亚热带地区，属于暖水性广盐性的海水鱼类，中国南海及台湾附近海域均有分布。由于生长迅速、抗逆性强、口感鲜美等优点，遮目鱼在中国台湾及东南亚地区市场占有率较高。中国对该鱼的研究多集中在养殖技术上^[2]，且研究资料较少，其他方面的研究仍是空白。中国水产科学研究院南海水产研究所较早对遮目鱼开展了相关研究^[3-5]，并于2012年与茂名金阳热带海珍养殖有限公司合作，在中国首次取得人工繁育成功。

该研究通过阶段性逐步降低盐度的方法将遮目鱼幼鱼驯化至淡水条件下进行养殖试验，统计成活率和生长率，观察鳃器官结构的变化，并与淡水急性胁迫条件和自然海水条件下饲养的幼鱼进行比较分析，对遮目鱼的盐度适应性和淡水驯化养殖进行了初步摸索，以期为遮目鱼的淡水驯化养殖模式提供技术参考。

1.   材料与方法

1.1   试验材料

从2013年3月~8月在茂名电白人工培育2.5 cm以上的鱼苗中选取全长为(2.850±0.356)cm，体质量为(0.215±0.083)g的健康幼鱼，于室内水箱中用自然海水(盐度27)暂养2 d后开始试验。

1.2   试验组的设计

盐度设置为不经过驯化过程直接投入至淡水中养殖(FW组)、自然海水(盐度27)中养殖(SW组)和经过6 d(每天降低5个盐度梯度至淡水结束)驯化至淡水中养殖(FWA组)3个试验组。每组3个平行，每个平行组选取20尾健康幼鱼于44 cm×31.5 cm×25.5 cm的水箱中进行试验，试验周期为30 d。每天统计试验组的死亡幼鱼数量，及时捞出并记录，试验在室内进行，连续充气，水温25.8~29.8 ℃，pH 7.8~8.2，光照强度200~1 200 lx。每天换水1次，换水量为2/3。培育用水为经过曝气的自来水和沙滤沉淀的海水。每天投喂鳗鱼粉2次，日投饵量为体质量的3%。

1.3   生长指标的计算

试验开始前和结束后的幼鱼用电子天平称量体质量，并测量全长、体长等数据。按以下公式计算各生长指标：

成活率(%)=100×N_f/N₀

增重率(%)=100×(W_f-W₀)/W₀

特定生长率(SGA，% · d^-1)=100×(lnW_f-lnW₀)/t

其中N_f、N₀分别为试验初始和终末时的鱼尾数；W₀、W_f分别为试验开始和结束时的鱼体质量(g)；t为试验时间(d)。

1.4   样品的制备与观察

试验结束后每个平行组随机取2尾幼鱼，每个试验组共计6尾幼鱼。迅速取出幼鱼的右侧第二鳃弓，浸入10%中性甲醛溶液固定24 h。样品固定后自来水流水冲洗，各级乙醇逐步脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5 μm切片，苏木精-伊红染色，封片后自然风干。ZEISS Axio Scope.A₁型光学显微镜下观察和拍照，每个试验组随机选取3张200倍倍数下拍照的图片，使用软件Image-Pro Plus 6.0对图片进行校准并测量图片上的所有鳃小片直径。

1.5   数据处理

对幼鱼的生长数据及鳃器官表征数据进行单因子方差分析，不同处理间的数据进行了Duncan多重比较，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。数据的统计分析采用SPSS 13.0进行，图表制作利用Excel 2010完成。

2.   结果

2.1   遮目鱼幼鱼的成活和生长

直接将遮目鱼幼鱼投入到淡水中时，FW组幼鱼集群在水箱中窜动，摄食量较少，1周后摄食正常。SW组幼鱼或集群贴壁游动，或自由游弋。FWA组幼鱼试验开始时活动情况与SW组相同，驯化开始至结束时幼鱼无集群窜动现象。SW组和FWA组试验期间摄食均正常。试验开始1 d后FW组幼鱼出现大量死亡，3 d后成活数量趋于稳定至试验结束。SW组和FWA组幼鱼试验期间死亡数量较少。试验结束时各试验组幼鱼的成活情况见表 1。FW组成活率最低(73.33%)，SW组和FWA组的成活率较高(≥95%)，其中FWA组成活率最高(100%)，FW组与其他2组成活率差异显著(P＜0.05)。幼鱼的生长情况见表 1和图 1，与在自然海水条件下相比，遮目鱼幼鱼在淡水条件下生长较快，增重率和特定生长率都远远高于自然海水组(P＜0.05)，试验结束时FW组和FWA组的幼鱼体质量和体长显著高于SW组，差异极显著(P＜0.01)，而FW组和FWA组幼鱼之间的体质量和体长差异不显著(P＞0.05)。

表  1  遮目鱼幼鱼的成活与生长

Table  1.  Survival and growth of juvenile C.chanos  %

试验组 group	成活率 survival rate	增重率 weight gain rate	特定生长率 specific growth rate
急性淡水组(FW) freshwater without acclimation	73.33±7.86a	573.94±231.56a	6.23±1.16a
自然海水组(SW) sea water	95±5b	212.46±13.02b	3.80±0.14b
淡水驯化组(FWA) freshwater acclimation	100±0b	664.96±113.07a	6.77±0.52a
注：不同字母代表不同处理间有显著差异(P＜0.05) Note：Different letters indicate significant difference among different treatments (P＜0.05).

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图  1  遮目鱼幼鱼的生长

FW. 急性淡水组；SW. 自然海水组；FWA. 淡水驯化组；不同的字母代表不同处理间有显著差异(P＜0.05)

Figure  1.  Growth of juvenile C.chanos

FW. freshwater without acclimation; SW. sea water; FWA. freshwater acclimation; different letters indicate significant difference among different treatments (P < 0.05).

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2.2   遮目鱼幼鱼鳃器官的变化

普通光学显微镜下，遮目鱼幼鱼鳃上细胞的细胞核被苏木素染为蓝紫色，细胞质被伊红染为红色或浅红色(图 2)。鳃上可观察到上皮细胞(pavement cell，PVC)、血细胞(blood cell，BC)和线粒体丰富细胞(mitonchondrion-rich cell，MRC)。FW和FWA组幼鱼的鳃小片明显增生，鳃小片上细胞膨大，细胞质染色较浅(图 2-a、b)，而SW组幼鱼的鳃小片上无细胞膨大和增生(图 2-c)。SW组幼鱼的鳃小片直径为(6.216±0.736)μm，FW和FWA组幼鱼的鳃小片直径分别为(12.944±1.563)μm和(15.359±1.747)μm，与SW组相比，FW和FWA组鳃小片的厚度增加，差异极显著(P＜0.01)。FW组幼鱼的鳃小片部分上皮细胞脱落(图 2-d)，而SW和FWA组幼鱼的鳃小片未出现细胞脱落的现象或脱落现象较少(图 2-b、c)。

图  2  淡水驯化对遮目鱼幼鱼鳃器官的影响

a. FW组；b. FWA组；c. SW组；d. FW组；↑示上皮细胞脱落；BC. 血细胞；BF. 鳃丝；GL. 鳃小片；MRC. 线粒体丰富细胞；PVC. 扁平上皮细胞；标尺=30 μm

Figure  2.  Effect of freshwater acclimation on gills of juvenile C.chanos

a. freshwater without acclimation; b. freshwater acclimation; c. sea water; d. freshwater without acclimation; "↑"showing epithelial cell defluvium; BC. blood cell; BF. branchial filament; GL. branchial lamellae; MRC. mitonchondrion-rich cell; PVC. pavement cell; bar=30 μm

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SW组幼鱼的鳃丝和鳃小片基部具有较多数量的线粒体丰富细胞(图 2-c)，该类型细胞呈圆形或卵圆形，体积较大，核大且基位，细胞质伊红染色较深。观察到FW和FWA组的鳃丝及鳃小片基部与SW组相同类型的线粒体丰富细胞数量多，但细胞质染色较浅，而鳃小片上增生出与SW组不同类型的线粒体丰富细胞(图 2-a、b、d)。FW和FWA组鳃小片膨大、增生，导致鳃小片直径增加的细胞多为线粒体丰富细胞，该类型细胞呈椭圆形，体积较小，核中位或偏中位，数量多，细胞质伊红染色较浅。

3.   讨论

3.1   淡水驯化养殖条件下遮目鱼幼鱼的成活

不同种鱼类的适应盐度范围不同^[6-7]，且同种鱼类不同生长阶段对盐度的耐受力也不同^[8-9]，仔稚鱼、幼鱼的适应能力要明显弱于成鱼。广盐性鱼类相对于狭盐性鱼类可以适应较广的盐度范围，但急剧的盐度胁迫会使得广盐性鱼类无法在短时间内对自身渗透压稳定进行控制，故外环境突然变化时，内环境稳态失衡，导致死亡率上升。即使是广盐性鱼类，对盐度也有一定的适应范围，当盐度变化超过其耐受极限范围仍会造成体内渗透压的失衡，影响成活。

遮目鱼具有生殖洄游的习性，能适应较广的盐度范围，为典型的广盐性海水鱼类，但未有研究显示遮目鱼生活史中任何生长发育阶段需要淡水条件^[10]。此试验中盐度的迅速降低使得部分遮目鱼幼鱼难以短期内适应外界环境的急剧变化，造成其死亡，死亡率为26.67%。但与其他海水鱼类相比，在淡水条件下遮目鱼幼鱼仍保持较高的成活率(73.33%)。LIN等^[11]将遮目鱼直接投入至淡水中，血浆中钠离子(Na⁺)、氯离子(Cl^-)浓度降低并维持在较低水平以避免血浆离子短期内的过度流失，同时鳃上Na⁺ /K⁺-ATP酶活性及与该酶相关的mRNA、蛋白表达量显著上升，而Na⁺ /K⁺-ATP酶具有吸收和分泌Na⁺、K⁺等离子的功能^[12]，故遮目鱼对体内渗透压的调节能力得到增强。因而遮目鱼对低盐度胁迫具有较强的适应力。

通过驯化方式鱼类能逐步适应外界环境的变化可以有效降低死亡率^[13]。通过不同模式对施氏鲟(Acipenser schrenckii)和小鲟鳇(Huso huso♀×Acipenser ruthenus♂)向海水驯化，结果表明，驯化对施氏鲟的成活率具有较大影响^[13]，而从淡水向海水驯化时，盐度为5的突变幅度可能对小鲟鳇比较适宜^[14]。对遮目鱼幼鱼进行渐变淡水驯化，使其具有足够的时间来调整维持渗透压稳定的策略，故成活率高。驯化试验结果表明，遮目鱼幼鱼在FW组的高死亡率是由于幼鱼应对盐度大幅度变化的应激性较弱，导致内环境失衡、组织器官功能丧失，而并非是由于在淡水环境中无法维持住内外渗透压平衡。与其他广盐性海水鱼类相比^[6-7]，遮目鱼可以在淡水中成活并生长，表现出对淡水环境的高适应性。

3.2   淡水驯化养殖条件下遮目鱼幼鱼的生长

多数研究认为盐度胁迫会限制鱼类的生长，因为鱼类需要花费大量的能量用于维持体内渗透压的平衡，限制了用于生长的能量，导致鱼类生长缓慢^[15-16]。但盐度对鱼类生长的影响十分复杂。近期的研究显示，鱼类用于调节渗透压的能量分配值较低，可能仅为整体能量支出的10%^[17]，并非之前所认为的20% ~50%；其次盐度对鱼类生长的影响会综合作用于鱼类生长发育相关的各个方面，除影响渗透压平衡外^[14]，盐度还会影响鱼类的摄食率、消化率^[16]、消化酶活力^[18]、免疫、肠道蠕动^[19]等；最后盐度还会和其他环境因子联合作用，如盐度和温度对鱼类生长的影响存在着复杂的交互作用^{[7, 20]}。

此试验中FW组和FWA组的增重率和特定生长率显著高于SW组(P＜0.05)，遮目鱼幼鱼在淡水条件下生长更为迅速，结果与FERRARIS^[19]、ALAVA^[21]的研究相似。但JANA等^[16]利用内陆咸淡水养殖遮目鱼，结果显示，在盐度25、30的养殖条件下其生长速度要高于淡水。通过驯化的方法，从初始盐度渐变到其他盐度条件，鱼类有足够时间调整生理功能，避免急性盐度胁迫下长期处于应激状态，进而减小盐度变化对正常生理代谢功能的影响，减少了能量消耗。在驯化条件下，施氏鲟和小鲟鳇成活率更高，并保持了一定的生长速度^[13-14]。此试验中经过淡水驯化的遮目鱼幼鱼其增重率和特定生长率都要高于淡水急性胁迫的幼鱼，故通过淡水驯化可以进一步增加其在淡水条件下的生长速度。

3.3   淡水驯化养殖条件下遮目鱼幼鱼鳃器官的变化

鳃作为鱼类的主要呼吸器官，同时还具有吸收和分泌离子的功能，与皮肤、肾脏等器官共同调节体内渗透压的平衡。急性盐度胁迫下，由于外界渗透压的急剧变化，遮目鱼幼鱼短时间内难以适应，鳃器官上皮细胞出现脱落，造成鳃器官功能的丧失^[22-23]，导致幼鱼死亡。而经淡水驯化后，幼鱼组织器官逐步适应渗透压变化，盐度变化对鳃器官影响减小^[24]，鳃上细胞脱落现象较少(图 2-b)，成活率较高。

广盐性海水鱼类鳃上具有鳃线粒体丰富细胞，该类细胞具有吸收和分泌Na⁺、K⁺等离子的功能^[25-26]。高渗环境下鳃线粒体丰富细胞向水体中分泌离子，保持体内外离子平衡。与自然海水条件下相比，此试验中淡水条件下遮目鱼幼鱼鳃小片上增生出大量的线粒体丰富细胞，该类细胞体积大，具有较高的Na⁺ /K⁺ -ATP酶活性^[27]。推测鳃小片上的线粒体丰富细胞能从水体中吸收离子，以维持幼鱼体内渗透压的平衡，是遮目鱼幼鱼可以适应淡水生活的原因之一。与此试验结果相似，适应淡水生活的大鳞鲃(Barbus capito)在高渗环境下鳃小片增生现象明显，具有离子吸收和分泌功能的细胞大量增生使得鳃小片增厚，而该类细胞的大量存在是保证其能适应淡水环境生活的重要原因之一^[28]。

与在自然海水养殖条件下相比，淡水条件下遮目鱼幼鱼具有更高的生长速度，鳃器官大量增生具有离子吸收和分泌功能的鳃线粒体丰富细胞是其能适应淡水的重要原因之一。而通过淡水驯化的方法可以减小对组织器官正常生理代谢功能的影响，有效地降低幼鱼在适应盐度变化过程中的死亡率并提高生长率。综上所述，遮目鱼作为重要的经济鱼类，在淡水中同样具有良好的生长特性，可以考虑作为淡水驯化养殖的推广种类。同时遮目鱼具有广盐适应特性，可以考虑作为未来研究盐度影响海水鱼类渗透调节机制、生长发育的模式鱼类。