方斑东风螺(Babylonia areolata)属腹足纲，腹足目，蛾螺科，东风螺属，其肉质鲜美、营养丰富，具有较高的经济价值。近年来，东风螺工厂化养殖在中国南方沿海迅速发展。然而，养殖过程中各种暴发性疾病时有发生，病害已成为制约东风螺养殖产业发展的最主要因素。目前，脱壳病是东风螺规模化养殖危害严重的主要疾病之一，但其致病菌和发病机理目前仍不清楚，有学者认为脱壳病的主要诱因是由于混入养殖池内的捕食性桡足类对稚、幼螺的攻击，导致稚、稚螺受伤部位发生溃疡性病变^[1-2]。因此，为预防和治疗方斑东风螺脱壳病和其他寄生虫疾病，在养殖生产中通常使用抗寄生虫药物以杀灭桡足类和其他寄生虫。生产上常由于对药物的毒性、使用浓度、安全浓度等不甚了解，导致盲目投药，效果甚差，有时甚至造成重大损失。目前关于水产药物对东风螺毒性和毒理相关研究较少，仅见黄英等^[3]研究了甲醛、高锰酸钾和孔雀石绿对波部东风螺(B.formosae habei)早期发育的影响；李雷彬和刘志刚^[4]研究了高锰酸钾、新洁尔灭、硫酸锌、制霉素和甲醛等药物对方斑东风螺面盘幼虫的急性毒性；岑小勇等^[5]进行了甲醛、硫酸铜、硫酸铜硫酸亚铁合剂、敌百虫和高锰酸钾等药物对方斑东风螺稚螺的毒性试验。许多水产常用药物对方斑东风螺稚螺的毒性效应研究还未见报道。文章通过开展敌百虫、氯氰菊酯和阿维菌素等常用抗寄生虫药物对方斑东风螺的急性毒性试验，以确定这些药物对方斑东风螺稚螺的毒性及其安全剂量，以期为方斑东风螺养殖过程中合理使用该药物提供科学依据。

1.   材料与方法

1.1   材料

1.1.1   试验材料

方斑东风螺取自国家贝类产业技术体系海南综合试验站万宁东风螺养殖示范基地，为同批次繁殖、同池饲养的稚螺，壳长(13.6±0.5)mm。

1.1.2   试验药物

试验用的3种抗寄生虫药分别是质量敌百虫(南宁泰达丰化工有限公司出品，有效浓度30%，生产批号20121020)、氯氰菊酯(广州精博生物技术有限公司出品，有效质量分数4.5%，生产批号11122406)和阿维菌素(山西康洁药业有限公司出品，有效质量分数为0.5%，生产批号20131103)。上述3种药物用纯净水将其配制成有效质量浓度为2 000 mg·L^-1的母液装于褐色磨口瓶中，避光保存，试验时再用砂滤海水按需稀释，现配现用。

1.1.3   试验条件

试验选用室内体积为10 L的聚乙烯桶为试验容器，试验用水为经沙滤后充分曝气的海水，试验过程中溶解氧维持在5 mg·L^-1以上，水温(27±1)℃，盐度32~33，pH为8.0±0.1。

1.2   方法

1.2.1   预试验

首先进行预备试验，在试验桶中加入2 L沙滤海水，每个试验桶中放入10粒东风螺，分别加入一定体积的试验药物母液。试验期间保持微充气，试验前48 h及试验时停止喂食，每24 h更换一次试验药液，每3 h观察和记录死亡情况，确定各药物处理48 h后方斑东风螺无死亡的药物质量浓度(最大耐受浓度，LC₀)和24 h 100%死亡的药物质量浓度(绝对致死浓度，LC₁₀₀)^[6]。

1.2.2   正式试验

根据预试验结果得出2个药物质量浓度，按等对数间距在这2个药物质量浓度范围内设置5个质量浓度梯度组，同时设1个空白药液对照组，每个试验组设3个平行组，每组放入20粒东风螺，分别加入相应体积的试验药物母液。试验期间保持微充气，试验前48 h及试验时停止喂食，每24 h更换一次试验药液，48 h内连续观察记录方斑东风螺的成活情况，及时清理死亡个体。以多次用解剖针触碰方斑东风螺的腹足无反应且肌肉僵硬作为死亡判断标准。

1.3   数据处理

通过记录各试验组的死亡情况，取3个平行试验组的平均值作为最后结果，计算出24 h和48 h的死亡率，死亡率(%)=100×死亡螺数/试验螺的总数；再以药物质量浓度的常用对数值为x轴，以死亡率的机率单位为y轴，绘制曲线，得出死亡率机率单位与药物质量浓度对数值的回归方程，用机率单位法求出各药物的24 h和48 h半致死质量浓度(LC₅₀)及各自的95%可信限，再根据下列公式求出安全质量浓度(SC)，SC=48h LC₅₀×0.3/(24 h LC₅₀/48 h LC₅₀)²，其中24 h LC₅₀为用药后24 h的LC₅₀，48 h LC₅₀为用药后48 h的LC₅₀ ^[6]。

2.   结果

根据预试验结果，药物处理48 h方斑东风螺LC₀和24 h LC₁₀₀ 2个质量浓度等差间距确定了敌百虫、氯氰菊酯和阿维菌素等3种抗寄生虫药物各自的5个试验质量浓度，从各药物试验浓度设置的范围来看，方斑东风螺稚螺对3种抗寄生虫药物的敏感性均存在很大差别。稚螺对阿维菌素最敏感，测试的药物质量浓度为1.97~13.55 mg·L^-1，其次为氯氰菊酯，药物质量浓度为7.88~54.23 mg·L^-1，对敌百虫最不敏感，药物质量浓度为30.00~375.00 mg·L^-1。

3种抗寄生虫药物对方斑东风螺稚螺急性毒性的检测结果见表 1。整个试验期间对照组中方斑东风螺稚螺均无死亡情况发生。试验组中的稚螺在一定时间内出现活动加剧、焦躁不安的现象，高浓度组出现此症状的时间早于低浓度组，过一段时间后，活动减弱，反应迟钝，腹足收缩，直至全身僵硬死亡。

表  1  3种抗寄生虫药对方斑东风螺稚螺的急性毒性试验结果

Table  1  Result of acute toxicity test of three antiparasitic drugs to juvenile snail of B.areolata

药物 drug	药物浓度 /mg·L-1 drug concentration	药物质量 浓度对数 logarithm of drug concentration	受试生物 数/粒 number of tested juvenile snails	死亡率/% mortality	机率单位 probability unit of mortality		死亡率/% mortality	机率单位 probability unit of mortality
				24 h			48 h
敌百虫  trichlorfon	对照组  control	-	20	0	-		0	-
	30.00	1.477	20	0	1.91		2.22	2.99
	56.40	1.751	20	0	1.91		28.89	4.44
	106.05	2.026	20	6.67	3.50		44.44	4.86
	199.41	2.300	20	37.78	4.69		77.78	5.76
	375.00	2.574	20	93.33	6.50		100	8.09
氯氰菊酯  cypermethrin	对照组  control	-	20	0	-		0	-
	7.88	0.897	20	0	1.91		6.67	3.50
	12.75	1.106	20	0	1.91		30	4.48
	20.68	1.316	20	20	4.16		53.33	5.08
	33.50	1.525	20	33.33	4.57		86.67	6.11
	54.23	1.734	20	95.56	6.70		100	8.09
阿维菌素  Avermectins	对照组  control	-	20	0	-		0	-
	1.97	0.294	20	0	1.91		4.44	3.30
	3.19	0.504	20	0	1.91		33.33	4.57
	5.16	0.713	20	20	4.16		71.11	5.56
	8.37	0.923	20	33.33	4.57		95.56	6.70
	13.55	1.132	20	95.56	6.70		100	8.09

下载: 导出CSV 

| 显示表格

3种抗寄生虫药物对方斑东风螺稚螺的LC₅₀和SC结果见表 2。从表中可以看出，3种抗寄生虫药物的24 h LC₅₀均高于48 h LC₅₀，说明随着处理时间的延长，试验药物对方斑东风螺稚螺的毒性效应逐渐增强，死亡率逐渐升高。从表 2还可以看出，3种抗寄生虫药物中阿维菌素对方斑东风螺稚螺的24 h LC₅₀和48 h LC₅₀均为最小，说明其毒性最大，其次为氯氰菊酯，敌百虫毒性最小；3种药物对方斑东风螺稚螺SC大小依次为敌百虫>氯氰菊酯>阿维菌素。

表  2  3种抗寄生虫药物对方斑东风螺稚螺的半致死质量浓度和安全质量浓度

Table  2  LC₅₀ and safe concentration of three antiparasitic drugs to juvenile snail of B.areolata

药物 drug	时间/h time	回归方程 regression equation	相关系数 R	半致死质量浓度/mg·L-1 LC50	LC50 95%置信区间/mg·L-1 95% confidence limit	安全质量浓度/mg·L-1 safe concentration
敌百虫  trichlorfon	24	y=-5.13+4.36x	0.97	210.54	151.34～292.89	5.54
	48	y=-3.28+4.20x	0.97	93.52	75.93~115.18
氯氰菊酯  cypermethrin	24	y=-3.84+5.84x	0.96	32.52	25.78~41.02	1.37
	48	y=-1.34+5.16x	0.98	16.90	14.16~20.16
阿维菌素  Avermectins	24	y=-0.32+5.85x	0.96	8.13	6.44~10.25	0.28
	48	y=1.65+5.59x	1.00	3.96	3.29~4.78

下载: 导出CSV 

| 显示表格

3.   讨论

敌百虫，又名马佐藤，其化学名称是0, 0-二甲基-2, 2, 2-三氯-1-羟基乙基磷酸酯，化学式为C₄H₈O₄Cl₃P，是一种广谱的有机磷酯类杀虫剂，具有很强的胃杀作用，兼有触杀作用。在中性和弱酸性溶液中比较稳定，在碱性溶液中能水解生成敌敌畏，使毒性大增。其作用机理是溶于水后产生胆碱脂酶抑制剂，抑制胆碱酯酶的活性，从而使昆虫、甲壳类、蠕虫等动物的神经中毒而死亡，在水产业中广泛用于毒杀水产动物体外的寄生虫病及浮游动物如枝角类和桡足类等，其常用剂量为0.2~0.5 mg·L^-1[7]。在鲍(Haliotis sp.)和东风螺的养殖过程中，常用敌百虫来灭杀桡足类。不同贝类对敌百虫的耐受能力差别较大，如敌百虫对西施舌(Coelomactra antiquata)稚贝的24 h LC₅₀为26.75 mg·L^-1，SC为0.27 mg·L^-1[8]；对九孔鲍(H.diversicolor supertexta)稚鲍的24 h LC₅₀为12.9 mg·L^-1，SC为1.11 mg·L^-1(水温26~27 ℃)^[9]；对泥螺(Bullacta exarta)苗种的24 h LC₅₀为26.75 mg·L^-1，SC为7.79 mg·L^-1[10]。该试验得出敌百虫对方斑东风螺的24 h LC₅₀为210.54 mg·L^-1，SC为5.54 mg·L^-1，24 h LC₅₀远大于上述贝类，而SC仍和上述贝类同个数量级，造成这一现象的原因是该试验中24 h LC₅₀和48 h LC₅₀数值相差较大，说明敌百虫对方斑东风螺的毒性作用较上述其他贝类要缓慢。该试验结果与岑小勇等^[5]对东风螺的试验结果(24 h LC₅₀为478.19 mg·L^-1，SC为89.23 mg·L^-1)差别很大，造成这一结果的原因除了个体差异外，可能还与试验条件有关：1)该试验水温26~28 ℃高于岑小勇等^[5]的22~25 ℃，已有试验证实，敌百虫对水生动物的毒性随着水温升高而加剧，如敌百虫对九孔鲍稚鲍的SC水温21~22 ℃时为4.6 mg·L^-1，水温26~27 ℃时降为1.11 mg·L^-1，敌百虫对真猛水蚤(Euterpe sp.)的毒性也是随着水温升高而增强^[9]；2)敌百虫在碱性溶液中可变成毒性较大的敌敌畏，所以pH对其毒性影响较大，该试验pH为7.9~8.1，而岑小勇等^[5]试验pH为7.5~8.5，波动范围较大。因此，使用药物时一定要考虑水温、pH等因子对其毒性的影响，做到安全用药。对于东风螺养殖生产上使用敌百虫杀灭桡足类，可借鉴陈昌生等^[9]推荐的质量浓度控制在2~3 mg·L^-1，作用时间6 h，该质量浓度对方斑东风螺稚螺安全。

氯氰菊酯，化学名称为氰基-(3-苯氧基苯基)甲基-3-(2, 2-二氯乙烯基)-2, 2-二甲基环丙烷羧酸酯，化学式C₂₂H₁₉Cl₂NO₃，是人工合成的拟除虫菊酯类杀虫剂，作用机理是通过对钠泵的干扰使神经膜动作电位的去极化^[11]。这类杀虫剂绝大多数具有高亲脂性，在水中能直接通过水生动物的鳃进入到血液和组织中，对机体器官的结构和功能造成影响^[12]，目前已证实，无论在细胞离体还是活体条件下菊酯类农药都能对水生动物的Na⁺ -K⁺ -ATP酶产生抑制作用^[13-14]。氯氰菊酯对贝类毒性鲜有报道，对于其他水产动物毒性研究多见于对鱼、虾的报道，如据报道其对蓝点笛鲷(Lutjanus rivulatus)幼鱼的SC仅为0.002 8 mg·L^-1[15]，对白斑狗鱼(Esox lucius)幼鱼的SC为0.008 mg·L^-1[16]；对龙虾(Homarus americanus)和虾(Crangon septemspinosa)的96 h LC₅₀仅为0.04 μg·L^-1和0.01 μg·L^-1[17]。该试验表明，氯氰菊酯对方斑东风螺稚螺24 h LC₅₀为32.52 mg·L^-1，SC为1.37 mg·L^-1，方斑东风螺对氯氰菊酯毒性耐受能力远高于上述鱼虾。氯氰菊酯对淡水大型溞(Daphnia magna)的24 h LC₅₀为4.81 mg·L^-1[18]，而对海水桡足类中华哲水蚤(Calanidae sinicus)毒性却很强，只需0.2 mg·L^-1质量就可使其24 h内全部死亡^[19]，远低于其对方斑东风螺的SC，所以在养殖过程中使用氯氰菊酯用于杀灭类似桡足类应该是可行。

阿维菌素属一种大环丙酯双糖类化合物，其作用机制是通过在无脊椎动物的抑制性突触提升神经元对氯离子的通透性，干扰其正常的神经生理活动，从而导致麻痹和死亡^[20-21]。它能有效控制许多宿主物种体内和体外的寄生虫，已广泛应用于鱼类等水产动物体内外寄生虫病的防治^[22]，在贝类围塘养殖中使用阿维菌素类药物，用于驱杀栖息于围塘底泥中的线虫类动物，药性作用也明显^[23]。该试验得出阿维菌素对方斑东风螺稚螺的24 h LC₅₀为8.13 mg·L^-1，SC为0.28 mg·L^-1，高于阿维菌素对淡水尖膀胱螺(Physa acuta)的24 h LC₅₀(0.110 mg·L^-1)^[24]；也高于一些鱼类如异育银鲫(Carassius auratus gibelio)24 h LC₅₀为0.21 mg·L^-1，SC为0.019 mg·L^-1[25]，日本黄姑鱼(Nibea japonica)幼鱼24 h LC₅₀为0.3 mg·L^-1，SC为0.02 mg·L^-1[26]；也高于阿维菌素在生产中的常用质量浓度0.02 mg·L^-1[25]。阿维菌素对桡足类长伪哲水蚤(Pseudocalanus elongates)无节幼虫的半数有效质量浓度(EC₅₀)为0.12 μg·L^-1，对拟长腹剑水蚤(Oithona similis)成体的EC₅₀为232 μg·L^-1[27]。因此，在方斑东风螺养殖中使用阿维菌素杀灭桡足类和防治寄生虫病也是可行。

许多国家对杀虫剂在水产上使用都有管制，阿维菌素是唯一被普遍认可在水产上使用的杀虫剂，其次为氯氰菊酯，敌百虫只有少数国家允许使用^[22]。这些药物在方斑东风螺稚螺的安全质量浓度范围内，均可杀灭桡足类或其他寄生虫，但药物会在生物体内富集，经过食物链传递而影响到人类安全，即使是世界上普遍认可在水产上使用的高效低毒的杀虫剂阿维菌素，以4 ng·mL^-1的质量浓度药浴鲈(Lateolabrax japonicus)72 h后换水，肌肉中的阿维菌素含量在停止药浴22 d后才低于检测限^[28]；另外，这些杀虫剂在使用后通常进入水域环境，可能对其他水生生物和环境造成影响，关于水产药物对环境毒性方面的问题已经引起人们重视^{[22, 29]}。因此，考虑药物残留和对水环境的污染，生产中尽量采用生态防治办法，避免使用药物，如单纯杀灭桡足类，可利用对虾可捕食桡足类的特性，采用混养对虾的方法去除桡足类，而不必依赖药物进行防病与治疗。