基于最大熵模型的长江口三类生态型仔稚鱼生境分布特征

吴子健, 李增光, 万荣, 王嘉洛, 葛春银, 王大元, 赵欣

吴子健, 李增光, 万荣, 王嘉洛, 葛春银, 王大元, 赵欣. 基于最大熵模型的长江口三类生态型仔稚鱼生境分布特征[J]. 南方水产科学. DOI: 10.12131/20250025
引用本文: 吴子健, 李增光, 万荣, 王嘉洛, 葛春银, 王大元, 赵欣. 基于最大熵模型的长江口三类生态型仔稚鱼生境分布特征[J]. 南方水产科学. DOI: 10.12131/20250025
WU Zijian, LI Zengguang, WAN Rong, WANG Jialuo, GE Chunyin, WANG Dayuan, ZHAO Xin. Habitat distribution characteristics of three ecological types of larvalfish in Yangtze River Estuary based on Maximum Entropy Model[J]. South China Fisheries Science. DOI: 10.12131/20250025
Citation: WU Zijian, LI Zengguang, WAN Rong, WANG Jialuo, GE Chunyin, WANG Dayuan, ZHAO Xin. Habitat distribution characteristics of three ecological types of larvalfish in Yangtze River Estuary based on Maximum Entropy Model[J]. South China Fisheries Science. DOI: 10.12131/20250025

基于最大熵模型的长江口三类生态型仔稚鱼生境分布特征

基金项目: 

国家重点研发计划项目 (2023YFD2401305);国华东台海上风电工程海域生态监测及防生物污损技术研发服务项目

详细信息
    作者简介:

    吴子健 (1999—),男,硕士研究生,研究方向为渔业资源评估。E-mail: 971663569@qq.com

    通讯作者:

    李增光 (1986—),男,讲师,博士,研究方向为渔业生态与资源评估。E-mail: zgli@shou.edu.cn

  • 中图分类号: S 931

Habitat distribution characteristics of three ecological types of larvalfish in Yangtze River Estuary based on Maximum Entropy Model

  • 摘要:

    为解析长江口洄游性、海洋性与河口性三类仔稚鱼生境分布的环境驱动因子,根据2022年9月 (夏季)、2023年4月 (春季) 长江口仔稚鱼采样数据,采用最大熵 (Maximum entropy, MaxEnt)模型分析凤鲚 (Coilia mystus,洄游性)、鳀 (Engraulis japonicus,海洋性) 和香䲗 (Callionymus olidus,河口性) 的生境分布特征及其环境驱动机制。结果表明,长江口南支的海表面温度、pH、营养盐高于北支,而北支的海表面盐度、叶绿素高于南支;MaxEnt模型对这3种仔稚鱼生境分布具有较强的预测能力 [曲线下面积 (Area under the curve, AUC)>0.8],且春季略优于夏季;影响凤鲚和香䲗春、夏季生境分布的关键因子均为海表面溶解氧 (相对贡献率分别为80.8%、86.6%和39.8%、30.2%),而鳀为海表面盐度 (分别为44.0%和79.0%)。不同生态类型仔稚鱼的生境特征及其关键环境因子存在显著性差异,导致其早期生活史阶段的补充过程对环境变化的响应呈现种间特异性。因此,长江口仔稚鱼资源的保护需针对不同生态类型鱼类的生物学特性及栖息地需求,制定差异化的保护策略。

    Abstract:

    To investigate the environmental driving factors of habitat distribution for migratory, marine, and estuarine larval fishes in the Yangtze River estuary, based on the larval fish sampling data collected in the Yangtze River Estuary during September 2022 (Summer) and April 2023 (Spring), we applied the Maximum Entropy (MaxEnt) Model to analyze the habitat distribution characteristics and environmental driving mechanisms of Coilia mystus (Migratory species), Engraulis japonicus (Marine species) and Callionymus olidus (Estuarine species). The results reveal that the south branch exhibited higher sea surface temperature (SST), pH (SpH) and nutrient levels (SNITRO), while the north branch showed higher sea surface salinity (SSS) and chlorophyll concentration (SCHL). The MaxEnt model demonstrated strong predictive capability for habitat distribution of these three larval fishes [AUC (Area under the curve) >0.8], with slightly better performance in spring than summer. Sea surface dissolved oxygen was the key factor influencing habitat distribution for both C. mystus (Relative contributions: 80.8% in spring and 86.6% in summer) and C. olidus (44.0% and 79.0%), whereas sea surface salinity dominated for E. japonicus (44.0% and 79.0%). There were significant differences in the habitat characteristics and key environmental factors of larval fish of different ecological types, leading to species-specific responses in their early life history replenishment processes to environmental changes. Therefore, the protection of juvenile fish resources in the Yangtze River Estuary requires development of differentiated protection strategies based on the biological characteristics and habitat needs of different ecological types of fish.

  • 三角帆蚌 (Hyriopsis cumingii) 是中国南方一种重要的经济淡水蚌类。根据《2024中国渔业统计年鉴》,2023年中国淡水珍珠养殖产量为754 920 kg[1],而三角帆蚌珍珠产量在人工养殖淡水育珠蚌中占据重要地位。此外,三角帆蚌可通过高强度的滤食增加水体透明度,直接或间接地改变浮游植物和沉水植物的群落结构。因此,养殖三角帆蚌具有重要的经济价值和生态意义[2-4]。然而,近年来细菌和病毒感染导致贝类大规模死亡的现象时有发生,给珍珠养殖产业造成重大损失[5]。此外,养殖环境的恶化导致水生动物的发病率不断上升,污染物通过诱导免疫抑制,严重破坏了宿主先天免疫对病原体的防御[6]。因此,在集约化养殖条件下如何有效地防治贝类病害已成为产业发展面临的新一轮挑战。了解贝类先天性免疫机制和抗菌作用将有助于制定贝类病害治理方法,有利于推动贝类健康养殖和珍珠产业的可持续发展。

    先天免疫系统是脊椎动物和无脊椎动物抵抗微生物入侵的第一道防线[7]。其中,Toll样受体 (Toll-like receptors, TLR) 作为先天免疫中的关键组分,在识别和应对多种病原体中发挥着至关重要的作用[8]。TLR1通过直接招募并结合髓样分化因子88 (Myeloid differentiation factor 88, MyD88) 蛋白,引发自身活化并募集下游信号转导相关蛋白白细胞介素-1受体相关激酶 (Interleukin-1 receptor-associated kinases, IRAKs),活化的IRAKs驱动自体磷酸化并募集肿瘤坏死因子受体相关因子6 (Tumour-necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6)[9-11],TRAF6进而激活转化生长因子-β激活激酶1 (Transforming growth factor-β-activated kinase 1, TAK1),TAK1进一步刺激IkB激酶 (Inhibitor of kappa B kinase, IKK) 介导的核因子κB (Nuclear factor kappa-B, NF-κB) 和丝裂原活化蛋白激酶 (Mitogen-activated protein kinase, MAPK) 介导的激活蛋白1 (Activating protein-1, AP-1) 的转录反应,从而诱导炎性细胞因子的活化和表达[12-13]。目前已在三角帆蚌中鉴定了11个TLRs。在病原菌刺激下,三角帆蚌肝胰腺中Toll1基因的表达量升高,且过表达可以激活S2细胞中的Toll信号通路,从而上调抗真菌肽 (Drosomycin, DRS) 的表达[14]。然而并无研究证明在受到病原菌刺激时,TLR1是否直接激活MyD88信号通路,并调节下游相关免疫基因发挥抗菌应答作用。HcToll2参与诱导抗真菌肽表达以进行抗菌免疫[15];HcToll3介导调节乳清酸蛋白 (Whey acidic protein, WAP) 和溶菌酶 (Lysozyme, Lys) 的表达,参与了三角帆蚌对弧菌的防御[16];HcToll4和HcToll5则能够识别金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus)、副溶血弧菌 (Vibrio parahemolyticus)、白斑综合征病毒 (White Spot Syndrome Virus) 和聚肌胞苷酸 (Polyinosinic acid-polycytidylic acid, poly I:C),并参与调节三角帆蚌抗菌肽 (Theromacin, Ther) 和乳清酸蛋白的表达[17];此外,HcToll6和HcToll7介导鳃中溶菌酶和防御素 (Defensins, Def) 的表达,参与了副溶血弧菌刺激后机体的抗菌应答过程[18];HcTLRn[19]、HcToll9和HcToll10可通过NF-κB信号通路参与三角帆蚌的抗菌免疫应答[20]。由此可见,在三角帆蚌体内存在多种不同功能的TLRs,它们在对抗不同病原微生物感染中发挥着重要作用。

    为探讨三角帆蚌HcTLR1基因在先天性免疫中的作用机制,本研究从感染维氏气单胞菌 (Aeromonas veronii)的三角帆蚌肝胰腺转录组数据库[21]中筛选并克隆了三角帆蚌HcTLR1基因的全长cDNA。采用实时荧光定量分析技术和dsRNA干扰技术研究了HcTLR1基因在不同组织中的表达情况,以及HcTLR1-MyD88信号通路对不同免疫刺激物和维氏气单胞菌的免疫响应情况。为进一步了解TLRs在软体动物先天免疫防御和抗菌应答中的作用奠定了基础。

    选用2龄三角帆蚌250只,体质量约为 (75±10) g。实验前,将蚌置于含过滤淡水和空气泵的15 L水循环系统中养殖1周左右,养殖水温 (23.0±1.0) ℃。每天喂食1次小球藻液 (5.6×105 个·mL−1)。暂养期间剔除不健康个体,选取健康个体用于后续实验。

    从构建的三角帆蚌肝胰腺转录组文库中,筛选出TLR1基因片段 (数据未发表)[22]。使用SMARTer® RACE 5'/3' Kit试剂盒 (TaKaRa,日本),结合特异性和通用引物 (表1),以肝胰腺为模板,进行cDNA末端快速克隆 (RACE),扩增两端序列。PCR反应体系为:12 μL LA taq (TaKaRa,日本),1 μL 特异性引物 (Gene specific primer, GSP, 10 μmol·L−1),1 μL 通用引物 (Universal primer, UPM, 10 μmol·L−1),3 μL cDNA,8 μL ddH2O。PCR扩增程序为:98 ℃ 10 s,68 ℃ 30 s,72 ℃ 3 min,30个循环。将回收的PCR扩增产物连接到pMD19T质粒 (TaKaRa,日本) 载体中,并转化至大肠杆菌感受态DH5α细胞 (擎科生物,中国) 中进行菌液PCR和测序。最后,通过拼接HcTLR1的两端序列,获得基因全长序列。

    表  1  引物序列
    Table  1  Sequences of primers
    引物名称
    Primer name
    引物序列 (5'—3')
    Primers sequence (5'−3')
    用途
    Application
    来源
    Source
       HcTLR1-3'race-F TGCCATGCTGTACAGACTTGCTACCGAA 基因克隆 本研究
       HcTLR1-5'race-R CGTGCACTTCTCGGGACATCTGTGT 本研究
       UPM Long CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 本研究
       UPM Short CTAATACGACTCACTATAGGGC 本研究
       TLR1-iF+T7 TAATACGACTCACTATAGGGTAAAGTTCGGATGGCGAATC RNA干扰 本研究
       TLR1-iR TTTTCCCAAAACCAAGCATC 本研究
       GFP-iF+T7 TAATACGACTCACTATAGGGAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCG 本研究
       GFP-iR CAGCAGGACCATGTGATCGCGC 本研究
       HcTLR1-qPCR-F TGCCATGCTGTACAGACTTGCT qPCR 本研究
       HcTLR1-qPCR-R    CGTGCACTTCTCGGGACATCTGT 本研究
       MyD88-qPCR-F GAACGCCACCCTTGGGAAAC 本研究
       MyD88-qPCR-R TCCACGACAGCACCCTCAAG 本研究
       TRAF6-qPCR-F CGCAGTGTGGTCATCGCTTC 本研究
       TRAF6-qPCR-R TGGCACACGAGTTAGGGCAT 本研究
       IRAK4-qPCR-F TCGCAAGTGGTACAGGCCAT 本研究
       IRAK4-qPCR-R TGACGTGCCAATTACGAGCG 本研究
       WAP-qPCR-F TGTAATGTTGACGGGAGTG [22]
       WAP-qPCR-R CTGTTTTGTTTTGATGGCT
       LBP/BPI1-qPCR-F TGGAGAACAGAGTCAGAAAGA [23]
       LBP/BPI1-qPCR-R CGATAGTCAAGCAGGAAATG
       LBP/BPI2-qPCR-F TATCAGTGTCAGCGGTAGTG [23]
       LBP/BPI2-qPCR-R CATCAGCGTAAAGAGGGA
       p65-qPCR-F TGGCAAGGACTGTAAGAAAGG [23]
       p65-qPCR-R CTTGTGCTTAAATCCAGTCTGA
       P105-qPCR-F TGTTGTATCCACTCCCATCT [23]
       P105-qPCR-R TCTTGCTCAACGAACTTCAC
       Lys-qPCR-F CACAGTTGGTGGTTCAGTAA 本研究
       Lys-qPCR-R CGAATCCTTCAGTAGATGGT 本研究
       IL17-qPCR-F CCATCCACGATCCTCAACG 本研究
       IL17-qPCR-R CGCAAGTGTATCCAACAGCAA 本研究
       Def-qPCR-F GGTGTCGTCTATCTTGCTTC [19]
       Def-qPCR-R AGGTTATTTGGTCATCTATTTTG
       Ther-qPCR-F CACAGTTGGTGGTTCAGTAA [18]
       Ther-qPCR-R CGAATCCTTCAGTAGATGGT
       EF1α-qPCR-F GGAACTTCCCAGGCAGACTGTGC [3]
       EF1α-qPCR-R TCAAAACGGGCCGCAGAGAAT
    注:下划线部分引物序列为T7启动子序列。 Note: The underlined primer sequence is T7 promoter sequence.
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    使用NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) 中ORF Finder对基因序列开放阅读框 (Open reading frame, ORF) 与编码氨基酸序列进行预测;用Smart Blast对氨基酸序列进行同源性分析;通过Simple Modular Architecture Research Tool SMART (http://smart.embl-heidelberg.de/) 预测氨基酸所包含的结构域;利用Protparam (http://www.expasy.org/tools/protparam.html) 线上工具获取氨基酸序列组成、分子质量大小、等电点等物理参数信息;利用MEGA 11的邻接法 (Neighbor-Joining, NJ) 构建系统进化树,Bootstrap分析其可靠性,重复1 000次。

    分别取三角帆蚌的肝胰腺、斧足、闭壳肌、外套膜、鳃、性腺、血细胞、肾脏和肠组织,并采用心脏取血的方式收集血淋巴,1 000×g离心5 min,收集血细胞。共9只蚌,每3只的组织混合作为1个样品,根据RNAiso plus提取试剂盒 (TaKaRa,日本) 说明书提取组织RNA。参照Hifair III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Yeasen,中国) 说明书合成cDNA。以EF-1α基因为内参,以不同组织的cDNA为模板,结合特定的荧光定量引物 (表1),通过BIORAD CFX ConnectTM荧光定量仪 (Bio-Rad Laboratories,美国),检测了2龄三角帆蚌不同组织中HcTLR1基因的相对表达量。反应体系为:10 μL SYBR Green Mix (Yeasen,中国)、0.4 μL q-F (10 μmol·L−1)、0.4 μL q-R (10 μmol·L−1)、2 μL cDNA和7.2 μL ddH2O。反应程序为:95 ℃ 2 min;95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 10 s,39个循环。使用2−ΔΔCt法计算基因的相对表达量,每组3个重复,计算平均值。

    脂多糖 (Lipopolysaccharides, LPS)、肽聚糖 (Peptidoglycan, PGN) 和poly I:C 3种刺激物代表不同的病原体相关分子模式 (Pathogen-associated molecular pattern, PAMP),均购自麦克林公司;维氏气单胞菌GL1由本实验室前期从患病三角帆蚌中分离[23]。将健康三角帆蚌随机分为5组,其中4组向闭壳肌中分别注射200 μL维氏气单胞菌GL1 (107 CFU·mL−1)、LPS、PGN和poly I:C (0.5 mg·mL−1,溶于pH 7.4的PBS),另一组注射相同体积的磷酸盐缓冲溶液 (PBS, pH 7.4) 作为阴性对照。未经处理的三角帆蚌作为空白对照组。在注射后的第6、第12、第24、第48小时,分别收集9只三角帆蚌的血细胞、肝胰腺和鳃组织。每3只蚌的组织混合作为1个样品,用于RNA提取。

    使用Primer 5.0软件设计1对含有T7启动子的基因特异性引物:TLR1-iF+T7、TLR1-iR (表1)。以血细胞cDNA为模板,采用rTaq DNA聚合酶 (TaKaRa,日本) 进行特异性DNA片段的扩增。同时,绿色荧光蛋白 (Green fluorescent protein, GFP) 片段用于阴性对照dsRNA的合成。根据T7 High Yield RNA Transcription Kit (Beyotime Biotechnology,中国) 试剂盒操作,合成并纯化相应的dsRNA。

    挑选健康的三角帆蚌个体暂养后收集血细胞。血细胞培养于含10% (φ) FBS (Gibico,美国)、2% (φ) 青链霉素 (Beyotime Biotechnology,中国) 的DMEM培养基 (Gibico,美国) 中,培养条件为27 ℃、5% (φ) CO2,并定期观察细胞状态。按照每毫升106个细胞的密度,向细胞中同时加入40 μg的dsRNA及灭活后的维氏气单胞菌GL1。每个时间点的不同处理组各设置3个重复。将上述处理的细胞置于27 ℃、5% (φ) CO2培养箱中静置培养。在培养后的第6、第12和第24小时,分别收集不同处理组的血细胞,以便进行后续的RNA提取和qPCR分析。

    所有数据均以“平均值±标准差 ($ \overline x \pm s $)”表示。采用SPSS 26.0软件进行单因素方差 (One-Way ANOVA) 分析及Tukey氏多重检验,显著性水平α为0.05 (n=3)。

    通过测序、拼接获得HcTLR1基因全长序列 (GenBank登录号:PP051478) 3 969 bp,包含45 bp的5'非翻译区 (Untranslated region, UTR)、237 bp的3'UTR和3 687 bp的ORF,共编码1 228个氨基酸 (图1),预测分子质量为139 kD,理论等电点为5.54。SMART结构域分析预测HcTLR1蛋白包含14个LRR结构域、3个LRR亚家族结构域、2个C端LRR结构域、1个LRR-NT结构域、1个跨膜结构域和1个胞内TIR结构域 (图2)。

    图  1  HcTLR1核苷酸序列和预测的氨基酸序列
    注:红色碱基代表起始密码子 (ATG) 和终止密码子 (TAA);富含亮氨酸的重复序列 (LRR) 结构域用下划线标出;富含亮氨酸的重复序列典型的亚家族 (LRR TYP) 用双下划线标出;富含亮氨酸重复C-末端结构域 (LRR CT) 用波浪线标出;富含亮氨酸重复N-末端结构域 (LRR NT) 用虚线标出;跨膜结构域 (TM) 用灰色标出;白细胞介素-1受体 (TIR) 结构域用蓝色标出。
    Fig. 1  Nucleotide sequences and predicted amino acid sequences of HcTLR1
    Note: Red bases represent the initiation codon (ATG) and stop codon (TAA); the Leucine-rich repeats (LRR) domains were underlined; the Leucine-rich repeats typical subfamily (LRR TYP) was double underlined; the Leucine rich repeat C-terminal domain (LRR CT) was marked with wavy lines; the Leucine rich repeat N-terminal domain (LRR NT) was marked with dotted line; the transmembrane domain (TM) was marked with gray and the Toll/interleukin-1 receptor (TIR) domain was marked with blue.
    图  2  HcTLR1结构域预测
    Fig. 2  Prediction of HcTLR1 domain

    将三角帆蚌HcTLR1蛋白的功能结构域序列与其他物种功能结构域序列进行多重序列比对,发现不同物种 (包括脊椎动物和无脊椎动物) 的TIR结构域序列具有较高的同源性 (图3)。基于三角帆蚌氨基酸全长序列的系统进化树分析显示,HcTLR1与三角帆蚌Toll 1及栉孔扇贝 (Azumapecten farreri) Toll、长牡蛎 (Crassostrea gigas) TLR1聚为一支,其中与三角帆蚌Toll 1的亲缘关系最近 (图4)。

    图  3  三角帆蚌与其他物种TIR结构域的氨基酸多序列比对
    注:黑色阴影表示氨基酸相同,其他阴影表示氨基酸部分相同;用于多重序列比对的其他物种的氨基酸序列分别是智人 (CAG38593.1),小鼠 (AAG35062.1),大鼠 (XP_038947854.1),原鸡 (BAD67422.1),斑马鱼 (NP_001124065.1),三角帆蚌 (Toll 2: AIA66467.1, Toll 4: AVR52705.1, Toll 5: AVR52704.1, Toll 6: QCR63936.1, Toll 7: QCR63937.1),紫贻贝 (AFU48614.1),虾夷扇贝 (XP_021346851.1),海湾扇贝 (AVP74315.1),巨海扇蛤 (XP_033755286.1)。
    Fig. 3  Multiple sequence alignment of TIR domain between H. cumingii and other species
    Note: Black shading represents amino acid identity, and other shading represents partial amino acid identity. The amino acid sequences used for multiple alignment include Homo sapians (CAG38593.1), Mus musculus (AAG35062.1), Rattus norvegicus (XP_038947854.1), Gallus gallus (BAD67422.1), Danio rerio (NP_001124065.1), Hyriopsis cumingii (Toll 2: AIA66467.1, Toll 4: AVR52705.1, Toll 5: AVR52704.1, Toll 6: QCR63936.1, Toll 7: QCR63937.1), Mytilus galloprovincialis (AFU48614.1), Mizuhopecten yessoensis (XP_021346851.1), Argopecten irradians (AVP74315.1) and Pecten maximus (XP_033755286.1).
    图  4  三角帆蚌HcTLR1与其他物种氨基酸全长序列构建的系统发育树
    Fig. 4  Phylogenetic tree of HcTLR1 full-length sequence of amino acid between H. cumingii and other species

    实时荧光定量PCR结果显示,HcTLR1基因在所有检测的组织中均有表达,且表达程度各异 (图5)。其中,血细胞中HcTLR1的表达量最高,并显著高于其他组织 (p<0.05)。其在血细胞中的表达量分别为肝胰腺的13.67倍、斧足的23.27倍、闭壳肌的19.06倍、外套膜的7.1倍、鳃的11.45倍、性腺的18.63倍、肾脏的2.5倍和肠的2.07倍。

    图  5  HcTLR1 mRNA在三角帆蚌组织中的相对表达量
    注:1. 肝胰腺;2. 斧足;3. 闭壳肌;4. 外套膜;5. 鳃;6. 性腺;7. 血细胞;8. 肾脏;9. 肠;所标字母不同表示差异显著 (p<0.05)。
    Fig. 5  Relative mRNA expression of HcTLR1 in different tissues from H. cumingii
    Note: 1. Hepatopancreas; 2. Foot; 3. Adductor; 4. Mantle; 5. Gill; 6. Gonad; 7. Hemocyte; 8. Kidney; 9. Intestine. Different letters represent significant differences (p<0.05).

    在2 龄三角帆蚌受到维氏气单胞菌和不同PAMPs刺激后,采用qPCR技术检测了不同时间点三角帆蚌各组织中HcTLR1基因的相对表达量。结果显示,在鳃组织中,经维氏气单胞菌GL1和poly I:C刺激后,HcTLR1基因表达量呈先上升后下降的趋势。刺激后第12 和第24小时,其表达量显著增加 (p<0.05),分别为PBS组的5.2和4.5倍。而LPS、PNG刺激后,其表达量呈下降趋势,但在刺激后第6小时,与PBS组相比,其表达量显著增加 (p<0.05),分别为4.2和5.4倍 (图6-a)。在肝胰腺中,经维氏气单胞菌GL1、LPS、PNG、poly I:C刺激后,HcTLR1基因的表达量也呈先上升后下降的趋势,且在刺激后第24小时表达量显著上调 (p<0.05),分别为PBS组的14、5.8、8和4.9倍 (图6-b)。在血细胞中,维氏气单胞菌GL1刺激后第6、第12和第24小时,HcTLR1基因的表达量显著上调 (p<0.05),分别为PBS组的2.1、2和2.4倍 (图6-c)。然而,在LPS、PNG、poly I:C刺激后,其表达量先下降后上升,但无显著性差异 (p>0.05)。由此可见,当三角帆蚌经过维氏气单胞菌GL1、LPS、PNG和poly I:C刺激后,HcTLR1基因在不同组织和时间点的表达水平存在显著差异。

    图  6  免疫刺激后三角帆蚌鳃 (a)、肝胰腺 (b) 和血细胞 (c) 中HcTLR1 mRNA在不同时间点的相对表达量
    注:同一处理时间下不同字母表示差异显著 (p<0.05),相同字母表示差异不显著 (p>0.05)。
    Fig. 6  Relative mRNA expression of HcTLR1 after immune challenges in gill (a), hepatopancreas (b) and hemocyte (c) of H. cumingii at different time point
    Note: Different letters at the same treatment time represent significant differences (p<0.05), while the same letters represent insignificant differences (p>0.05).

    为了探究三角帆蚌HcTLR1基因对TLR信号通路的激活作用,采用dsRNA干扰方法来抑制血细胞中HcTLR1基因的表达。通过qPCR检测HcTLR1及其介导的MyD88依赖性信号通路中多个关键基因的表达变化,包括MyD88IRAK4TRAF6、核因子-κB/Rel转录因子p65 (NF-κB/RELA p65, p65)、核因子-κB/Rel 蛋白1 p105 (NF-κB/RELA 1 p105, p105) 和下游免疫相关基因TherLysDefWap、脂多糖结合蛋白/杀菌通透性增加蛋白 (LPS binding protein/bactericidal permeability increasing protein, LBP/BPI) 1、2和白细胞介素17 (Interleukin-17, IL-17)。结果显示,与未处理组和阴性对照dsGFP组相比,dsTLR1组在干扰后的第6、第12和第24小时,HcTLR1 基因的表达量显著下降,干扰效果显著 (p<0.05,图7-a)。在此基础上,进一步在干扰后使用维氏气单胞菌GL1刺激血细胞发现,dsTLR1组的HcTLR1基因表达量在第6、第12和第24小时均显著降低 (p<0.05,图7-b)。此外,与未处理组相比,维氏气单胞菌GL1刺激血细胞12 h后检测发现,dsTLR1组中MyD88依赖性通路相关基因MyD88IRAK4TRAF6p65p105的表达量分别下降87.8%、97.7%、94.6%、93%和96.3% (p<0.05,图8-a—e)。同时,通路下游抗菌免疫相关基因TherDefLysWAPLBP/BPI 2IL-17的表达量分别下降97.4%、98.3%、99.7%、91.7%、91.2%和94.4% (p<0.05,图8-f—i,8-k—l)。然而,LBP/BPI 1基因的表达量与对照组相比无显著性差异 (p>0.05,图8-j)。上述结果表明,HcTLR1基因参与三角帆蚌TLR1-MyD88-NF-κB信号通路的激活,并通过激活下游免疫相关基因发挥抗菌应答作用。

    图  7  HcTLR1干扰及免疫刺激后血细胞中HcTLR1 mRNA的相对表达量
    注:a. dsRNA干扰后血细胞中HcTLR1 mRNA的表达水平;b. dsRNA干扰后并经维氏气单胞菌GL1刺激血细胞中HcTLR1 mRNA的表达水平。同一处理时间下不同字母表示差异显著 (p<0.05),相同字母表示差异不显著 (p>0.05)。
    Fig. 7  mRNA expression levels in hemocytes of H. cumingii after HcTLR1 interference and immune challenges
    Note: a. HcTLR1 mRNA expression levels in hemocytes after dsRNA interference; b. HcTLR1 mRNA expression levels in hemocytes after dsRNA interference in A. veronii GL1 stimulation. Different letters at the same treatment time represent significant differences (p<0.05), while the same letters represent insignificant differences (p>0.05).
    图  8  HcTLR1 基因干扰及免疫刺激后血细胞中TLR1-MyD88-NF-κB信号通路及下游抗菌相关基因的相对表达量
    注:不同字母表示差异显著 (p<0.05),相同字母表示差异不显著 (p>0.05)。
    Fig. 8  Relative expression of TLR1-MyD88-NF-κB signaling pathway and downstream antimicrobial-associated gene in hemocytes after HcTLR1 gene interference and immune challenges
    Note: Different letters represent significant differences (p<0.05), while the same letters represent insignificant differences (p>0.05).

    本研究克隆了三角帆蚌HcTLR1基因的cDNA序列,编码一个长为3 687 bp的ORF。蛋白质结构预测分析显示,HcTLR1蛋白中含有多个LRR结构域、1个跨膜结构域和1个胞内Toll/白细胞介素-1受体 (TIR),表现出典型的Toll样受体结构。其中,Toll样受体胞外结构域由LRR组成,每个LRR被疏水性的氨基酸间隔开,在识别多种病原体相关的分子模式中发挥重要作用[24-25];而胞内结构域由TIR构成,具有3个保守的氨基酸序列框,负责C端信号传导,并能与含有TIR结构域的接头蛋白MyD88发生相互作用以激活下游信号通路[26-28]。这表明HcTLR1能够识别多种病原体相关分子模式并启动天然免疫反应,参与三角帆蚌的抗菌应答过程。在维氏气单胞菌GL1、LPS、PNG和poly I:C刺激下,三角帆蚌鳃、肝胰腺和血细胞中HcTLR1基因的表达量在不同时间点呈现显著性差异。同时,不同刺激诱导下,免疫持续时效也存在差异。这一发现与已报道的贝类研究结果相符。例如,在副溶血弧菌刺激后,香港牡蛎 (C. hongkongensis) 鳃和血细胞中TLR4基因表达量显著性升高[29];在溶藻弧菌 (V. alginolyticus)、LPS、PGN和poly I:C刺激后,合浦珠母贝 (Pinctada fucata) 肝胰腺中PfTLR3和PfTLR13基因的表达量在不同时间点出现显著性差异[30-31];在LPS、PGN和poly I:C刺激后,三角帆蚌肝胰腺和鳃中TLRn基因的表达水平在不同时间点均显著性升高[20]。以上研究结果均证实了贝类TLRs在应对病原体和PAMPs的刺激时扮演着重要的免疫识别作用[32]。因此,推测HcTLR1分子具有广泛的识别谱,能够识别多种病原体及不同类型的PAMPs,并可能引起一系列级联反应,参与生物体防御功能。

    三角帆蚌各组织HcTLR1基因定量结果显示,其在肝胰腺、斧足、闭壳肌、外套膜、鳃、性腺、血细胞、肾脏和肠等9种组织中均有不同程度的表达,特别是在血细胞中的表达量显著高于其他组织。而在贝类抵御外来病原微生物的过程中,血细胞起到了至关重要的作用,既是细胞免疫的主体,又是体液免疫的提供者[33]。已有研究发现,长牡蛎的TLR2TLR3基因[34-35]及厚壳贻贝 (Mytilus coruscus) 的TLR-like1基因[36]均在血细胞中高表达,并在贝类的免疫应答中发挥关键作用。这与本研究的结果相似,提示HcTLR1在三角帆蚌抗菌应答中同样扮演着重要角色。

    鉴于血细胞在贝类免疫系统中的中心地位[37-38],本研究在血细胞内进行RNA干扰实验。结果显示,HcTLR1的干扰导致多个基因 (如MyD88IRAK4TRAF6p65p105等) 的表达量明显下调,同时下游抗菌免疫基因 (如TherLysDefWAPLBP/BPI 2IL-17) 的表达量也显著降低。这一结果与厚壳贻贝中干扰McTLRw导致McMyD88McIRAK4McTRAF6基因的表达受到显著抑制[39],青蛤 (Cyclina sinensis) 中干扰CsTLR13导致CsMyD88CsIRAK4CsTRAF6CsIKKaCsIkBCsNF-kBCsC-LYZCsAMP基因[40]表达显著下调,以及三角帆蚌中干扰HcTLRn导致NF-κB (p65p105) 及LysTherWAPLBP/BPI 1LBP/BPI 2的表达显著下降[20]等研究结果相一致,这提示HcTLR1可能参与TLR信号通路的激活,且TLR1-MyD88-NF-κB信号通路在三角帆蚌先天免疫应答中起重要作用。Toll信号通路是宿主抗菌应答重要的信号转导通路之一[17],TLR1属于跨膜蛋白,位于信号通路最上游,当受到病原体刺激时,其胞内TIR结构域与包含TIR结构域的接头蛋白MyD88直接相互作用,并经过刺激将IRAK4吸引到TLRs,进而活化IKK复合体、MAPKs和NF-κB等级联反应,最终调节免疫相关基因的表达以发挥多种生物学功能[41]。因此,在三角帆蚌血细胞中,干扰HcTLR1 基因从而导致MyD88依赖性信号通路基因的表达受到抑制,表明HcTLR1可能通过激活MyD88-NF-κB依赖性信号通路来调节下游免疫相关基因的表达,从而发挥抗菌应答作用,但下游MAPK信号通路是否参与三角帆蚌的抗菌应答仍未可知。本研究结果对于深入了解Toll信号通路及HcTLR1在生物体内的抗菌应答机制具有积极意义。

  • 图  1   长江口春、夏季采样站位图

    Figure  1.   Map of sampling stations in Yangtze River Estuary during spring and summer

    图  2   春季长江口环境分布特征

    Figure  2.   Spring distribution of environmental factors in Yangtze River Estuary

    图  3   夏季长江口环境分布特征

    Figure  3.   Summer distribution of environmental factors in Yangtze River Estuary

    图  4   鱼类栖息地适宜区分布

    Figure  4.   Fish habitat suitable area distribution

    表  1   随机分层各区域设计采样站位数量

    Table  1   Number of sampling stations designed for each area

    区域
    Area
    总站位数
    Total number of stations
    取样站位数
    Number of sampling stations
    取样站位所占比例
    Proportion of sampling stations/%
    地理区域
    Geographical area
    A331236.36口内北支 (122°E以西)
    B462554.34口内南支 (122°E以西)
    C421023.81口外北支 (122°E以东)
    D38821.05口外南支 (122°E以东)
    合计 Total15955
    下载: 导出CSV

    表  2   不同物种春、夏季优势度汇总

    Table  2   Summary of index of relative importance of different species in spring and summer

    物种
    Species
    春季
    Spring
    夏季
    Summer
    生态类型
    Ecological
    type
    Engraulis japonicus 146.61 342.25 海洋
    凤鲚 Coilia mystus 0.08 1 980.65 洄游
    皮氏叫姑鱼
    Johnius belangerii
    10.76 223.05 海洋
    银鱼 Salanx ariakensis 0.53 9.56 洄游
    香䲗 Callionymus olidus 48.46 56.78 河口
    弹涂鱼
    Periophthalmus modestus
    11.69 19.55 河口
    大弹涂鱼
    Boleophthalmus pectinirostris
    0.08 118.18 河口
    江口小公鱼
    Stolephorus commersonii
    895.06 11.59 河口
    刀鲚 Coilia ectenes 384.54 洄游
    小沙丁鱼属 Sardinella 0.05 河口
    下载: 导出CSV

    表  3   长江口环境因子分布范围及平均值

    Table  3   Distribution range and average value of environmental factors in Yangtze River Estuary

    环境因子
    Environmental factor
    春季范围
    Range of spring
    春季平均值
    Average value of spring
    夏季范围
    Range of summer
    夏季平均值
    Average value of summer
    海表面温度SST/℃ 6.31~25.45 16.48 22.16~24.98 23.64
    海表面盐度 SSS/‰ 0.01~24.71 10.22 0.01~34.53 14.30
    海表面叶绿素 SCHL/(mg·m−3) 0.14 ~1.28 0.75 0.30~1.54 0.82
    海表面pH SpH 8.15~9.03 8.59 7.83~8.48 8.20
    海表面溶解氧 SO/(mg·L−1) 7.35~7.44 7.41 5.34~7.47 6.16
    海表面营养盐 SNITRO/(mg·L−1) 14.12~15.55 14.90
    下载: 导出CSV

    表  4   各物种春、夏两季AUC值

    Table  4   AUC values of each species in spring and summer

    物种
    Species
    春季AUC值
    AUC value in spring
    夏季AUC值
    AUC value in summer
    凤鲚C. mystus 0.940 0.933
    E. japonicus 0.981 0.871
    香䲗 C. olidus 0.940 0.936
    下载: 导出CSV

    表  5   各环境因子对MaxEnt模型的相对贡献率

    Table  5   Relative contribution rates of environmental variables to MaxEnt Model

    环境变量
    Environment variable
    凤鲚 C. mystus E. japonicus 香䲗 C. olidus
    夏季
    Spring
    春季
    Summer
    夏季
    Spring
    春季
    Summer
    夏季
    Spring
    春季
    Summer
    海表面溶解氧 SO/(mg·L−1) 86.6 80.8 4.6 0.1 30.2 39.8
    海表面叶绿素 SCHL/(mg·m−3) 7.2 5.3 16.3 1.6 24.7 6.0
    海表面pH SpH 5.8 3.8 0.1 2.7 27.5 11.4
    海表面盐度 SSS/‰ 0.3 8.9 79.0 44.0 17.5 34.2
    海表面温度 SST/ ℃ 0 0.6 0 8.4 0 0
    海表面营养盐 SNITRO/(mg·L−1) 0.6 43.2 8.6
    下载: 导出CSV
  • [1] 张建坤, 杨红, 王春峰, 等. 长江口中华鲟保护区附近海域重金属分布特征及生态风险评价[J]. 上海海洋大学学报, 2020, 29(5): 720-733. doi: 10.12024/jsou.20200202937
    [2] 全为民, 沈新强. 长江口及邻近水域渔业环境质量的现状及变化趋势研究[J]. 海洋渔业, 2004, 26(2): 93-98. doi: 10.3969/j.issn.1004-2490.2004.02.004
    [3] 胡艳. 长江口近岸水域幼鱼时空分布及代表种资源评估[D]. 上海: 上海海洋大学, 2015: 28.
    [4] 庄平. 长江口鱼类[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2006: 157-160.
    [5] 李晓炜, 赵建民, 刘辉, 等. 渤黄海渔业资源三场一通道现状、问题及优化管理政策[J]. 海洋湖沼通报, 2018(5): 147-157.
    [6] 汪伟松, 唐未, 龚一赫, 等. 基于MaxEnt模型模拟中西太平洋鲣自由鱼群栖息地的研究[J]. 南方水产科学, 2023, 19(5): 11-21. doi: 10.12131/20230011
    [7] 曹睿星, 官文江, 高峰, 等. 基于最大熵和栖息地指数模型预测东、黄海日本鲭渔场分布[J]. 海洋学报, 2023, 45(9): 72-81.
    [8] 李齐群, 蒋日进, 赵芃, 等. 基于MaxEnt模型的浙江近岸黄鲫潜在适生区分布研究[J]. 中国水产科学, 2025, 32(1): 93-102.
    [9]

    XUE S F, SUN T, ZHANG H, et al. Suitable habitat mapping in the Yangtze River Estuary influenced by land reclamations[J]. Ecol Eng, 2016, 97: 64-73. doi: 10.1016/j.ecoleng.2016.06.121

    [10] 佟佳琦, 陈锦辉, 高春霞, 等. 基于栖息地适应性指数的长江口刀鲚时空分布特征[J]. 上海海洋大学学报, 2018, 27(4): 584-593. doi: 10.12024/jsou.20180202224
    [11] 杨红, 丁骏, 王春峰, 等. 长江口中华鲟幼鲟栖息地适宜性评价[J]. 海洋通报, 2012, 31(6): 675-679.
    [12] 林军. 基于物种分布模型的长江口仔稚鱼优势种生境特征研究[D]. 上海: 上海海洋大学, 2022: 17-18.
    [13]

    WAN R, SONG P B, LI Z G, et al. Use of ensemble model for modeling the larval fish habitats of different ecological guilds in the Yangtze Estuary[J]. Fishes-Basel, 2023, 8(4): 209. doi: 10.3390/fishes8040209

    [14]

    HE Y L, ZHAO L X, LIU S H, et al. Delineation of estuarine ecological corridors using the MaxEnt model to protect marine fishery biodiversity[J]. Front Mar Sci, 2022, 9: 966621. doi: 10.3389/fmars.2022.966621

    [15] 杨佳悦, 丁国玉, 田秀君. 最大熵模型在物种生境预测中的应用研究进展[J]. 应用生态学报, 2025, 36(2): 614-624.
    [16] 薛嘉伦, 樊伟, 唐峰华, 等. 基于最大熵模型预测西北太平洋公海鲐潜在栖息地分布[J]. 南方水产科学, 2018, 14(1): 92-98. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2018.01.012
    [17] 赵传絪, 张仁斋. 中国近海鱼卵与仔鱼[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1985: 1-206.
    [18] 万瑞景, 张仁斋. 中国近海及其邻近海域鱼卵与仔稚鱼[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2016: 1-435.
    [19]

    PIANKA E R. Lizard species density in the Kalahari Desert[J]. Ecology, 1971, 52(6): 1024-1029. doi: 10.2307/1933808

    [20] 吴庆明, 王磊, 朱瑞萍, 等. 基于MAXENT模型的丹顶鹤营巢生境适宜性分析: 以扎龙保护区为例[J]. 生态学报, 2016, 36(12): 3758-3764.
    [21]

    LISSOVSKY A A, DUDOV S V. Species-distribution modeling: advantages and limitations of its application. 2. MaxEnt[J]. Biol Bull Rev, 2021, 11(3): 265-275. doi: 10.1134/S2079086421030087

    [22]

    CARLOS-JÚNIOR L A, NEVES D M, BARBOSA N P, et al. Occurrence of an invasive coral in the southwest Atlantic and comparison with a congener suggest potential niche expansion[J]. Ecol Evol, 2015, 5(11): 2162-2171. doi: 10.1002/ece3.1506

    [23] 买佳阳, 蒋雪中. 2000年以来长江河口海表温度变化MODIS分析[J]. 遥感学报, 2015, 19(5): 818-826.
    [24] 施思, 骆政, 徐昕. 2018年长江口枯季盐度监测与分析[J]. 水利水电快报, 2021, 42(10): 75-80, 87.
    [25] 高磊, 姚海燕, 曹婧, 等. 滦河口邻近海域夏季海水叶绿素a时空分布特征及其影响因素[J]. 海洋湖沼通报, 2017(5): 109-113.
    [26] 孔亚珍, 贺松林, 丁平兴, 等. 长江口盐度的时空变化特征及其指示意义[J]. 海洋学报, 2004, 26(4): 9-18. doi: 10.3321/j.issn:0253-4193.2004.04.002
    [27]

    WHITFIELD A K. Why are there so few freshwater fish species in most estuaries?[J]. J Fish Biol, 2015, 86(4): 1227-1250. doi: 10.1111/jfb.12641

    [28]

    WHITFIELD A K. The role of seagrass meadows, mangrove forests, salt marshes and reed beds as nursery areas and food sources for fishes in estuaries[J]. Rev Fish Biol Fisher, 2017, 27(1): 75-110. doi: 10.1007/s11160-016-9454-x

    [29] 农牧渔业部水产局. 东海区渔业资源调查和区划[M]. 上海: 华东师范大学出版社, 1987: 216-622.
    [30]

    HE W P, LI Z J, LIU J S, et al. Validation of a method of estimating age, modelling growth, and describing the age composition of Coilia mystus from the Yangtze Estuary, China[J]. ICES J Mar Sci, 2008, 65(9): 1655-1661. doi: 10.1093/icesjms/fsn143

    [31] 倪勇, 王云龙, 蒋玫, 等. 长江口凤鲚的渔业生物学特性[J]. 中国水产科学, 1999, 6(5): 69-71.
    [32]

    WANG D, WAN R, LI Z G, et al. The non-stationary environmental effects on spawning habitat of fish in estuaries: a case study of Coilia mystus in the Yangtze Estuary[J]. Front Mar Sci, 2021, 8: 766616. doi: 10.3389/fmars.2021.766616

    [33] 毕雪娟. 长江口凤鲚繁殖生物学及HSI评估[D]. 上海: 上海海洋大学, 2015: 36-38.
    [34] 朱宜平. 长江口青草沙水域外海正面盐水入侵特点分析[J]. 华东师范大学学报(自然科学版), 2021(2): 21-29.
    [35]

    ISEKI K, KIYOMOTO Y. Distribution and settling of Japanese anchovy (Engraulis japonicas) eggs at the spawning ground off Changjiang River in the East China Sea[J]. Fish Oceanogr, 1997, 6(3): 205-210. doi: 10.1046/j.1365-2419.1997.00040.x

    [36] 线薇微, 张辉, 刘淑德. 河口鱼类浮游生物生态学研究进展[J]. 海洋科学集刊, 2016, 51(23): 167-180.
    [37] 王九江, 刘永, 肖雅元, 等. 大亚湾鱼卵、仔稚鱼种群特征与环境因子的相关关系[J]. 中国水产科学, 2019, 26(1): 14-25.
    [38] 谢雨芳, 吴鹏, 刘永, 等. 珠江河口凤鲚的栖息地适宜性评价[J]. 南方水产科学, 2023, 19(1): 22-29. doi: 10.12131/20220029
    [39]

    XIA M X, JIA H, WANG Y B, et al. Effects of climate change on the distribution of Scomber japonicus and Konosirus punctatus in China’s coastal and adjacent waters[J]. Fishes, 2024, 9(10): 395. doi: 10.3390/fishes9100395

    [40]

    ZHANG H, XIAN W W, LIU S D. Ichthyoplankton assemblage structure of springs in the Yangtze Estuary revealed by biological and environmental visions[J]. PeerJ, 2015, 3: e1186. doi: 10.7717/peerj.1186

    [41]

    ZHANG H, XIAN W W, LIU S D. Autumn ichthyoplanktonassemblage in the Yangtze Estuary shaped by environmental factors[J]. PeerJ, 2016, 4: e1922. doi: 10.7717/peerj.1922

    [42] 柳昊, 张文超, 李文甲, 等. 黄海中部夏季鳀鱼卵、仔稚鱼分布与早期生长特征[J]. 上海海洋大学学报, 2024, 33(1): 172-185. doi: 10.12024/jsou.20230304106
    [43] 余欣欣, 郑国栋, 陈杰, 等. 低氧胁迫对鱼类影响的研究进展[J]. 水产科学, 2024, 43(2): 333-340.
    [44] 李晓瑛, 王华, 王屹晴, 等. 基于机器学习的长江口溶解氧预测模型与评估[J]. 环境科学, 2024, 45(12): 7123-7133.
    [45] 谢雯, 王思凯, 秦泽, 等. 长江口潮滩湿地生境修复对鱼类群落结构的影响[J]. 中国水产科学, 2023, 30(5): 573-583. doi: 10.12264/JFSC2023-0042
  • 期刊类型引用(10)

    1. 衣帆,王娇,刘航,陈静,陈琳琳,李晓静,李学鹏,李宝泉. 烟台长岛秋季海洋牧场内外大型底栖动物群落特征分析. 海洋学报. 2024(05): 57-67 . 百度学术
    2. 袁华荣,章守宇,陈丕茂. 海洋牧场建设效益评价研究进展与展望. 南方水产科学. 2024(05): 1-13 . 本站查看
    3. 张启宇,张文博,郑奕,陈英义,何锦辉. 基于CiteSpace分析的国内海洋牧场研究进展. 农业工程. 2024(11): 65-73 . 百度学术
    4. 马文刚,夏景全,魏一凡,尹洪洋,覃乐政,刘相波,胡雪晴,许强,李秀保,王爱民. 三亚蜈支洲岛海洋牧场近岛区底表大型底栖动物群落结构及评价. 热带海洋学报. 2022(03): 135-146 . 百度学术
    5. 张亚洲,蒋日进,梁君. 嵊泗马鞍列岛海域国家级海洋牧场渔业资源增殖养护效果评析. 浙江海洋大学学报(自然科学版). 2022(05): 466-472 . 百度学术
    6. 许双杰,高源. 中国海洋牧场发展潜力的时空差异分析. 海洋经济. 2022(06): 64-73 . 百度学术
    7. 刘伟峰,刘大海,管松,姜伟. 海洋牧场生态效益的内涵与提升路径. 中国环境管理. 2021(02): 33-38+54 . 百度学术
    8. 王书献,张胜茂,戴阳,王永进,隋江华,朱文斌. 利用声呐数据提取磷虾捕捞深度方法研究. 南方水产科学. 2021(04): 91-97 . 本站查看
    9. 裴琨,吴一桂,杨润琼. 中国最早的人工鱼礁试验地——防城港市白龙珍珠湾海洋牧场人工鱼礁建设概述. 河北渔业. 2020(06): 22-27+63 . 百度学术
    10. 吴程宏,张羽翔,赵海龙,陈敏,刘维,林国尧. 海南文昌冯家湾人工鱼礁区渔业资源养护效果初步评估. 海洋湖沼通报. 2020(06): 158-167 . 百度学术

    其他类型引用(8)

推荐阅读
Comparative study on growth, hepatopancreas and gill histological structure, and enzyme activities oflitopenaeus vannameiunder so42−/cl−stress in low saline water
HE Zheng et al., SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE, 2025
Analysis of morphological differences and discrimination between female and malecololabis sairabased on geometric morphometrics
YIN Xingjun et al., SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE, 2024
A method for estimating quantity oftrachinotus ovatusin marine cage aquaculture based on high-frequency horizontal mechanical scanning sonar image
HU Jiazhen et al., SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE, 2024
Molecular identification and expression characteristics analysis ofsubfatingene from grass carp
YANG Boya et al., SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE, 2024
Qtl analysis of body weight, body length, body depth and body thickness in mirror carp (cyprinus carpio) #br#
ZHANG Xiaofeng et al., CHINESE JOURNAL OF FISHERIES, 2023
Path analysis of the effects of morphological traits on body weight of different genders of diptychus maculatus in muzhati river
HAO Huimin et al., JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA, 2025
Diversity, distribution and host blood meal analysis of adult black flies (diptera: simuliidae) from thailand
Gomontean, Bhuvadol et al., INSECTS, 2024
Shape and size variations of distal phalanges in cattle
Manuta, Nicoleta et al., ANIMALS, 2024
Elevation gradients and environmental variables shaping tree diversity and composition in srivilliputhur wildlife sanctuary, western ghats
GEOLOGY, ECOLOGY, AND LANDSCAPES, 2024
A novel approach to defeat obesity: an in vitro and in vivo evaluation of the active diterpene in coleus forskohlii (forcslim™)
INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACOLOGY, 2024
Powered by
图(4)  /  表(5)
计量
  • 文章访问数:  62
  • HTML全文浏览量:  10
  • PDF下载量:  6
  • 被引次数: 18
出版历程
  • 收稿日期:  2025-02-04
  • 修回日期:  2025-03-25
  • 录用日期:  2025-04-10
  • 网络出版日期:  2025-04-29

目录

/

返回文章
返回