Effects of stocking density on growth performance and physiological and biochemical parameters of Pelteobagrus vachelli juvenile
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摘要:
瓦氏黄颡鱼 (Pelteobagrus vachelli) 是长江流域的特色土著鱼类，具有广阔的发展前景。为探究陆基循环水养殖模式下瓦氏黄颡鱼幼鱼对不同密度的响应，设置了低密度组 [LD, (2.03±0.09) kg·m−3]、中密度组 [MD, (3.49±0.37) kg·m−3] 和高密度组 [HD, (5.03±0.11) kg·m−3] 3个密度组，对其进行56 d的养殖实验，测定其生长性能和生理生化指标。结果显示，MD组的增长率显著高于其他组，饲料系数低于其他组，表现出更优的生长性能。体长和体质量的变异系数无显著性差异 (p>0.05)，但最低值均出现在MD组，表明MD组瓦氏黄颡鱼幼鱼的生长离散程度较低，规格较均匀。血清葡萄糖 (GLU)含量在HD组达到最大值 (p<0.05)，而甘油三酯 (TG) 和总胆固醇 (TC) 含量在LD组达到最大值 (p<0.05)。溶菌酶 (LZM) 活性随着养殖密度的增加呈下降趋势，而皮质醇含量无显著性差异 (p>0.05)。MD组肝脏超氧化物歧化酶 (SOD) 活性最低 (p<0.05)，谷胱甘肽过氧化物酶 (GSP-Px) 活性最高 (p<0.05)。过氧化氢酶 (CAT) 活性和丙二醛 (MDA) 含量在各密度组间无显著性差异 (p>0.05)。肠道胰蛋白酶 (Trypsin)、脂肪酶 (LPS) 和淀粉酶 (AMS) 活性均在MD组达到最高值。研究表明，在本陆基循环水系统中，瓦氏黄颡鱼幼鱼在3.49 kg·m−3养殖密度下表现出最佳的生长性能和生理状态。
Abstract:Pelteobagrus vachelli, a native fish species of the Yangtze River, shows great developmental potential. To understand how it responds to varying densities in a land-based circulating water system, we investigated three density groups: Low density [LD, (2.03±0.09) kg·m−3], medium density [MD, (3.49±0.37) kg·m−3] and high density [HD, (5.03±0.11) kg·m−3]. After a 56-day rearing, we assessed the growth, physiological, and biochemical parameters of P. vachelli juvenile. The results show that MD group exhibited a significantly higher length gain rate but a lower food coefficient compared with the other groups, showingsuperior growth performance. There were no significant changes in the variation coefficients of body length and body mass (p>0.05), but the lowest values were found in MD group, indicating that the growth dispersion of P. vachelli in MD group was better and the specifications were more uniform. Serum glucose levels peaked in HD group (p<0.05), while serum triglycerides and total cholesterol were highest in LD group (p<0.05). Lysozyme activity decreased as density increased, but cortisol levelsremained relatively stable (p>0.05). The liver's superoxide dismutase activity was the lowest in MD group (p<0.05), while glutathione peroxidase activity was the highest (p<0.05). No significant differences were observed in the catalase activity and malondialdehyde content among the groups (p>0.05). The activities of intestinal enzymes such as trypsin, lipase, and amylase were the highest in MD group. The results suggest that P. vachelli juvenile grows best in a land-based circulating water system at a stocking density of 3.49 kg·m−3.
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重金属污染来源广泛，主要有城镇废水、大气沉降、海水养殖以及地表径流等[1-2]，同时由于其具有毒性、不可生物降解和易富集等特性，现已成为一个全球性的海洋污染问题[3-4]。海洋沉积物是各种污染物的主要汇聚地[5]，沉积物中的重金属污染会影响水质，进而影响水生生物对重金属的生物同化和生物积累，对人类健康和生态系统具有潜在的长期影响[6−8]。
大亚湾是广东沿海最优良的海湾之一，湾内分布有多种珍稀水生物种，同时也是广东省重要的水产养殖基地[9]。21世纪以来，随着沿岸经济快速发展以及日益频繁的人类活动，大亚湾海洋环境质量也发生了变化[10−12]。孙涛等[13]的研究指出大亚湾海域部分调查站位的沉积物受到石油烃污染，且石油烃主要集中在石化排污海域、进港航道以及原油码头等。Zhao等[14]根据2008年采集的样品分析了大亚湾沉积物中7种重金属的污染情况，发现空间分布自西向东逐渐减小。曹玲珑等[15]分析了2011年大亚湾表层沉积物中7类重金属，指出沉积物中重金属分布呈现环带状，从近岸向远岸逐渐降低。近些年来，许多学者针对大亚湾沉积物中石油类[13]、硅 (Si)[16]、磷 (P)[17]、有机质[18]、PAHs[19]、重金属污染[14−15, 20−23]等开展了研究，但仍缺乏针对沉积物中铜 (Cu)、铅 (Pb)、锌 (Zn) 含量及其空间分布的长期研究。因此，本文主要以大亚湾海域的表层沉积物为研究对象，对沉积物中Cu、Pb及Zn的时空分布情况进行分析，并采用潜在生态风险评价法对其污染程度进行评价，以期为大亚湾区海洋环境质量以及大湾区建设提供管理依据。
1. 研究方法
1.1 采样时间和站位
站位布设情况：1) 2010年6月布设15个站位；2) 2012年2月布设20个站位；3) 2015年1月布设13个站位；4) 2018年12月布设13个站位。具体站位分布情况见图1。
1.2 采样及分析方法
采用抓斗式采样器采集表层沉积物，按照《海洋监测规范》(GB 17378.5—2007) 中的方法低温保存后送实验室检测。样品处理具体操作如下：先将沉积物置于室温下自然风干，筛除沉积物中的杂质后用研钵研碎并过100目网筛，然后称取0.2 g样品加入HCl-HNO3-HF-HClO4用石墨消解仪进行消解、定容。沉积物中Cu、Pb和Zn含量均采用原子吸收分光光度法 (原子吸收分光光度计AA6800) 进行检测，重金属元素的回收率为88%~111%，检出限均为0.50 mg·kg−1。
1.3 评价方法
沉积物污染状况采用Hakanson[24]提出的潜在生态风险指数法评价：
$$ C_{j}^{i} = \frac{{{C^i}}}{{C_n^i}};{C_d}{\rm{ = }}\sum\limits_{i = 1}^n {C_{j}^i} ;E_r^i = T_r^i \times C_{j}^i;{\rm{RI}} = \sum\limits_{i = 1}^n {E_r^i} $$ 式中Cj i为第i项重金属的污染指数；Ci为第i项重金属的实测值，本文选用平均值；Cn i为重金属的参照值，本文采用张银英[25]计算的大亚湾海域沉积物中w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn) 的背景值，分别为6.44、21.67和26.01 mg·kg−1；Cd为综合污染指数；Er i为潜在生态风险系数；Tr i为重金属毒性系数；RI为潜在生态风险指数。本文中Tr i采用徐争启等[26]根据Hakanson提出的方法计算出的毒性系数，分别为
${\rm{Zn}} =1 < {\rm{Cu }}= {\rm{Pb}} = 5$ 。潜在生态风险划分标准[27−28]见表1。表 1 潜在生态风险评价等级Table 1 Level of potential ecological risk assessment序号
No.潜在生态风险系数
Er i潜在生态风险指数
RI等级
Level1 <30 <100 轻微 2 30~50 100~150 中等 3 50~100 150~200 较强 4 100~150 200~300 很强 5 ≥150 ≥300 极强 1.4 数据分析
监测数据采用Excel 2010软件进行统计分析。采用SURFER 16软件绘制重金属含量分布图。采用SPSS 21.0软件对数据进行相关性分析。
2. 结果
2.1 表层沉积物中重金属含量及分布特征
表层沉积物中重金属含量监测情况见表2。监测期间，2010、2012、2015和2018年沉积物中w(Cu) 分别介于4.5~30.0 mg·kg−1、2.5~35.9 mg·kg−1、6.4~110.0 mg·kg−1、8.5~58.7 mg·kg−1，均值分别为15.4、16.1、22.8和18.9 mg·kg−1；w(Pb) 分别介于16.0~53.0 mg·kg−1、8.4~55.3 mg·kg−1、20.0~45.8 mg·kg−1、21.6~44.8 mg·kg−1，均值分别为32.7、37.4、31.7和33.2 mg·kg−1；w(Zn) 分别介于26.1~105.0 mg·kg−1、41.8~154.0 mg·kg−1、44.0~112.0 mg·kg−1、50.2~116.0 mg·kg−1，均值分别为72.9、110.6、81.9和83.1 mg·kg−1。沉积物中重金属含量整体上呈现Zn>Pb>Cu的规律。其中2015年w(Cu) 最大值出现在澳头的白寿湾海域附近站位，其余站位监测值介于6.4~37.1 mg·kg−1，与其他年份相比差异不大。2010—2018年w(Pb) 差异不大，w(Zn) 除2012年较高外，其余年份基本相当。
表 2 大亚湾表层沉积物中重金属质量分数Table 2 Mass fractions of heavy metals in sediments from Daya Baymg·kg−1 年份
Year监测值
Monitoring data监测项目
Monitoring indicator铜 Cu 铅 Pb 锌 Zn 2010 范围 4.5~30.0 16.0~53.0 26.1~105.0 均值±标准差 15.4±6.9 32.7±9.3 72.9±22.1 2012 范围 2.5~35.9 8.4~55.3 41.8~154.0 均值±标准差 16.1±9.2 37.4±13.9 110.6±37.5 2015 范围 6.4~110.0 20.0~45.8 44.0~112.0 均值±标准差 22.8±26.2 31.7±7.0 81.9±23.2 2018 范围 8.5~58.7 21.6~44.8 50.2~116.0 均值±标准差 18.9±13.3 33.2±6.2 83.1±19.6 本研究中w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn) 均值均高于大亚湾海域沉积物中Cu、Pb和Zn的背景值[25][w(Cu): 6.44 mg·kg−1，w(Pb): 21.67 mg·kg−1，w(Zn): 26.01 mg·kg−1]，其中w(Cu)、w(Zn) 均值是背景值的2倍以上，w(Pb) 均值是背景值的1倍多。各重金属含量监测均值历年变化趋势见图2。w(Cu)、w(Pb) 均值呈现较为平稳的波动，w(Zn) 均值除2012年较高外，其余年份差异较小。w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn) 均值均符合《海洋沉积物质量》(GB 18668—2002) 中Ⅰ类标准[w(Cu): 35.0 mg·kg−1，w(Pb): 60.0 mg·kg−1，w(Zn): 150.0 mg·kg−1]。
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图 2 大亚湾沉积物中重金属质量分数变化情况Fig. 2 Changes of heavy metal mass fractions in sediments of Daya Bay监测期间各年份重金属含量分布见图3、图4、图5。整体上看，Cu、Pb和Zn的含量分布变化不大，且分布情况具有相似性，呈由近海岸向远海岸降低的趋势，除部分年份在惠东大亚湾石化区第一条排污管线排污口附近海域有一定的高值区外，主要高值区均出现在澳头至石化区一带的近岸海域。这一带也是人类活动最频繁的区域，沿岸工业企业也较多。
2.2 潜在生态风险评价
大亚湾海域表层沉积物中重金属潜在生态风险评价结果见表3。监测期间，Cu、Pb和Zn的
$C_{j}^i $ 均值分别介于2.39~3.54、1.46~1.73、2.80~4.25，表明污染程度Zn>Cu>Pb。3种重金属的$E_r^i $ 均值均较低，为较轻微影响程度，2010—2018年间变化较平缓，其中Cu的$E_r^i $ 稍高于Pb、Zn。历年RI均值分别为22.30、25.38、28.16、25.52，变化较平稳，总体而言3种重金属在沉积物中的潜在生态风险为轻微程度。表 3 沉积物中重金属评价结果汇总Table 3 Summary of heavy metal evaluation results in sediments年份
Year污染指数 Cji 综合污染指数
Cd潜在生态风险系数 Eri 潜在生态风险指数
RI铜 Cu 铅 Pb 锌 Zn 铜 Cu 铅 Pb 锌 Zn 2010 2.39 1.51 2.80 6.70 11.96 7.54 2.80 22.30 2012 2.50 1.73 4.25 8.48 12.50 8.63 4.25 25.38 2015 3.54 1.46 3.15 8.15 17.70 7.31 3.15 28.16 2018 2.93 1.53 3.19 7.65 14.67 7.66 3.19 25.52 2.3 重金属相关性分析
使用SPSS 21.0软件对大亚湾表层沉积物中Cu、Pb和Zn的含量作相关性分析，计算结果见表4。除2015年Cu、Pb含量的相关性较低外，其他相关系数介于0.563~0.976。整体上大亚湾海域表层沉积物中Cu、Pb和Zn的含量呈显著正相关，这表明3种重金属间具有明显的同源性。
表 4 沉积物中重金属相关性分析Table 4 Correlation analysis of heavy metals in sediments年份
Year要素
Factor铜
Cu铅
Pb锌
Zn备注
Note2010 Cu 1.000 n=15 Pb 0.884** 1.000 Zn 0.742** 0.856** 1.000 2012 Cu 1.000 n=20 Pb 0.845** 1.000 Zn 0.869** 0.899** 1.000 2015 Cu 1.000 n=13 Pb 0.400 1.000 Zn 0.563* 0.884** 1.000 2018 Cu 1.000 n=13 Pb 0.815** 1.000 Zn 0.824** 0.976** 1.000 注：*. 显著相关；**. 极显著相关 Note: *. Significant correlation; **. Very significant correlation 3. 讨论
研究表明，广东省沿海经济发达的城市，近海沉积物中重金属含量也较高[29]。陆源输入是近岸海域重金属污染的主要来源[30−31]，而沉积物中Cu、Pb和Zn的含量通常与沿岸的经济发展以及工业废水排放等密切相关[29]。21世纪初，中海油、壳牌一期项目相继在大亚湾石化区成功投产后，石化区的废水排放量接近9.2×106 m3·年−1[32]。2018年中海油、壳牌二期项目分别建成并投入运行，根据《中海油惠州石化有限公司炼油二期工程竣工环境保护验收监测报告》，二期项目废水排放量约3.67×106 m3·年−1。石化区排海废水中主要的污染指标包括COD、氨氮、石油类、重金属等[32]，排海污水中重金属质量浓度限值：Cu为0.5 mg·L−1、Pb为1.0 mg·L−1、Zn为2.0 mg·L−1。从重金属的空间分布来看，本研究中Cu、Pb和Zn的高值区主要出现在澳头至石化区一带的近岸海域，且重金属相关性分析表明3种重金属间呈显著正相关，表明3种重金属具有相似的来源。3种重金属均呈现从近海岸向远海岸降低的趋势，其中14、15、30、31、32、33、34、35、45、46号站位均位于大亚湾第一条排污管线排海口附近，这些站位的重金属质量浓度低于湾顶站位的监测值，原因可能是大亚湾东南部的湾口区域海水交换能力好[33]，交换更频繁，重金属容易随着海流流动，使得湾口区域沉积物中重金属含量相对较低。而湾顶的含量高值区一带靠近大亚湾石化区，人类活动频繁，工业企业较多，陆源排放的污染物也较多[21]，海水交换能力相对较差[33]，重金属易于沉积。2018年的监测站位中位于外海55—61号站位监测值明显低于湾顶的49、50、51号站位，也表明湾顶沉积物中重金属含量高于湾外。目前惠州大亚湾石化区已形成炼油2 200万吨·年−1、乙烯220万吨·年−1的石化产能，炼化一体化规模跃升至全国第一，石化区已落户项目达89宗，根据《惠州大亚湾经济技术开发区海洋环境保护三年行动计划 (2017—2019年)》，大亚湾区沿岸的63个陆源排海口中有20个分布在石化区沿岸，除部分企业通过石化区排海管线排放污水外，其他工业企业废水主要经入海河流间接排海，而工业企业产生的废水通常含有大量的Cu、Zn等重金属[22]。同时澳头海域是大亚湾主要的网箱养殖区，也会输入重金属[27, 34]。有研究表明，大亚湾网箱养殖区域表层沉积物中Cu、Pb的含量明显高于对照区[35−36]。综上所述，沿岸工业企业排放以及澳头海域水产养殖等可能是大亚湾近岸海域Cu、Pb和Zn的主要来源。
从时间上看，历年的监测数据中，w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn)分别介于2.5~110.0 mg·kg−1、8.4~55.3 mg·kg−1和26.1~154.0 mg·kg−1，本次调查的数据中w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn) 的最高值分别是背景值[25]的17、2.5和6倍。沉积物中w(Cu) 远高于背景值的原因可能是由于该海域Cu的富集系数较高[27, 37]。本研究中w(Cu)、w(Pb) 和w(Zn) 与近年来大亚湾表层沉积物中重金属的研究报道[14−15, 21−23]以及粤东海域[29]的研究数据基本相当，高于莱州湾[38]表层沉积物中重金属含量，但低于珠江口海域[29]、厦门海域[39]、胶州湾[40]的研究数据 (表5)。表明大亚湾海域表层沉积物中Cu、Pb和Zn的含量变化较稳定，近十年来重金属含量未出现明显增加。
表 5 大亚湾与其他海域沉积物中重金属含量对比Table 5 Comparison of heavy metals contents in sediments of Daya Bay and other seas采样时间
Sampling time地点
Areaw(Cu)/(mg·kg−1) w(Pb)/(mg·kg−1) w(Zn)/(mg·kg−1) 参考文献
References/ 大亚湾背景值 6.44 21.67 26.01 [25] 2018 大亚湾 8.5~58.7 (18.90) 21.6~44.8 (33.20) 50.2~116.0 (83.10) 本研究 2015 大亚湾 6.4~110.0 (22.80) 20.0~45.8 (31.70) 44.0~112.0 (81.90) 本研究 2015 大亚湾 8.0~40.5 (23.60) 6.3~56.5 (33.20) 22.4~149.0 (88.60) [21] 2015 大亚湾 1.3~47.4 (13.90) 3.7~61.2 (29.10) 37.3~175 (82.30) [22] 2012 大亚湾 2.5~35.9 (16.10) 8.4~55.3 (37.40) 41.8~154.0 (110.60) 本研究 2011 大亚湾 6.12~22.50 (10.90) 20.31~80.96 (44.18) 31.54~87.25 (59.34) [15] 2010 大亚湾 4.5~30.0 (15.40) 16.0~53.0 (32.70) 26.1~105.0 (72.90) 本研究 2008 大亚湾 1.00~39.50 (16.46) 11.00~56.00 (37.01) 13.00~125.00 (87.81) [14] 2006—2007 大亚湾 2.61~64.68 (12.46) 11.52~45.95 (28.50) 30.58~85.07 (61.76) [23] 2014—2016 珠江口 44.38 49.94 153.27 [29] 2014—2016 粤东 17.76 37.08 73.37 [29] 2016 莱州湾 3.98~23.1 (11.90) 5.22~19.7 (12.10) 26.3~81.7 (45.30) [38] 2016 厦门海域 5.1~44.5 (26.70) 19.0~82.5 (48.00) 30.5~233.0 (136.60) [39] 2015 胶州湾 5.5~120.0 (38.80) 17.8~325.0 (55.20) 15.2~347.0 (107.40) [40] 注：括号内为均值 Note: Means are in parentheses. 大亚湾沉积物中3种重金属的Er i值呈现为Cu>Pb>Zn，表明Cu的Er i稍高于其他2种重金属。Cu、Pb和Zn的Er i均为轻微危害等级 (Er i<30)，这与唐得昊和刘兴建[21]、林丽华等[22]、谷阳光等[23]、梁庆阳等[27]、徐姗楠等[41]对大亚湾沉积物中Cu、Pb和Zn的
$E_r^i $ 值研究规律基本一致。总体而言，Cu、Pb和Zn在大亚湾表层沉积物中的污染程度较轻微，近十年来未发生明显变化。本研究中3种重金属历年的RI均小于100，表明大亚湾海域沉积物中Cu、Pb和Zn 3种重金属的综合潜在生态风险较轻微，但是鉴于大亚湾生态环境的敏感程度以及重金属的长期累积毒性，大亚湾海域沉积物中重金属污染仍应引起相关监管部门足够的重视。由于本文仅研究分析了上述3种重金属，这也使得RI相对较低，沉积物中重金属的污染状况还有待更进一步的调查研究。4. 结论
2010—2018年大亚湾表层沉积物中Cu、Pb和Zn的含量较稳定，空间分布上均呈现由近海岸向远海岸减少的趋势。Cu、Pb、Zn的含量呈显著正相关，表明3种重金属具有明显的同源性，沿岸工业企业排放以及澳头海域水产养殖等可能是近岸海域Cu、Pb和Zn的主要来源。
大亚湾表层沉积物中重金属污染程度为Zn>Cu>Pb。潜在生态风险评价表明，重金属的
$E_r^i $ 值呈现Cu>Pb>Zn，近十年来沉积物中Cu、Pb和Zn的污染状况并未随着经济的发展呈现出恶化的趋势，整体上3种重金属的潜在生态危险较轻微。 -
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图 1 不同养殖密度对血清中葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇水平的影响
注：不同小写字母表示实验组间差异显著 (p<0.05)。
Figure 1. Effects of different stocking densities on glucose, triglycerides and total cholesterol levels in serum
Note: Different lowercase letters represent significant differences among the experimental groups (p<0.05).
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图 2 不同养殖密度对溶菌酶和皮质醇水平的影响
注：不同小写字母表示实验组间差异显著(p<0.05)。
Figure 2. Effects of different stocking densities on lysozyme and cortisol levels
Note: Different lowercase letters represent significant differences among the experimental groups (p<0.05).
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图 3 不同养殖密度对超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛水平的影响
注：不同小写字母表示实验组间差异显著 (p<0.05)。
Figure 3. Effects of different stocking densities on levels of superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase and malondialdehyde
Note: Different lowercase letters represent significant differences among the experimental groups (p<0.05).
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图 4 不同养殖密度对肝脏和肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性的影响
注：不同小写字母表示实验组间差异显著 (p<0.05)。
Figure 4. Effects of different stocking density on activities of trypsin, lipase and amylase in liver and intestine
Note: Different lowercase letters represent significant differences among the experimental groups (p<0.05).
表 1 瓦氏黄颡鱼幼鱼的生长性能
Table 1 Growth performance of P. vachelli juvenile
指标
Parameter低密度组
Low density group (LD)中密度组
Medium density group (MD)高密度组
High density group (HD)均值
Mean初始体质量Initial body mass/g 5.91±0.46 5.78±0.30 5.86±0.31 5.85±0.18 终末体质量Final body mass/g 9.52±0.31 10.54±0.52 9.90±0.19 9.99±0.24 初始体长Initial length/cm 7.17±0.18 7.07±0.15 7.25±0.07 7.16±0.08 终末体长Final length/cm 8.29±0.09 8.55±0.13 8.44±0.10 8.43±0.07 成活率Survival rate/% 97.22±0.31 97.69±0.92 97.49±0.46 97.47±0.32 特定生长率Specific growth rate/(%·d–1) 0.86±0.08 1.07±0.05 0.94±0.08 0.96±0.05 体质量增长率Body mass gain rate/% 62.36±7.13 82.71±5.10 69.65±7.89 71.57±4.52 体质量日增长Daily body mass gain/(g·d–1) 0.06±0.00b 0.09±0.01a 0.07±0.00ab 0.07±0.00 增长率Length gain rate/% 15.83±1.76b 20.91±0.81a 16.46±1.02b 17.73±1.02 饲料系数Food coefficient 1.76±0.09a 1.25±0.06b 1.43±0.09b 1.48±0.09 注：同行中不同字母间存在显著性差异 (p<0.05)。 Note: Values with different letters within the same row represent significant differences (p<0.05). 
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表 2 瓦氏黄颡鱼幼鱼体长、体质量变异系数
Table 2 Variation coefficients of final body length and body mass of P. vachelli juvenile
指标
Parameter低密度组
Low density group (LD)中密度组
Medium density group (MD)高密度组
High density group (HD)体长变异系数
Coefficient of variation in body length8.94±0.66 6.81±0.72 7.98±1.05 体质量变异系数
Coefficient of variation in body mass27.34±2.72 19.53±1.42 20.51±3.41
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