不同日龄四指马鲅幼鱼肠道结构和菌群组成变化分析

冯元泰, 史荣君, 李俊伟, 区又君, 齐占会, 黄洪辉, 贾旭颖

冯元泰, 史荣君, 李俊伟, 区又君, 齐占会, 黄洪辉, 贾旭颖. 不同日龄四指马鲅幼鱼肠道结构和菌群组成变化分析[J]. 南方水产科学, 2025, 21(1): 153-163. DOI: 10.12131/20240198
引用本文: 冯元泰, 史荣君, 李俊伟, 区又君, 齐占会, 黄洪辉, 贾旭颖. 不同日龄四指马鲅幼鱼肠道结构和菌群组成变化分析[J]. 南方水产科学, 2025, 21(1): 153-163. DOI: 10.12131/20240198
FENG Yuantai, SHI Rongjun, LI Junwei, OU Youjun, QI Zhanhui, HUANG Honghui, JIA Xuying. Analysis of changes in intestinal structure and microbial composition in Elentheronema tetradactylum juvenile at different days of age[J]. South China Fisheries Science, 2025, 21(1): 153-163. DOI: 10.12131/20240198
Citation: FENG Yuantai, SHI Rongjun, LI Junwei, OU Youjun, QI Zhanhui, HUANG Honghui, JIA Xuying. Analysis of changes in intestinal structure and microbial composition in Elentheronema tetradactylum juvenile at different days of age[J]. South China Fisheries Science, 2025, 21(1): 153-163. DOI: 10.12131/20240198

不同日龄四指马鲅幼鱼肠道结构和菌群组成变化分析

基金项目: 中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助 (2023TD15);广东省省级乡村振兴战略专项资金种业振兴项目 (2022-SPY-00-013; 2024-SPY-00-012)
详细信息
    作者简介:

    冯元泰 (1999—),男,硕士研究生,研究方向为养殖生态。E-mail: fyt13373196802@126.com

    通讯作者:

    李俊伟 (1982—),男,副研究员,博士,研究方向为近海滩涂、池塘养殖技术。E-mail: lijunwei303@163.com

    贾旭颖 (1984—),女,副教授,博士,研究方向为渔业资源与环境。E-mail: Jiaxuying@tjau.edu.cn

  • 中图分类号: S 967

Analysis of changes in intestinal structure and microbial composition in Elentheronema tetradactylum juvenile at different days of age

  • 摘要:

    为研究四指马鲅 (Elentheronema tetradactylum) 幼鱼的肠道发育规律和菌群变化特征,为其健康养殖和饵料投喂管理提供科学依据,采集了养殖实验过程中不同日龄 (37、44、58、72、86和114日龄)的四指马鲅,并结合生长性能、肠道组织结构、肠道菌群组成变化等指标进行研究。结果显示:各日龄幼鱼间的生长性能存在显著性差异 (p<0.05)。随着鱼苗日龄增加,其肠道绒毛长度、宽度、肌层厚度和杯状细胞数量等逐渐增加,在58日龄时肠道结构相对完善。在幼鱼肠道中共鉴定出40个门和521个属的微生物,在门水平上,变形菌门、放线菌门和厚壁菌门为优势菌门,占所有肠道细菌的78.69%。在属水平上,不同日龄的优势菌属存在显著性差异 (p<0.05),丰度变化较大。伯克氏菌属(Burkholderia)、弧菌属(Vibrio)、罗尔斯通氏菌属(Ralstonia)与绒毛长度和肌层厚度均呈显著正相关性 (p<0.05),芽殖杆菌属(Gemmobacter)、硝酸盐还原污物球菌属 (Defluviimonas)与绒毛长度、宽度和肌层厚度均呈显著负相关性 (p<0.05)。转换颗粒饲料后,肠道内病原菌属的相对丰度上升,建议不宜在幼鱼早期投喂过多的颗粒饲料,且应加强换料期间的水质监管和病原菌防控。

    Abstract:

    In order to explore the intestinal development and microbial communities of Elentheronema tetradactylum juvenile, and to provide a scientific basis for its healthy breeding and feeding management, we investigated the growth performance, intestinal structure and gut microbiota of the juveniles at different days of age (37, 44, 58, 72, 86, 114). The results show that there were significant differences in the growth performance among different days of age (p<0.05). As the age of the juveniles increased, the length and width of the villi, the thickness of the myenteric layer, and the number of cup-shaped cells increased gradually and became more completed. On Day 58, the morphological structure of the intestinal tract was relatively well-developed. A total of 40 microbial phylum and 521 microbial genus were identified in the intestine. Proteobacteria, Actinobacteria and Firmicutes were the dominant phylum, which accounted for 78.69% of the total intestinal microbiota. On genus level, there were significant differences in the relative abundances of microbial genus at different days of age (p<0.05), with large variations in abundance. Pearson correlation analysis reveals that the villus length, width, and muscular thickness were negatively correlated with Gemmobacter and Defluviimonas (p<0.05), but positively correlated with Burkholderia, Vibrio and Ralstonia (p<0.05). The relative abundances of pathogenic genus (Ralstonia, Vibrio) exhibited an increase after being fed with the pellet feed. It is not advisable to feed E. tetradactylum juvenile with an excessive amount of pellet feed at early stage, and it should enhance the water quality monitoring and pathogen prevention during the feed transition period.

  • 长臀(Cranoglanis bouderius) 隶属鲇形目、长臀科、长臀属,是我国珠江水系特有的名贵经济鱼类,具有重要的开发利用价值[1],在我国被列为易危对象[2]。本研究旨在建立一套适于长臀的扩增酶切片段长度多态性(amplified fragment length polymophism,AFLP)技术体系,为进行长臀的遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建、分子标记等研究奠定基础。

    AFLP是ZABEAU等[3]于1993年建立的一种DNA分子标记技术。AFLP技术具有所需DNA量少,可以研究未知序列的DNA,实验结果稳定可靠,重复性强,呈典型的孟德尔遗传的特点[4]。在分子生物学及动、植物育种等领域具有广泛的应用前景,尤其是构建动、植物DNA指纹图谱具有重要价值。

    实验材料长臀取自广东罗非鱼良种场,共30尾。实验鱼活体带回实验室,取全血,柠檬酸-葡萄糖抗凝剂(acid-citrate-dextrose,ACD)抗凝、-20℃保存直到DNA提取。所有引物及接头均购自上海申能博采生物工程公司,经聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE胶)纯化。所用试剂均为国产分析纯试剂。

    采用苯酚-氯仿法和试剂盒分别从血液中提取基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳,紫外分光光度仪检测其浓度和纯度,并调整DNA浓度至50 ng ·μL-1,4℃保存备用。

    采用限制性内切酶进行酶切时,在20 μL酶切体系中分别加入50、100、200、300、400 ng基因组DNA,比较不同量DNA的酶切效果。

    酶切和连接在同一反应中,总体积为20 μL,其中包括: 10×buffer 2 μL,Pst I 20 U,T4连接酶2U,ATP 1 mmol·L-1,BSA 2 μL,Pst I接头2 μL,基因组DNA,加水至20 μL;37℃保温1 h,20℃保温1 h,5个循环,70℃15 min灭活酶。AFLP-PCR反应25 μL反应体系中含10×buffer 2.5 μL,Mg2+ 1.5 mmol·L-1,引物2 pmol,模板10 ng,Taq DNA聚合酶1 U,dNTP 200 μmol·L-1,反应条件为94℃、1 min,56℃、1 min,72℃、1.5 min,35个循环后72℃、10 min。

    采用EcoR I/Mse IPst I/Taq I 2种限制性内切酶组合进行酶切。酶切和连接分2步进行。酶切反应总体积为20 μL,其中包括: 10×buffer 2 μL,BSA 2 μL,基因组DNA,2种限制性内切酶,加水至20 μL;连接反应总体积为20 μL,其中包括10×buffer 2 μL,接头2 μL,酶切产物10 μL,T4连接酶2 U,加水至20 μL。E/M酶切反应条件是37℃、3 h,65℃、15 min灭活酶;连接反应条件是37℃、10 h,70℃、10 min灭活酶,-20℃保存。P/T酶切反应条件是65℃、2 h,加Pst I,37℃、2 h,80℃、20 min灭活酶;连接反应条件是22℃、5 h,70℃、10 min灭活酶,-20℃存。

    直接取连接产物1 μL预扩增,总体积20 μL,包括: 10×buffer 2 μL,dNTPs 0.4 μL,引物各0.25 μL,Taq酶0.2 μL,Mg2+ 1.5 mmol·L-1,加水至20 μL。混匀后,按如下PCR条件扩增,95℃、3 min,56℃、1 min,72℃、1.5 min,共25个循环。预扩增结束后,产物-20℃保存备用。

    将预扩增产物稀释10倍、20倍、50倍、100倍进行选择性扩增,取1 μL稀释后的预扩增混合液,加入19 μL如下反应液,dNTPs 0.4 μL;引物各0.4 μL;Taq酶0.2 μL;buffer 2 μL;Mg2+ 1.5 mmol·L-1;加水至20 μL。混匀后,按如下PCR条件扩增,95℃、3 min;94℃、1 min;65℃、30 s;72℃、1 min;每个循环退火温度降0.7℃,共12个循环;然后改为94℃、1 min;56℃、30 s;72℃、1 min,共23个循环。产物-20℃保存备用。

    用8%的聚丙烯酰胺凝胶结合银染法检测。电泳采用300 V恒压电泳2.5 h;银染按许绍斌等[5]使用的快速银染法进行。

    采用苯酚-氯仿抽提法和试剂盒法提取基因组DNA。从电泳结果看,所提基因组DNA主带清晰,DNA片段在23 kb以上,没有降解(图 1),基因组DNA的光密度值OD260/OD280比值在1.8左右,说明DNA纯度高,蛋白质含量极少,完全能满足AFLP分析对DNA的要求。苯酚-氯仿抽提法提取的DNA浓度差异大,产量不稳定;相比之下试剂盒法提取DNA产量稳定,浓度大,更适合用于AFLP标记分析,但是AFLP标记分析所需DNA量极少(100 ng),从减少费用考虑,苯酚-氯仿抽提法制取DNA用于AFLP标记分析也是完全可行的。

    图  1  基因组DNA电泳图
    a. 苯酚-氯仿抽提法;b. 试剂盒法
    Fig. 1  The electrophore tic pattern of genomic DNA
    a. Phenol-Chlorofrom exetracting method; b. method of kid

    AFLP分析一般使用双酶切,即采用稀有碱基切点酶和常见碱基切点酶同时进行消化。酶切时,在20 μL酶切体系中设计基因组DNA用量梯度,比较不同量DNA的酶切效果,从电泳图谱上看,不同量DNA的酶切效果基本一致(图 2)。本试验比较了2种双酶切组合(EcoR I/Mse IPst I/Taq I)在长臀中的酶切效果,EcoR I/Mse I组合基因组切点数量多,酶切片段较小,主带消失,呈梯度模糊状,片段大小在50~1 200 bp之间。Pst I/Taq I组合酶切完全,片段大小在100~1 200 bp之间,2种酶切都符合AFLP对酶切片段的要求。此外,实验还进行了Pst I单酶切试验,但酶切片段较大。

    图  2  DNA用量梯度EcoR I/Mse I酶切电泳图
    M. 100bp DNA标记(以下marker相同);1. 50 ng基因组DNA;2. 100 ng基因组DNA;3. 200 ng基因组DNA;4. 300 ng基因组DNA;5. 400 ng基因组DNA
    Fig. 2  The electrophore tic pattern of DNA gradient reaction by EcoR I/Mse I digestion
    M. 100bp DNA marker (The following maker is same); 1. 50 ng gentics DNA; 2. 100 ng gentics DNA; 3. 200 ng gentics DNA; 4. 300 ng gentics DNA; 5. 400 ng gentics DNA

    连接效率的高低主要取决于T4-DNA连接酶的用量、连接温度及连接时间。连接反应中,T4-DNA连接酶的用量以2 U为宜,连接温度一般为37℃,但也需要根据实验调整,如Pst I/Taq I酶切后,使用4 U的T4连接酶,3 h即能完成连接反应。而且,连接温度最好用22℃,过高的连接温度会延长连接时间。

    AFLP分析中,双酶切使用2次扩增反应,而单酶切只需要一次扩增。在实验中双酶切时,将预扩增产物进行梯度稀释,其选择性扩增产物差别很小(图 3),因此,在实验过程中,一般稀释20倍就足以进行大量选扩。实验中Pst I单酶切长臀的电泳图谱显示单酶切的扩增片段大、数量少,且集中在凝胶的上部,因此,不适用于长臀(图 4)。在进行长臀AFLP分析时,双酶切EcoR I/Mse IPst I/Taq I均能得到清晰的电泳图谱(图 5图 6)。Pst I/Taq I双酶切时,引物P+ATT/T+ACA在珠江长臀中共扩增出44条带,其中8条具有多态性,多态性检测效率为18.2%,EcoR I/Mse I双酶切时,引物E+AAG/M+CTG在珠江长臀中共扩增出64条带,其中22条具有多态性,多态性检测效率为34.3%。P+ATT/T+ACAE+AAG/M+CTG的指纹图谱扩增带清晰可见,扩增信号强度基本一致,说明AFLP指纹图谱质量很高,从图中还可以看出,片段大小在400 bp以上多态性较丰富,片段在400 bp以下多态性较差。相对来说,Pst I/Taq I酶切扩增带信号强度和分布要好于EcoR I/Mse I双酶切,但EcoR I/Mse I双酶切的扩增条带数和多态性检出率要好。

    图  3  预扩增产物梯度稀释选扩电泳图谱
    1. 预扩增产物稀释10倍;2. 预扩增产物稀释20倍;3. 预扩增产物稀释50倍;4. 预扩增产物稀释100倍
    Fig. 3  The electrophore tic pattern of gradient amplification reaction after preamplification
    1. 10 times diluting of production of preamplification; 2. 20 times diluting of production of preamplification; 3. 50 times diluting of production of preamplification; 4. 100 times diluting of production of preamplification
    图  4  长臀基因组DNA的Pst I单酶切电泳图谱
    Fig. 4  AFLP pattern of Pst I digestion of genomic DNA from C.bouderius
    图  5  长臀基因组DNA的P+ATT/T+ACA引物扩增图谱
    Fig. 5  AFLP pattern of the primer P+ATT/T+ACA of genomic DNA from C.bouderius
    图  6  长臀基因组DNA的E+AAG/M+CTG引物扩增图谱
    Fig. 6  AFLP pattern of the primer E+AAG/M+CTG of genomic DNA from C.bouderius

    自1993年以来,已有许多研究者开展了AF LP技术及体系研究,但对不同物种,其AFLP关键技术参数不同,因而使用的体系不尽相同[6-10]。AFLP对DNA的质量要求较高,因而提取高纯度无污染的DNA乃是实验成功的先决条件。被污染或降解的DNA不能扩增出条带或条带可重复性差。有研究者认为,如DNA样品中含有少量RNA或蛋白质成分,不会影响扩增;但是,如其中含多糖或多酚成分,则会严重影响DNA聚合酶的活性,干扰引物与模板的结合,导致扩增失败[4]。本试验比较了苯酚-氯仿抽提法和试剂盒法提取基因组DNA。2种方法所提基因组DNA的主带清晰,DNA片段在23 kb以上,几乎没有降解,完全能满足AFLP分析对DNA的要求,但苯酚-氯仿抽提法提取的DNA浓度差异大,产量不稳定;已有研究表明,个体DNA的浓度一致性对AFLP有重要影响;模板的浓度差异过大,会导致假阳性的比例大增[11],因此,在AFLP分析中,试剂盒法更适于提取DNA。

    关于酶切的内切酶酶切种类和方式。在长臀的AFLP分析体系中,本试验尝试了3种酶切方式,EcoR I/Mse I双酶切、Pst I/Taq I双酶切、Pst I单酶切。结果表明,2种双酶切组合均能得到理想的结果,而单酶切的酶切片段过大、数量少,且相对集中,因此,在长臀AFLP分析体系中是不宜采用单酶切方式的。

    扩增产物的多少主要取决于待测样品基因组大小和引物3′末端选择性碱基的数目。选择性碱基数一般不超过3个,大于108 bp的基因组DNA可选用3个选择性碱基,105~106 bp的基因组DNA可选用2个选择性碱基,在此范围内每增加一个碱基可减少3/4的扩增带谱;而且随着选择性碱基数目的增加,引物与模板的错配频率也相应增加,扩增特异性下降。当选择性碱基数增加到4个时,有假带现象产生[12],如果选择性碱基数过少,扩增产物太多,则扩增条带过密不易分辨。此外,选择性碱基的组成也会影响扩增片段的数量。一般而言,选择性碱基中C、G含量越高,扩增出的产物数目越少;对富含A、T的生物体基因组来说,用富含A、T选择性碱基的引物能获得更多的扩增片段[12]。在本试验中,由于长臀基因组大小未知,选择“3+3”组合的引物扩增,扩增条带数在50条左右,对长臀的AFLP分析是适宜的。

    除了以上讨论的因素外,还有许多因素会影响到试验结果。例如在酶切和连接过程中,酶切一定要彻底,连接要充分,最好将酶切与连接在PCR仪上进行,这样能够精确保温,取得满意结果;在胶的制备中,洗板要干净,涂板一定要均匀,否则胶会在洗板过程中脱落,并且制板过程中还要避免出现气泡,因为胶中的气泡会影响样品的泳动,使条带成锯齿形,影响观察;在染色过程中,AgNO3一定要充分混匀,否则胶板会出现斑点,影响照相;染色时间应掌握在10 min左右,过长会出现“白板”或板的背景过深;显影液的温度往往影响显影的效果,一般4℃左右即可,过低会使胶板显带时间延长,背景变深[13]等。

    (1) 长臀AFLP指纹分析时,基因组DNA提取宜采用试剂盒法,如考虑到实验成本,采用苯酚-氯仿抽提法也是可行的。

    (2) 连接反应中,T4-DNA连接酶的用量以2 U为宜,连接温度一般为37℃。

    (3) 酶切反应应该使用双酶切,EcoR I/Mse I双酶切、Pst I/Taq I双酶切都可行;在实验过程中,一般预扩增产物稀释20倍就足以进行大量选扩;选扩首先使用Touch-down PCR,进行12个循环后,再采用常规PCR方法进行23个循环。

    (4) 引物3′末端选择性碱基的数目,选择“3+3”组合对长臀的AFLP分析是适宜的。

    本试验旨在建立AFLP用于长臀指纹分析的方法体系,因此,对其分析过程中DNA提取、单、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等关键因素进行了优化,建立了长臀稳定的AFLP分析体系,为进一步进行分子标记研究如遗传多样性、遗传相似性奠定了基础。

  • 图  1   不同日龄四指马鲅肠道组织结构变化

    Figure  1.   Intestinal tissue structure of E. tetradactylum at different days of age

    图  2   不同日龄四指马鲅肠道内细菌韦恩图分析

    注:每个椭圆代表一个分组,不同椭圆交集部分为不同分组间的共有物种。其中A、B、C、D、E、F分别表示37、44、58、72、86、114日龄的幼鱼。

    Figure  2.   VENN analysis of intestinal microbiota in E. tetradactylum at different days of age

    Note: Each ellipse represents a member group, and the intersection of different ellipses represents the common species between different groups. A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.

    图  3   不同日龄四指马鲅肠道内细菌门类相对丰度

    注:A、B、C、D、E、F分别表示37、44、58、72、86、114日龄的幼鱼。

    Figure  3.   Relative abundances of microbes in E. tetradactylum at different days of age on phylum level

    Note: A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.

    图  4   不同日龄四指马鲅肠道内细菌属水平相对丰度

    注:A、B、C、D、E、F分别表示37、44、58、72、86、114日龄的幼鱼。

    Figure  4.   Relative abundances of microbes in E. tradactylum at different days of age on genus level

    Note: A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.

    图  5   LEfSe分析物种组成图 (LDA Score>4)

    注:A、B、C、D、E、F 分别表示37、44、58、72、86、114 日龄的幼鱼。

    Figure  5.   LEfSe analysis of species compsition (LDA socre>4)

    Note: A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.

    图  6   物种分类学分支图

    注:Cladogram由内到外辐射的圆圈分别对应界、门、纲、目、科、属不同的分类层级,层级间的连线代表所属关系。每个圆圈节点代表1个物种,黄色节点代表分组间差异不显著,差异物种跟随组进行着色。有颜色的扇形区域标注了特征微生物的下属分类区间。A、B、C、D、E、F 分别表示37、44、58、72、86、114 日龄的幼鱼。

    Figure  6.   Cladogram of species

    Note: Cladogram consists of circles radiating from the inside out, each corresponding to different levels of classification such as kingdom, phylum, class, order, family, and genus. The lines connecting the circles represent their relationships. Each circle node represents a species, with yellow nodes indicating insignificant differences between groups, while significantly different species are colored according to their group. Colored sector regions represent the subclassification intervals of characteristic microorganisms.A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.

    图  7   相关性分析热图

    注:色块的颜色表示相关系数,其中红色代表正相关,蓝色代表负相关;颜色深浅代表相关系数大小 (*. p<0.05)。

    Figure  7.   Heat map of correlation analysis

    Note: The colors of the color blocks represent the correlation coefficients. Red represents positive correlation and blue represents negative correlation; the color shades represent the size of the correlation coefficients (*. p<0.05).

    表  1   不同日龄四指马鲅生长性能

    Table  1   Growth performance of E. tetradactylum at different days of age

    指标
    Indicator
    组别 Group
    A B C D E F
    体长 Body length/cm 2.37±0.25 3.47±0.21 6.20±.032 7.00±0.30 10.08±0.36 13.20±1.19
    体质量 Body mass/g 0.24±0.02 0.71±0.07 1.60±0.34 3.46±0.65 8.62±1.21 44.72±11.37
    特定生长率SGR/(%·d−1) 8.58±0.23b 15.36±1.73a 5.72±1.45c 5.38±1.62c 6.43±1.16bc 6.52±2.02bc
    平均日增质量ADG/(g·d−1) 0.01±0.00a 0.07±0.01a 0.06±0.02a 0.13±0.05a 0.52±0.29b 1.15±0.22a
    肥满度CF/(g·cm−3) 2.88±0.95a 2.47±0.32a 0.85±0.03c 1.44±0.17b 1.67±0.09b 1.77±0.42b
    注:同行中不同小写字母间存在显著性差异 (p<0.05)。A、B、C、D、E、F分别表示37、44、58、72、86、114日龄的幼鱼。 Note: Values with different lowercase letters within the same row are significantly different (p<0.05). A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.
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    表  2   不同日龄四指马鲅肠道组织结构变化

    Table  2   Intestinal tissue structure of E. tetradactylum at different days of age

    指标
    Indicator
    组别 Group
    B C D E F
    绒毛长度 Villus length/μm 91.69±8.42d 124.33±22.00c 168.11±42.35b 189.60±25.91b 312.78±45.92a
    绒毛宽度 Villus width/μm 19.39±4.39c 20.14±3.29c 28.40±4.33b 38.28±8.84a 42.76±10.51a
    肌层厚度 Muscular thickness/μm 12.31±1.57d 16.57±6.22bc 20.03±5.86c 31.58±5.07b 56.72±15.13a
    注:同行中不同小写字母间存在显著性差异 (p<0.05)。B、C、D、E、F分别表示44、58、72、86、114日龄的幼鱼。 Note: Values with different lowercase letters within the same row are significantly different (p<0.05). B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.
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    表  3   不同日龄四指马鲅鱼肠道菌群Alpha多样性统计

    Table  3   Alpha diversity of intestinal microbiota in E. tetradactylum at different days of age

    指标
    Indicator
    组别 Group
    A B C D E F
    Chao 1 指数 Chao 1 index 1 019.70±247.37 919.92±24.98 795.38±167.93 818.00±32.87 739.96±231.98 805.94±80.17
    ACE 指数 ACE index 986.88±211.51 938.39±29.54 810.60±163.07 817.51±20.64 774.20±258.03 866.18±93.10
    香农指数Shannon index 4.65±0.01a 4.21±0.08ab 4.72±0.61a 3.86±0.47ab 3.16±1.58b 4.52±0.37ab
    辛普森指数Simpson index 0.97±0.01 0.95±0.01 0.96±0.02 0.93±0.04 0.94±0.02 0.97±0.02
    注:同行中不同小写字母间存在显著性差异 (p<0.05)。A、B、C、D、E、F分别表示37、44、58、72、86、114日龄的幼鱼。 Note: Values with different lowercase letters within the same row are significantly different (p<0.05). A, B, C, D, E and F represent the E. tetradactylum juveniles of 37, 44, 58, 72, 86 and 114 days of age, respectively.
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出版历程
  • 收稿日期:  2024-08-18
  • 修回日期:  2024-10-23
  • 录用日期:  2024-11-21
  • 网络出版日期:  2024-11-29
  • 刊出日期:  2025-02-04

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