Early pigmented cell development and body color change of Platax teira
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摘要:
尖翅燕鱼 (Platax teira) 具有独特的色素模式，通过体视显微镜和倒置荧光显微镜对尖翅燕鱼的胚后发育过程进行连续观察，记录了不同发育阶段的形态特征、体色变化以及色素细胞类型及分布，并绘制了早期发育生长曲线。结果显示，1—24日龄尖翅燕鱼生长速度较平缓，从26日龄开始进入快速生长期，且不同胚后发育阶段鱼体体表呈现明显的颜色差异。特别是14日龄时，红色素细胞、黄色素细胞发育明显，细胞体积增大；28日龄时，稚鱼腹鳍、臀鳍、背鳍色素全覆盖，以红色素细胞为主，躯体表面黑色素与红色素细胞交织分布。21日龄时，第1条明显的黑色条带从眼部穿过；30日龄时，稚鱼腹部出现白点，鳃盖后出现第2条黑色条纹；32日龄时，第2条黑带明显，开始出现轻微应激反应，鳃盖以及下方开始出现虹彩细胞；46 日龄幼鱼在头部、躯干、尾部各有1条黑色条带，背鳍、臀鳍、腹鳍颜色变黑，发育完成，体色与成鱼相似，应激后体色变黑，黑色素细胞呈分散状交织分布，几乎掩盖黄色素和红色素细胞。研究结果为进一步研究尖翅燕鱼的体色调控机制提供了基础数据。
Abstract:Platax teira has a particular pigmentation pattern. We used stereo microscope and inverted fluorescence microscope to continuously observe its post-embryonic development, as well as the morphology, body color changes, pigment cell types and distribution characteristics at different developmental stages, then we obtained its early developmental growth curve. The results show that the growth rate of P. teira of 1–24 days after hatching (DAH) was relatively slow, but having reached a rapid growth period since 26 DAH. In addition, the body surface of P. teira showed obvious color differences at different post-embryonic development stages. On 14 DAH, the red and yellow pigment cells developed significantly and became larger. On 28 DAH, the ventral fins, anal fins and dorsal fins were fully covered with pigments, mainly red pigments cells. The melanocytes and red pigment cells were intertwined on the body surface. On 21 DAH, the first obvious black stripe passed through the eye. On 30 DAH, white spots appeared on the abdomen, and a second black stripe appeared behind the gill cover. On 32 DAH, the second black stripe was obvious, and a slight stress reaction began to appear. Iridescent cells began to appear on the gill cover and below. On 46 DAH, a black stripe appeared on the head, trunk and tail, the dorsal, anal and pelvic fins turning black. The development of juvenile was complete and the body color was similar to that of adult fish. After the stress, the body color of juvenile turned black and the melanocytes were disperse and interwoven, almost covering up the yellow and red melanocytes. The results provide basic data for further studies on the body color regulation mechanism of P. teira.
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Keywords:
- Platax teira /
- Morphological observation /
- Pigment development /
- Body color
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近年来，水产养殖过程中各种细菌、霉菌性流行病普遍发生，消毒剂也因此在水产养殖过程中被频繁使用[1-3]。消毒剂除了可杀灭和抑制病原外，还具有改良水质、为水生动物提供良好的生长和生活环境、提高经济效益的作用。高锰酸钾、聚维酮碘、二溴海因是养殖过程中的3种常见消毒剂。研究发现，聚维酮碘可以抑制养殖水体沉积物中氨氧化菌属的丰度[4]，高锰酸钾可杀灭水体中的细菌[5]，二溴海因和聚维酮碘对鱼类柱状黄杆菌 (Flavobacterium columnare) 有一定的抑菌效果[6]，聚维酮碘对养殖水体中的细菌具有杀菌效果[7]。但用量超过药物安全浓度 (Safe concentration, SC) 会导致水生动物出现中毒甚至死亡，有研究显示在使用消毒剂对水体消毒时，会对褶皱臂尾轮虫 (Brachionus plicatilis)[8]、卤虫 (Artemia salina)[9]产生不利影响。
原生动物纤毛虫是海洋生态系统的重要组成部分，参与营养物质的转化并维持生态系统的稳定性，对生态系统的物质循环和能量流动发挥着至关重要的作用[10-13]。纤毛虫分布范围广、易培养，通常被应用于生态学研究中，如分类学、微生物生态学、生态毒理学等，是一种重要的模式生物[14-17]。盐蚕豆虫 (Fabrea salina) 隶属于纤毛虫门、多膜纲、异毛目、蚕豆虫属，其生长周期短、繁殖速度快，能够在短时间内大量培养，且适应性强，在多种生境下均可生长繁殖，可作为海水经济动物的开口饵料。盐蚕豆虫细胞内的蛋白质和脂肪含量丰富 (质量分数分别为56.66%和36.66%)，且其体内含有油酸、亚油酸和亚麻酸等脂肪酸。研究发现，使用盐蚕豆虫投喂红鲷鱼 (Lutjanus campechanus) 能明显提高其成活率 (提高了2.11%)[18]。目前消毒药物对盐蚕豆虫毒性效应的研究尚少，因此，本研究以开口饵料盐蚕豆虫为受试生物，探究了高锰酸钾、二溴海因、聚维酮碘3种常见消毒药物对其产生的毒性效应和种群动力学影响，以及对盐蚕豆虫进行水体消毒时适宜的药物及剂量。
1. 材料与方法
1.1 纤毛虫种群维持及培养
本研究选用的盐蚕豆虫来自天津农学院鱼类生理学实验室，试验前将盐蚕豆虫置于经0.22 μm孔径滤膜抽滤的盐度为55‰ 的人工海水中进行培养，在恒温光照培养箱中进行扩大培养，温度为28 ℃，光照强度为25 μmol·m−2·s−1，光暗周期为14 h∶10 h，使用杜氏盐藻 (Dunaliella salina) 进行投喂，当其密度达到4×104 个∙L−1时开展试验。
1.2 测定急性毒性试验方法
采用水生生物毒性试验方法[19]。根据预试验结果，按照等对数间距法设置6个处理组，包括空白对照组和5个药物浓度梯度组 (表1)。每个药物浓度组设置3个重复，药物均为现配现用，配置时使用超声波振荡10 min加速溶解。试验在6孔细胞培养板中进行，最终试验体积为3 mL，用毛细玻璃管吸取盐蚕豆虫加入配好药物的6孔细胞培养板中，接种密度为10 个∙mL−1，急性毒性试验期间不喂食，每隔 24 h在解剖镜下观察计数盐蚕豆虫的成活数目，每个浓度组3 次重复，计数重复 2 次，计数误差不超过15%。分析结果通过概率单位法[20]计算确定半数致死浓度 (Lethal concentration 50, LC50)。
表 1 3种消毒药物急性毒性试验质量浓度Table 1. Mass concentration of three disinfectant drugs in acute toxicity test药物名称
Drug name质量浓度
Mass concentration/(mg∙L−1)二溴海因
Dibromo hydantoin0 0.50 0.71 1.00 1.41 2.00 聚维酮碘
Povidone iodine0 14.45 16.60 19.05 21.90 25.00 高锰酸钾
Potassium permanganate0 0.52 0.63 0.76 0.90 1.10 1.3 测定种群动力学试验方法
在6孔培养板中研究盐蚕豆虫的种群生长动态，培养基和培养条件与 LC50 测定相同。根据急性毒性试验结果，每种药物的质量浓度设置见表2。每天定时投喂杜氏盐藻 (6×109 个∙L−1) 作为食物。每个试验组设 3 个平行，每隔 24 h测定盐蚕豆虫的种群密度1次，取盐蚕豆虫培养液0.1 mL用浮游动物计数框 (0.1 mL) 计数，使用 2% (w) 的戊二醛固定液对盐蚕豆虫进行固定，每孔重复计数2次，2次计数误差不得超过15%[21-22]。由于二溴海因和聚维酮碘易挥发，故试验过程中每 24 h 用管口细度小于虫子体积的吸管，从6孔板每孔吸出一半测试液[23-25]，并重新配置二溴海因溶液与聚维酮碘溶液和海水加至原测试液量，以保证二溴海因和聚维酮碘的有效性。
表 2 3种消毒药物慢性毒性试验质量浓度Table 2. Mass concentration of three disinfectant drugs in chronic toxicity test药物名称
Drug name质量浓度
Mass concentration/(mg∙L−1)二溴海因
Dibromo
hydantoin0 0.015 0 0.018 7 0.024 9 0.037 4 0.074 8 聚维酮碘
Povidone iodine0 0.392 0 0.490 5 0.654 0 0.981 0 1.962 0 高锰酸钾
Potassium permanganate0 0.018 5 0.023 1 0.030 8 0.046 25 0.092 5 1.4 数据分析与处理
急性毒性试验的LC50采用概率单位法[20]，通过作图后分析计数得出。药物对盐蚕豆虫的 SC [8] 、种群生长率(r)[26]、世代时间(G)与种群生长率之间的关系[27]计算公式为：
$$ \mathrm{S}\mathrm{C}{\mathrm{=}}L_{48}\times 0.3/{\left(\frac{L_{24}}{L_{48}}\right)}^{2} $$ (1) $$ r{\mathrm{=}}\frac{\mathrm{l}\mathrm{n}\left({C}_{t}\right){\text{−}}\mathrm{l}\mathrm{n}\left({C}_{0}\right)}{t} $$ (2) $$ G{\mathrm{=}}\frac{\mathrm{l}\mathrm{n}2}{r} $$ (3) 式中：L48和L24分别为48和24 h的LC50；C0和Ct (个∙L−1) 分别为初始和t (d) 时纤毛虫的丰度。
所有数据均使用Origin 2021 软件作图，使用SPSS 24.0软件进行单因素方差分析 (One-way ANOVA)。
2. 结果
2.1 3种药物对盐蚕豆虫的48 h LC50
聚维酮碘对盐蚕豆虫的急性毒性试验结果如图1-a所示。根据概率单位分析法求出聚维酮碘对盐蚕豆虫的死亡率概率单位与所加药物质量浓度对数的线性回归方程为y=5.147 3x−10.32 ($r^2 $=0.937 4)。根据方程计算得出聚维酮碘对盐蚕豆虫的48 h LC50为19.620 mg∙L−1。
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图 1 3 种药物浓度对数与概率单位回归分析Figure 1. Regression analysis of logarithmic and probit for three drugs高锰酸钾对盐蚕豆虫的急性毒性试验结果如图1-b所示。根据概率单位分析法求出高锰酸钾对盐蚕豆虫的死亡率概率单位与所加药物质量浓度对数的线性回归方程为y=2.608 1x−2.660 6 ($r^2 $=0.996)。根据方程计算得出高锰酸钾对盐蚕豆虫的48 h LC50为0.925 mg∙L−1。
二溴海因对盐蚕豆虫的急性毒性试验结果如图1-c所示。根据概率单位分析法求出二溴海因对盐蚕豆虫的死亡率概率单位与所加药物质量浓度对数的线性回归方程为y=1.620 7x−5.724 3 ($r^2 $=0.986 9)。根据方程计算得出二溴海因对盐蚕豆虫的48 h LC50为0.748 mg∙L−1。
2.2 二溴海因对盐蚕豆虫的种群生长的影响
2.2.1 二溴海因对盐蚕豆虫生长曲线和最大种群密度的影响
不同二溴海因质量浓度组的盐蚕豆虫在经过24 h的停滞期后，均进入指数生长期，各处理组在第120小时达到最大种群密度 (图2)。随着二溴海因浓度升高，盐蚕豆虫的最大种群密度逐渐降低。One-way ANOVA检验结果表明 (图3)，0.015 mg∙L−1组与对照组的最大种群密度差异不显著(p>0.05)，其余处理组的最大种群生长率与对照组相比均存在极显著性差异 (p<0.01)。说明二溴海因对盐蚕豆虫种群生长起到了明显的抑制作用，并且随着浓度升高抑制作用越明显，其中0.074 8 mg∙L−1组的抑制作用最明显，最大种群密度为 (1.69±0.077)×105 个∙L−1，与对照组 [(2.19±0.056)×105 个∙L−1] 相比降低了23%。
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图 2 二溴海因对盐蚕豆虫种群生长曲线的影响Figure 2. Effect of dibromo hydantoin on growth curve of F. salina population![]()
图 3 二溴海因对盐蚕豆虫最大种群密度的影响注： **. 与对照组相比差异极显著(p<0.01)。Figure 3. Effect of dibromo hydantoin on maximum population density of F. salinaNote: **. There are very significant differences compared with the control group (p<0.01).2.2.2 二溴海因对盐蚕豆虫种群生长率和世代时间的影响
如图4所示，随着二溴海因质量浓度升高，种群生长率呈下降趋势。One-way ANOVA检验结果表明，0.015 0 mg∙L−1组与对照组的种群生长率差异不显著 (p>0.05)，其余处理组的种群生长率与对照组相比均存在显著性差异 (p<0.05)。其中0.074 8 mg∙L−1组下降最明显，种群生长率为 (0.57±0.009) d−1，比对照组下降了8%。
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图 4 二溴海因对盐蚕豆虫的种群生长率和世代时间的影响注：相同字母为组间无显著性差异 (p>0.05)，不同字母为组间有显著性差异 (p<0.05)，生长率用小写字母表示，世代时间用大写字母表示。Figure 4. Effect of dibromo hydantoin on population growth rate and generation time of F. salinaNote: The same letters represent insignificant differences among the groups (p>0.05), while different letters represent significant differences among the groups (p<0.05). Growth rates are represented by lowercase letters, while generation time are represented by uppercase letters.随着二溴海因质量浓度的升高，世代时间逐渐变长，One-way ANOVA检验结果表明，0.015 0 mg∙L−1组与对照组的世代时间差异不显著 (p>0.05)，其余处理组的世代时间与对照组相比均存在显著性差异 (p<0.05)。其中0.074 8 mg∙L−1处理组的世代时间延长最为明显，世代时间为 (1.23±0.2) d，比对照组 [(1.11±0.024) d] 延长了11%。
2.3 聚维酮碘对盐蚕豆虫的种群生长的影响
2.3.1 聚维酮碘对盐蚕豆虫生长曲线和最大种群密度的影响
不同聚维酮碘质量浓度试验组的盐蚕豆虫，在经过24 h的停滞期后，均进入指数生长期。对照组、0.392 mg∙L−1、0.490 5 mg∙L−1和0.654 mg∙L−1组的种群密度在第120小时达到峰值，0.981 mg∙L−1和1.962 mg∙L−1组在第144 小时达到峰值。与对照组相比，聚维酮碘质量浓度为0.392 mg∙L−1试验组促进了纤毛虫的生长，最大种群密度增加，聚维酮碘质量浓度为0.981 mg∙L−1和1.962 mg∙L−1组，聚维酮碘对盐蚕豆虫的生长曲线产生了明显的抑制作用、指数生长期变长 (图5)，其中1.962 mg∙L−1组抑制作用最明显，与对照组相比下降了25%。
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图 5 聚维酮碘对盐蚕豆虫种群生长曲线的影响Figure 5. Effect of povidone iodine on growth curve of F. salina populationOne-way ANOVA检验结果表明 (图6)，聚维酮碘质量浓度为0.654 mg∙L−1、0.981 mg∙L−1和1.962 mg∙L−1试验组与对照组盐蚕豆虫的最大种群密度均存在极显著性差异 (p<0.01)，聚维酮碘质量浓度为0.392 mg∙L−1和0.490 5 mg∙L−1试验组与对照组盐蚕豆虫的最大种群密度均差异不显著 (p>0.05)。
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图 6 聚维酮碘对盐蚕豆虫最大种群密度的影响注： **. 与对照组相比差异极显著 (p<0.01)。Figure 6. Effect of povidone iodine on maximum population density of F. salinaNote: **. There are very significant differences compared with the control group (p<0.01).2.3.2 聚维酮碘对盐蚕豆虫种群生长率和世代时间的影响
由图7可见，聚维酮碘对盐蚕豆虫种群生长率呈低浓度促进，高浓度抑制作用。One-way ANOVA检验结果表明，聚维酮碘质量浓度高于0.654 mg∙L−1的试验组 (0.654、0.981和1.962 mg∙L−1) 和对照组盐蚕豆虫的种群生长率存在显著性差异 (p<0.05)。质量浓度低于0.654 mg∙L−1的试验组(0、0.392 0、0.490 5 mg∙L−1) 与对照组盐蚕豆虫的种群生长率差异均不显著 (p>0.05)。其中1.962 mg∙L−1组下降最明显，种群生长率为 (0.57±0.005) d−1，比对照组下降了9%。
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图 7 聚维酮碘对盐蚕豆虫的种群生长率和世代时间的影响注：相同字母为组间无显著性差异 (p>0.05)，不同字母为组间有显著性差异 (p<0.05)，生长率用小写字母表示，世代时间用大写字母表示。Figure 7. Effect of povidone iodine on population growth rate and generation time of F. salinaNote: The same letters represent insignificant differences among the groups (p>0.05), while different letters represent significant differences among the groups (p<0.05). Growth rates are represented by lowercase letters, while generation time are represented by uppercase letters.盐蚕豆虫世代时间随浓度变化先缩短后变长，聚维酮碘质量浓度高于0.654 mg∙L−1的试验组 (0.654、0.981和1.962 mg∙L−1) 和对照组盐蚕豆虫的世代时间存在显著性差异 (p<0.05)。其中1.962 mg∙L−1组的世代时间为 (1.22±0.011) d，延长最为明显，比对照组 [(1.10±0.003) d] 延长了10%。
2.4 高锰酸钾对盐蚕豆虫的种群生长的影响
2.4.1 高锰酸钾对盐蚕豆虫生长曲线和最大种群密度的影响
不同高锰酸钾浓度下盐蚕豆虫经过24 h的停滞期后，均进入指数生长期。各处理组在第120 小时均达到最大种群密度，其中
0.02310 mg∙L−1组的抑制作用最明显，最大种群密度为 (1.13±0.22)×105 个∙L−1，与对照组相比下降了47.8%。对照组稳定期持续4 d，其他试验组均在第120 小时达到最大种群密度后就开始进入衰退期 (图8)。One-way ANOVA检验结果表明，对照组与其他试验组盐蚕豆虫的最大种群密度均存在极显著性差异 (p<0.01，图9)。![]()
图 8 高锰酸钾对盐蚕豆虫种群生长曲线的影响Figure 8. Effect of potassium permanganate on growth curve of F. salina population![]()
图 9 高锰酸钾对盐蚕豆虫最大种群密度的影响Figure 9. Effect of potassium permanganate on maximum population density of F. salina2.4.2 高锰酸钾对盐蚕豆虫种群生长率和世代时间的影响
如图10所示，随着高锰酸钾质量浓度的增加种群生长率呈先降后升的趋势，其中对种群生长率抑制作用最明显的是0.023 1 mg∙L−1组，种群生长率为 (0.47±0.007) d−1，比对照组降低了23%。One-way ANOVA检验结果表明，对照组与其他试验组的种群生长率均存在显著性差异 (p<0.05)。
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图 10 高锰酸钾对盐蚕豆虫的种群生长率和世代时间的影响注：相同字母为组间无显著性差异 (p>0.05)，不同字母为组间有显著性差异 (p<0.05)，生长率用小写字母表示，世代时间用大写字母表示。Figure 10. Effect of potassium permanganate on population growth rate and generation time of F. salinaNote: The same letters represent insignificant differences among the groups (p>0.05), while different letters represent significant differences among the groups (p<0.05). Growth rates are represented by lowercase letters, while generation time are represented by uppercase letters.浓度从低到高各试验组的世代时间呈先增后降的趋势，处理组的世代时间与对照组相比均存在显著性差异 (p<0.05)。其中0.023 1 mg∙L−1组的世代时间 [(1.30±0.078) d]延长最明显，比对照组延长了30%。
3. 讨论
3.1 3种消毒药物对盐蚕豆虫的LC50
高锰酸钾、二溴海因和聚维酮碘对盐蚕豆虫的24 h LC50分别为1.182、1.067和18.451 mg∙L−1，48 h LC50分别为0.925、0.748和19.620 mg∙L−1；SC分别为0.170、0.110 和6.655 mg∙L−1。盐蚕豆虫对3种消毒药物的敏感性依次为二溴海因＞高锰酸钾＞聚维酮碘，可能是因为二溴海因能水解成次溴酸，次溴酸可对盐蚕豆虫细胞内部结构产生不可逆的氧化和分解[28]，使盐蚕豆虫对二溴海因的敏感性更高。二溴海因在生产上的常规施药剂量为0.3~0.4 mg∙L−1，在多种水产动物中的SC均高于其常规用量，如二溴海因对草鱼 (Ctenopharyngodon idellus) 的SC为14.1 mg∙L−1[29]，对日本黄姑鱼 (Nibea japonica) 幼鱼的SC为0.79 mg∙L−1[30]，对体长为3.5~5.0 cm太湖秀丽白虾 (Palaemon modestus) 的SC为21 mg∙L−1[31]，本研究得出的二溴海因对盐蚕豆虫的 48 h LC50 (0.748 mg∙L−1) 也高于二溴海因的常规施药剂量，但其SC (0.110 mg∙L−1) 低于常规施药剂量，因此在研究二溴海因对盐蚕豆虫水体进行消毒时，可参考二溴海因SC不超过0.110 mg∙L−1的标准对水体进行消杀。
高锰酸钾通常用于鱼类及其附属设施、设备的消毒，日常养殖过程中的一般使用剂量为2~5 mg∙L−1。本研究得出的高锰酸钾对盐蚕豆虫的24 h LC50为1.182 mg∙L−1，48 h LC50为0.925 mg∙L−1，SC为0.170 mg∙L−1，均低于日常养殖过程中的一般使用剂量。已有研究表明高锰酸钾对黄姑鱼 (Nibea albiflora Richardson) 幼鱼的24 h LC50为3.69 mg∙L−1，48 h LC50为3.23 mg∙L−1[32]，对岩虫 (Marphysa sanguinea) 的24 h LC50为14.10 mg∙L−1，48 h LC50为9.59 mg∙L−1[33]，对卤虫 (A. salina) 无节幼体的24 h LC50为21.333 mg∙L−1，48 h LC50为9.003 mg∙L−1[9]，大于高锰酸钾对盐蚕豆虫的24 h和48 h LC50，说明盐蚕豆虫对高锰酸钾的敏感性略高于其他水生动物，因此在研究高锰酸钾对盐蚕豆虫水体进行消毒时，要在安全浓度范围内谨慎使用。
聚维酮碘是聚乙烯吡咯烷酮与碘的络合物，对大部分细菌、真菌、霉菌孢子及部分病毒均有一定杀灭作用[34]。对水生生物来说，生命周期的不同阶段，种间甚至种内对聚维酮碘的耐受性存在差异。研究表明聚维酮碘对宽体金线蛭 (Whitmania pigra) 幼苗的24 h LC50为78.17 mg∙L−1，48 h LC50为70 mg∙L−1[35]，聚维酮碘对暗纹东方鲀 (Takifugu obscurus) 稚鱼的24 h LC50为269.80 mg∙L−1，48 h LC50为200.00 mg∙L−1[36]，本研究中聚维酮碘对盐蚕豆虫的24 h LC50为18.451 mg∙L−1，48 h LC50为19.620 mg∙L−1。由此可见，聚维酮碘对盐蚕豆虫的毒性远大于宽体金线蛭和暗纹东方鲀。刘青等[8]的研究表明聚维酮碘对褶皱臂尾轮虫 (B. plicatilis) 幼体的24 h LC50为2.25 mg∙L−1，48 h LC50为1.99 mg∙L−1，低于本研究中聚维酮碘对盐蚕豆虫的24 h和48 h LC50，表明盐蚕豆虫对聚维酮碘的耐受性比褶皱臂尾轮虫幼体高，本研究得出聚维酮碘SC为6.655 mg∙L−1，因此在盐蚕豆虫养殖水体中需要根据实际情况综合考虑水温、水质、虫体情况等各因素的影响来确定用量。
3.2 3种消毒药物对盐蚕豆虫种群动力学的影响
纤毛虫种群生长均符合逻辑斯蒂增长曲线，即细胞在进行分裂前都有一段停滞期，随后进入指数生长期、稳定期及衰退期[37]。本研究显示，盐蚕豆虫在3种不同浓度消毒剂中的种群增长符合逻辑斯蒂增长曲线，对盐蚕豆虫种群生长的抑制作用随3种消毒剂浓度的增加越明显。对照组的盐蚕豆虫种群24 h后进入指数生长期，指数生长期持续96 h，在第120 小时达到最大种群密度，随后进入衰退期。本研究中，随着二溴海因浓度的增加，盐蚕豆虫的种群生长受到明显抑制，推测可能是由于过量的二溴海因会引起盐蚕豆虫的急性死亡，从而导致其种群密度下降。王兴强等[38]的研究也证实了随二溴海因浓度的升高，凡纳滨对虾 (Litopenaeus vannamei) 的特定生长率、摄食量、饲料转换效率和吸收效率均呈下降趋势。
高锰酸钾是水产养殖中传统的杀菌药剂，具有很强的氧化能力，可以快速氧化蛋白质等有机物，起到杀菌消毒的作用。本研究中，试验组高锰酸钾胁迫盐蚕豆虫的最大种群密度和生长率显著低于对照组，对盐蚕豆虫的种群生长产生了抑制作用。推测可能由于高锰酸钾通过与机体接触，快速氧化酶蛋白及其活性基团，高锰酸钾强的氧化能力损伤了虫体的抗氧化系统[9]，导致其种群密度与对照组产生明显差异。谢钦铭和赵伟伟[39]研究发现使用高锰酸钾对褶皱臂尾轮虫的种群生长也会产生抑制作用，与本研究结果一致。本研究中投喂的杜氏盐藻中含有丰富的有机物[40]，高锰酸钾的抗菌效力极易被有机物减弱[41]，因此高浓度的高锰酸钾对盐蚕豆种群的生长率和世代时间未表现出明显的浓度依赖性。
本研究中，盐蚕豆虫种群生长受到的抑制作用随着聚维酮碘浓度的增加而越发明显。盐蚕豆虫在质量浓度为0.392和0.490 5 mg·L−1 聚维酮碘中的种群生长率与对照组相比差异不显著，而高浓度组 (0.654、0.981、1.962 mg∙L−1) 生长率与对照组相比差异显著，推测可能是盐蚕豆虫对低浓度的聚维酮碘有一定的耐受性，高浓度的聚维酮碘破坏了盐蚕豆虫的细胞结构，抑制了盐蚕豆虫的生长，导致其种群密度下降。刘青等[8]研究褶皱臂尾轮虫的种群动态时发现，质量浓度为0.2 mg∙L−1 以上的聚维酮碘对褶皱臂尾轮虫的寿命、繁殖和种群增长有显著影响，高浓度的聚维碘酮抑制了褶皱臂尾轮虫的生长；张恺[42]的研究也发现高浓度的聚维酮碘对小球藻 (Chlorella pyrenidosa) 的生长会产生明显抑制作用，与本研究结果一致。
4. 结论
本研究探究了二溴海因、高锰酸钾及聚维碘酮3种常见消毒药物对盐蚕豆虫的毒性效应，得出盐蚕豆虫对其的敏感性依次为二溴海因>高锰酸钾>聚维酮碘。这3种消毒药物在高浓度下对盐蚕豆虫的种群生长均起到了明显抑制作用，且盐蚕豆虫对这3种消毒药物的敏感性存在差异。目前，二溴海因、高锰酸钾及聚维碘酮对单细胞真核生物的作用机制报道尚少，后续研究应聚焦于3种消毒药物对盐蚕豆虫细胞发生机制的影响。
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图 2 尖翅燕鱼早期形态发育
注：a. 初孵仔鱼；b. 2日龄；c. 3日龄；d. 5日龄；e. 7日龄；f. 8日龄；g. 13日龄；h. 15日龄稚鱼；i. 18日龄；j. 24日龄；k. 28日龄；l. 30日龄；m. 32日龄；n. 37日龄；o. 39日龄；p. 46日龄幼鱼；q. 51日龄。
Figure 2. Early morphological development of P. teira
Note: a. Newly hatched larva; b. 2 DAH; c. 3 DAH; d. 5 DAH; e. 7 DAH; f. 8 DAH; g. 13 DAH; h. 15 DAH; i. 18 DAH; j. 24 DAH; k. 28 DAH; l. 30 DAH; m. 32 DAH; n. 37 DAH; o. 39 DAH; p. 46 DAH; q. 51 DAH.
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图 3 尖翅燕鱼仔稚鱼色素细胞发育图
注：a. 初孵仔鱼；b. 2日龄；c. 3日龄；d. 5日龄；e. 7日龄；f. 8日龄；g. 13日龄；h. 15日龄；i. 18日龄；j. 24日龄；k. 28日龄稚鱼背鳍；l. 30日龄稚鱼尾鳍；m. 30日龄稚鱼鳞片；n. 30日龄稚鱼臀鳍；o. 32日龄稚鱼鳃盖；p. 37日龄稚鱼鳃盖；q. 39日龄稚鱼鳃盖至第2条黑带部位；r. 39日龄稚鱼鳃盖；s. 39日龄稚鱼臀鳍；t. 39日龄稚鱼眼眶。
Figure 3. Pigment cell development in larvae and juveniles of P. teira
Note: a. Newly hatched larva; b. 2 DAH; c. 3 DAH; d. 5 DAH; e. 7 DAH; f. 8 DAH; g. 13 DAH; h. 15 DAH; i. 18 DAH; j. 24 DAH; k. 28 DAH; k. Dorsal fin of 28 DAH; l. Tail fin of 30 DAH; m. Scales of 30 DAH; n. Anal fin of 30 DAH; o. Gill cap of 30 DAH; p. Gill cap of 37 DAH; q. From the gill cover to the second black band of 39 DAH; r. Gill cap of 39 DAH; s. Anal fin of 39 DAH juvenile; t. Eye orbit of 39 DAH juvenile.
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图 4 尖翅燕鱼应激前体色与皮肤色素细胞特征变化
注：a. 51日龄幼鱼；b. 32日龄稚鱼浅色皮肤应激前；c. 37日龄稚鱼浅色皮肤应激前；d. 51日幼鱼龄应激后；e. 32日龄稚鱼浅色皮肤应激后；f. 37日龄稚鱼浅色皮肤应激后；g. 39日龄稚鱼浅色皮肤应激前；h. 46日龄幼鱼浅色皮肤应激前；i. 51日龄幼鱼浅色皮肤应激前；j. 39日龄稚鱼浅色皮肤应激后；k. 46日龄幼鱼浅色皮肤应激后；l. 51日龄幼鱼浅色皮肤应激后。
Figure 4. Changes in body color and skin pigment cell characteristics of P. teira before stress
Note: a. 51 DAH juvenile; b. Light skin of 32 DAH juvenile before stress; c. Light skin of 37 DAH juvenile before stress; d. 51 DAH juvenile after stress; e. Light skin of 32 DAH juvenile after stress; f. Light skin of 37 DAH juvenile after stress; g. Light skin of 39 DAH juvenile before stress; h. Light skin of 46 DAH juvenile before stress; i. Light skin of 51 DAH juvenile before stress; j. Light skin of 39 DAH juvenile after stress; k. Light skin of 46 DAH juvenile after stress; l. Light skin of 51 DAH juvenile after stress.
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图 5 尖翅燕鱼幼鱼期不同部位色素细胞发育图
注：a. 51日龄幼鱼背鳍；b. 51日龄幼鱼臀鳍；c. 51日龄幼鱼尾鳍；d. 51日龄幼鱼深色鳞片；e. 51日龄幼鱼浅色鳞片；f. 51日龄幼鱼眼眶。
Figure 5. Development of pigment cells in different parts of P. teira juvenile
Note: a. Dorsal fin of 51 DAH juvenile; b. Anal fin of 51 DAH juvenile; c. Caudal fin of 51 DAH juvenile; d.Dark scale of 51 DAH juvenile; e. Light scale of 51 DAH juvenile; f. Eye orbit of 51 DAH juvenile.
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