Pharmacokinetics and residual elimination pattern of enrofloxacin and its metabolite ciprofloxacin in Babylonia areolate
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摘要:
近年来，养殖方斑东风螺 (Babylonia areolata) 体内的恩诺沙星残留问题频发，为揭示恩诺沙星及其代谢物在方斑东风螺体内的药代动力学规律，并制定出合理的给药方法与休药期。以方斑东风螺为研究对象，在 (24.5±2.5) ℃的养殖水温下，对方斑东风螺伴饵投喂20 mg·kg−1的恩诺沙星混合液，分别于给药后的第0.17、第0.25、第0.5、第1、第2、第4、第12、第24、第48、第72、第120、第168、第240、第360 小时分期采集组织，采用岛津8050LC-MS/MS仪器检测各时期组织中的药物浓度。结果显示，药时数据适用于非房室模型，恩诺沙星在腹足肌肉、吻管 (含食道腺)、肝脏中的达峰浓度 (Cmax) 分别为7.82、10.5、31.47 mg·kg−1，环丙沙星 (代谢物) 的Cmax分别为0.72、0.89、1.21 mg·kg−1；恩诺沙星的达峰时间 (tmax) 分别为1、4、4 h，环丙沙星的tmax分别为4、12、4 h；恩诺沙星的消除半衰期 (t1/2z) 分别为38.22、52.44、62.40 h，环丙沙星的t1/2z分别为66.23、33.11、27.06 h；各组织理论休药期分别为16.94、16.79、17.99 d。结果表明，各组织中Cmax/MIC＞ 10，故20 mg·kg−1的恩诺沙星混合液适用于治疗由哈维氏弧菌 (Vibrio harveyi, MIC, 0.45 mg·L−1) 引发的东风螺疾病。研究建议休药期不低于440.76度日 (℃·d)，给药方案为每2天1次，共3次。
Abstract:In recent years, frequent occurrence of enrofloxacin residues in breeding snail (Babylonia areolate) has been a problem. To reveal the pharmacokinetic characteristics of enrofloxacin and its metabolites in B. areolate, and to design a rational dosing method and the rest period, we fed B. areolate with 20 mg·kg−1 of enrofloxacin mixture at water temperature of (24.5 ± 2.5) ° C, and then sampled at 0.17th, 0.25th, 0.5th, 1st, 2nd, 4th, 12th, 24th, 48th, 72nd, 120th, 168th, 240th and 360th hour after the dosing. Shimadzu
8050 LC-MS/MS was used to determine the drug concentration in the tissues in each period. The results show that the drug-time data applied to the non-atrial models in Gastropod muscle, proboscis (Including esophageal glands) and liver: the Cmax of enrofloxacin was 7.82, 10.5 and 31.47 mg·kg−1, respectively; the Cmax of ciprofloxacin (Metabolite) was 0.72, 0.89 and 1.21 mg·kg−1, respectively; the enrofloxacin tmax was 1, 4 and 4 h, respectively; the ciprofloxacin tmax was 4, 12 and 4 h, respectively; the enrofloxacin t1/2z was 38.22, 52.44 and 62.40 h, respectively; the ciprofloxacin t1/2z was 66.23, 33.11 and 27.06 h, respectively; the theoretical drug rest period was 16.94, 16.79 and 17.99 d, respectively. The results indicate that for all tissues, 20 mg·kg−1 of enrofloxacin mixture with the Cmax/MIC over 10 is suitable for the treatment of B. areolate disease caused by Vibrio harveyi (MIC, 0.45 mg·L−1). It is recommended that the drug rest period should not be less than 440.76 ℃·d and the dosing should be once every 2 d, a total of 3 times.-
Keywords:
- Babylonia areolate /
- Enrofloxacin /
- Pharmacokinetics /
- Drug residues /
- Rest period
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恩诺沙星色泽微黄或土黄，微溶于水和甲醇，易溶于碱性溶液；由于高效的抗菌特性，目前已成为水产病害治疗中主要的喹诺酮类抗菌药物。恩诺沙星的药理机制在于能与细菌中的DNA回旋酶亚基A结合，减少细菌辅酶的效用，遏制脱氧核苷酸的合成，从而阻断细菌中DNA的复制[1]。因其在细菌中具有强大的渗透功能，对革兰氏阴性菌具有杀灭作用，对部分革兰氏阳性菌具有抑制作用。因此，恩诺沙星在水产养殖中被广泛应用于治疗由溶藻弧菌 (Vibrio alginolyticus)[2] 、嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila)[3]、哈维氏弧菌 (V. harveyi)[4]和副溶血性弧菌[5] (V. parahaemolyticus) 等引起的细菌性疾病。目前针对恩诺沙星的水生生物药代动力学研究主要集中在鱼类和甲壳类。鱼类包括斑点叉尾鮰 (Ictalurus puncetatus)、条纹鲇 (Pangasianodon hypophthalmus)、俄罗斯鲟 (Acipenser gueldenstaedtii)、罗非鱼 (Oreochroms mossambcus)、大菱鲆 (Scophthalmus maximus)、大西洋鲑 (Salmo salar)等[6]，甲壳类包括克氏原螯虾 (Procambarus clarkii)[7]、凡纳滨对虾 (Litopenaeus vannamei)[8]、三疣梭子蟹 (Portunus trituberculatus)[9]、中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis)[10]等，但在螺类上缺乏相关研究。
方斑东风螺 (Babylonia areolata) 隶属蛾螺科、东风螺属，广泛分布于我国海南、广东、福建等沿海区域，因其肉质鲜美、营养丰富，深受消费者欢迎。随着方斑东风螺养殖规模的不断扩大，多种细菌性病害频发，对养殖业造成了严重威胁。在应对这些病害时，部分养殖户由于缺乏东风螺药代动力学理论知识和科学的给药方案，往往出现药物滥用、过量或多次使用等问题，进而导致药物残留超标，影响东风螺水产品的食品安全和出口贸易。根据相关规定，恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在水产食品动物中的残留限量不超过100 μg·kg−1[11]。基于此，本研究在 (24.5±2.5) ℃的养殖水温下，通过伴饵投喂20 mg·kg −1的恩诺沙星，分析其在东风螺体内的药代动力学和残留消除规律，并提出给药方案和休药期建议，以减少药物残留等问题。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器与设备
本研究使用的主要仪器包括：液相色谱串联质谱仪 (岛津8050LC-MS/MS，日本)，漩涡振荡器 (大龙MX-F，中国)；干燥箱 (GHG-9203J，中国)，超声波清洗器 (KQ-3000DE，中国)，高速冷冻离心机 (杭州奥盛仪器有限公司)，电子天平 (北京赛多利斯) 等。
1.1.2 药品与试剂
恩诺沙星标准品 (Enrofloxacin，ENR，纯度>98.0%，上海迈瑞尔有限公司)；环丙沙星标准品 (Ciprofloxacin，CIP，纯度>98.0%，上海麦克林有限公司)；色谱纯乙腈购自德国默克公司；分析纯甲酸购自国药集团化学试剂有限公司；碳酸氢钠溶液 (质量分数为5%，山东众源康生物科技有限公司)；实验用水为双蒸水。
1.1.3 实验动物
本实验共选取60只健康的方斑东风螺，均由海南康冠生物科技有限公司提供，随机抽检其中3只，均无恩诺沙星、环丙沙星残留。实验在该公司病害实验室中进行，备用的东风螺均于96 L塑胶水族箱中采用循环水系统暂养7 d。水质指标：温度 (24.5±2.5) ℃、pH 8.08±0.16、盐度 (20.8±0.5)‰。形体指标：体质量 (8.0±2.5) g、壳长 (30.4±0.42) mm、壳高 (1.92±0.11) mm。
1.2 试验方法
1.2.1 恩诺沙星伴饵药物的配制
目前市面上缺少专门针对螺类生物的给药剂量标准，本研究依据恩诺沙星在治疗鱼类和贝类细菌性疾病中的常规推荐剂量，使用精密电子天平以20 mg·kg−1的剂量，称取9.6 mg恩诺沙星。采用5% (w)的氢氧化钠 (NaOH) 溶液将恩诺沙星稀释5倍并涡旋振荡5 min，制备出1.92 mg·mL−1的药物混匀液。将提前解冻的冰鲜鱿鱼 (无恩诺沙星与环丙沙星残留) 按照东风螺体质量的6%称取28.8 g与恩诺沙星混匀液充分拌匀，制成初始伴饵药物。
1.2.2 给药与样品采集
正式实验前，东风螺均停食72 h。将伴饵药物均匀分成60份投放至栅栏方孔 (长5 cm×宽5 cm×高5 cm) 中，每孔1只螺。方孔中有剩余饵料者去除试验，其余则在给药后的第0.17、第0.25、第0.5、第1、第2、第4、第12、第24、第48、第72、第120、第168、第240、第360 小时采集各组织，各时间点均随机采样3只。残留消除试验采用单次高剂量伴饵的给药方式[12]，剂量设定为60 mg·kg−1，于给药后的第1、第2、第3、第 6、第10、第15、第25天分期采样，每期随机采样3只。采样时选用实心橡胶锤对准最大螺壳曲面处进行敲击，取出肝脏、腹足肌肉，吻管及其食道腺从腹足底部自下而上采集，各组织样品均保存于−80 ℃冰箱中。
1.2.3 样品处理
腹足肌肉、吻管、肝脏样品室温解冻后，各称取0.1 g样品置于10 mL离心管中，加入2 mL甲醇，涡旋振荡20 min后，用40 kHz超声波清洗器超声 (40 000次·s−1) 10 min，取上清液于10 mL离心管中。剩余物质继续加入2 mL乙醇，重复提取1遍，合并2次清液，50 ℃水浴加热旋转风干，加入2 mL流动相溶液放入摇床振荡，待残留物完全溶解后加入饱和正己烷2 mL，振荡10 min。所有液体移至10 mL离心管中，离心 (7 000 r·min−1) 10 min。下层溶液过0.22 μm有机滤膜后，上机待测。
1.2.4 仪器方法
色谱条件：采用岛津8050LC-MS/MS液相色谱串联质谱仪进行检测分析，色谱柱为LeapsilC18 (100 mm×2.1 mm, 2.7 μm)；进样量为10 mL，流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B按乙腈−水体积比82∶18进行洗脱，柱温箱温度40 ℃，流速0.4 mL·min−1，进样体积为3 μL，检测时间为15 min。
质谱条件：离子源为电喷雾离子源 (ESI)，采用正负离子多反应监测 (MRM) 分析模式；接口电压4.00 kV、接口温度300 ℃，脱溶剂温度500 ℃；DL温度250 ℃；雾化气流量3.0 L·min−1；加热气流量10.0 L·min−1；加热块温度400 ℃；干燥气流量10.0 L·min−1。其他参数见表1。
表 1 MRM模式下化合物质谱检测参数Table 1. Compound mass spectrometry detection parameters under MRM mode化合物
Compound相对分子质量
Relative molecular
mass检测离子对
Detecting
ion pairs定量离子对
Quantitative
ion-pairing碰撞能量
Collision
energy/eV表恩诺沙星
ENR359.40 360/342 360/342 26 360/245 18 环丙沙星
CIP331.35 332/316 332/316 30 332/288 32 1.2.5 标准曲线与检测限的制备
取恩诺沙星、环丙沙星各10 mg，用乙腈溶解后定容至100 mL，倍比稀释10倍后配制质量浓度为10 μg·mL−1的恩诺沙星标准储备液，在4~8 ℃下避光保存。实验时，依次将药物稀释成0.01、0.1、0.5、1、2、6、8、10 μg·mL−1的标准溶液，采用液相色谱质谱联用仪进行检测分析。对数据进行回归处理后，以横坐标表示质量浓度，纵坐标表示峰面积，构建标准曲线。
1.2.6 回收率与精密度
取腹足肌肉和吻管、肝脏等空白组织测回收率与精密度，称取适量0.5 g样品，分别加入0.1、1、10 μg·mL−1的标准储备液，静置1 h后按方法1.2.3的步骤进行检测分析，每个水平做3组平行，连续做3 d。
1.2.7 数据处理与分析
本研究采用DAS 3.0和WT 1.4 (Withdrawal Time 1.4) 软件处理恩诺沙星药物代谢和休药期数据，用Origin 2021软件绘图，药物残留消除曲线用 SPSS 26.0软件进行曲线回归建模。运用One-way ANOVA分析来检验各组织在不同时间点的差异是否显著，p<0. 05表示差异显著，p<0. 01表示差异极显著。
2. 结果
2.1 色谱特征
按照1.2.2的步骤处理空白组织腹足肌肉、吻管、肝脏样品后，以1.2.3的方法进行检测，恩诺沙星 (图1-a)的保留时间约为5.05 min，环丙沙星 (图1-b) 约为3.92 min。2种药物在空白样品中峰型尖锐对称，分离效果好，无明显杂峰干扰，色谱图基线平稳。
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图 1 添加恩诺沙星与环丙沙星标准溶液色谱图Figure 1. Chromatogram of standard solutions of enrofloxacin and ciprofloxacin2.2 检测方法的线性范围回收率及其精密度
在0.01~10 μg·mL−1范围内恩诺沙星与环丙沙星的质量浓度与峰面积高度线性相关。恩诺沙星相关系数r2=0.999，回归方程为y=9 465.18x+1 278.42。环丙沙星相关系数r2=0.999，回归方程为y=9 961.4x+558.41。浓度与峰面积的线性关系良好，定量限 (LOQ, S/N>10) 为0.5 μg·kg−1。远低于欧盟 (100 μg·kg−1) 规定的最高残留限量，具有较高的精准率。恩诺沙星和环丙沙星在腹足肌肉、吻管、肝脏中的相对回收率均值分别介于93.25%~98.96%和93.27%~96.15%。日内、日间精密度均较高 (表2)，能满足实验要求。
表 2 各组织中恩诺沙星回收率与日内、日间变异系数Table 2. Enrofloxacin recoveries and intra-day inter-day coefficients of variation in various tissues指标
Index质量浓度
Mass concentration/
(μg·mL−1)腹足肌肉
Gastropod muscle吻管
Proboscis肝脏
LiverENR CIP ENR CIP ENR CIP 相对回收率
Relative recovery rate/%0.1 95.92 87.73 89.70 85.40 92.40 92.31 1.0 99.31 102.51 92.21 97.67 94.70 93.25 10.0 101.65 98.20 97.84 101.25 92.35 94.26 平均值 Mean 98.96 96.15 93.25 94.77 93.15 93.27 日内变异系数
Intraday coefficient of variation/%0.1 5.48 3.25 3.58 2.78 5.27 4.55 1.0 6.91 3.34 4.28 3.13 7.16 4.73 10.0 7.21 4.89 5.22 5.02 6.34 5.26 平均值 Mean 6.53 3.83 4.36 3.64 6.26 4.85 日间变异系数
Interday coefficient of variation/%0.1 6.75 3.34 5.31 6.24 6.37 5.22 1.0 7.24 5.58 4.88 7.11 6.58 3.17 10.0 7.58 6.52 6.87 3.89 8.01 3.86 平均值 Mean 7.19 5.15 5.69 5.75 6.99 4.08 注：ENR. 恩诺沙星标准品；CIP. 环丙沙星标准品；n=3。 Note: ENR. Enrofloxacin; CIP. Ciprofloxacin; n=3. 2.3 恩诺沙星在组织内的药时曲线变化规律
在腹足肌肉中 (图2-a)：第0.17小时的质量分数为3.67 mg·kg−1。0~1 h内含量先降后升，在第1 小时达到峰值 (7.82 mg·kg−1)。随后的3 h呈“U”型变化，在第4小时达到次峰值 (6.96 mg·kg−1)。0~4 h内药时曲线显示出多峰现象，恩诺沙星在东风螺体内存在再吸收特征。4 h后进入消除相，在第12小时缓慢降至5.22 mg·kg−1，12~24 h内快速降至0.94 mg·kg−1。随后336 h内，含量随时间变化逐渐降低，至第360 小时检测值仅为0.54 μg·kg−1。
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图 2 方斑东风螺各组织中恩诺沙星药时曲线Figure 2. Enrofloxacin drug time curves in various tissues of B. areolate恩诺沙星在吻管中，第0.17小时的质量分数为6.57 mg·kg−1 (图2-b)。0~1 h内下降至1.57 mg·kg−1，在第1小时出现次峰值 (6.05 mg·kg−1)。随后3 h内药物浓度变化与腹足肌肉相似，在第4小时达到峰值 (10.55 mg·kg−1)，第24 小时为1.18 mg·kg−1，第72 小时仅为0.12 mg·kg−1 。第360 小时未检出恩诺沙星残留 (检测值低于0.5 μg·kg−1)。
恩诺沙星在肝脏中，第0.17小时的质量分数为9.87 mg·kg−1 (图2-c)。0.17~0.5 h内出现倒“U”型变化，在第0.25 小时出现次峰值 (14.73 mg·kg−1)，后缓慢下降至6.35 mg·kg−1。0.5~4 h内，呈现斜“N”型变化 ，出现2次峰值。在第1 小时的质量分数为24.34 mg·kg−1，显著高于其他组织 (p<0.05)，在第2 小时降至12.67 mg·kg−1，在第4 小时达到峰值 (31.47 mg·kg−1)，极显著高于其他组织 (p<0.01)。在第24 小时为1.35 mg·kg−1，第72 小时仅为0.16 mg·kg−1。第360 小时未检测出恩诺沙星残留。
2.4 环丙沙星在组织内的药时曲线变化规律
在腹足肌肉中，第0.17和第0.25小时均未检测出环丙沙星 (药物浓度低于检测限)，0.5~4 h内环丙沙星质量分数从0.075 mg·kg−1上升至0.723 mg·kg−1；在第12小时快速下降至0.253 mg·kg−1，在12~24 h内上升至0.677 mg·kg−1，出现多峰现象。随后在336 h内，浓度逐渐下降，至第360 小时时检测量仅为0.780 μg·kg−1 (图3-a)。结果显示，腹足肌肉中环丙沙星占恩诺沙星的比例为7.358%。
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图 3 方斑东风螺组织中环丙沙星药时曲线Figure 3. Ciprofloxacin drug time curves in various tissues of B. areolate环丙沙星在吻管中，第0.17小时的质量分数为0.062 mg·kg−1 (图3-b)。在0~12 h内浓度持续上升出现峰值 (0.893 mg·kg−1)，在吻管中环丙沙星残留未出现多峰现象。随后在第60小时其值快速下降至0.023 mg·kg−1。在第168 小时仅检出0.650 μg·kg−1，在第240、第360小时均未检出环丙沙星。结果显示，吻管中环丙沙星占恩诺沙星的比例为7.422%。
环丙沙星在肝脏中，第0.17小时的质量分数为0.095mg·kg−1 (图3-c)。在第0.5小时上升至0.456 mg·kg−1。在0.5~4 h内出现倒“U”型变化，在第4 小时出现峰值 (1.211 mg·kg−1)，存在多峰现象。在第48 小时仍有0.532 mg·kg−1环丙沙星检出。在第168小时检测出环丙沙星0.005 mg·kg−1，第360小时未检出 。结果显示，肝脏中环丙沙星占恩诺沙星的比例为4.234%。
2.5 恩诺沙星及其代谢物在组织内药代动力学参数
采用DAS 3.0非房室模型统计分析，恩诺沙星与环丙沙星在方斑东风螺的不同组织中分布广泛，两者的吸收、分布及消除过程均相对迅速，具体统计矩阵参数如表3所示。
表 3 恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在方斑东风螺体内药动学参数Table 3. Pharmacokinetic parameters of enrofloxacin and its metabolite ciprofloxacin in B. areolate统计矩阵模型参数
Statistical matrix model parameter组织 Tissue 腹足肌肉
Gastropod muscle吻管
Proboscis肝脏
LiverENR CIP ENR CIP ENR CIP 曲线下面积 AUC(0-t)/[mg·(L·h)−1] 133.330 25.682 183.250 28.465 439.870 49.719 AUC(0-∞)/ [mg·(L·h)−1] 133.358 25.757 183.296 28.467 439.961 49.721 平均驻留时间MRT(0-t)/h 16.904 32.092 16.110 24.497 13.476 30.890 MRT(0-∞)/h 16.993 33.327 16.216 24.838 13.565 31.045 VRT(0-t)/h2 535.747 1 138.917 415.691 537.463 419.861 802.940 VRT(0-∞)/h2 571.720 1 684.493 461.342 662.036 460.436 856.366 消除半衰期 t1/2z/h 38.218 66.623 52.436 33.109 62.403 27.060 表观分布容积 Vz/F/(L·kg−1) 8.271 74.651 8.256 33.566 4.093 15.707 总体清除率 CLz/F/[L·(h·kg)−1] 0.150 0.777 0.109 0.703 0.045 0.402 达峰浓度 Cmax/(mg·L−1) 7.820 0.723 10.500 0.893 31.470 1.211 达峰时间 tmax/h 1 4 4 12 4 4 注：ENR. 恩诺沙星标准品；CIP. 环丙沙星标准品；n=3。 Note: ENR. Enrofloxacin; CIP. Ciprofloxacin; n=3. 恩诺沙星药时曲线下面积 [AUC(0-t)] 为肝脏>吻管>腹足肌肉，平均驻留时间 [MRT(0-t)] 为肝脏>腹足肌肉>吻管，消除半衰期 (t1/2z) 为肝脏>吻管>腹足肌肉，表观分布容积 (Vz/F) 为腹足肌肉>吻管>肝脏；总体清除率 (CLz/F) 为腹足肌肉>吻管>肝脏。达峰浓度 (Cmax) 为肝脏>吻管>腹足肌肉；达峰时间 (tmax) 除腹足肌肉为1 h，其余组织均为4 h。
环丙沙星药时曲线下面积为肝脏>吻管>腹足肌肉；平均驻留时间为腹足肌肉>肝脏>吻管；消除半衰期为腹足肌肉>吻管>肝脏；表观分布容积为腹足肌肉>吻管>肝脏；总体清除率为腹足肌肉>吻管>肝脏；达峰浓度为肝脏>吻管>腹足肌肉；环丙沙星的药物达峰时间除吻管为12 h外，其余组织均为4 h。
2.6 恩诺沙星及其代谢物在组织中的休药期与消除方程
本研究以质量分数为60 mg·kg−1的高剂量恩诺沙星伴饵喂药后，第1天在腹足肌肉、吻管、肝脏组织中，分别检测出药物残留为3.348、4.994、8.427 mg·kg−1，2~6 d残留量开始显著下降，第6天时仅分别检测出12.99、20.96、29.98 μg·kg−1，均远低于国家规定的100 μg·kg−1的恩诺沙星 (含环丙沙星) 残留限量。第25天时吻管中未检测出环丙沙星 (药物浓度低于检测线)。腹足肌肉与肝脏中的恩诺沙星分别仅有0.55和0.68 μg·kg−1，药物残留数据采用SPSS 26.0软件拟合分析，结果显示：各组织的消除半衰期 (表4) 分别为1.765、1.873、1.753 d。采用WT 1.4软件以对数线性回归曲线95%置信区间的上限降至最高残留限量 (Maximum residue limits, MRL=100 μg·kg−1) 所需时间为休药期，结果显示，腹足肌肉、吻管、肝脏的理论休药期分别为16.94、16.79、17.99 d (图4)。
表 4 恩诺沙星在方斑东风螺各组织的消除拟合方程和参数Table 4. Fitting equations and parameters for elimination of enrofloxacin in various tissues of B. areolate组织 Tissue 拟合方程 Fitted equation 相关系数 r2 消除半衰期 t1/2z/d 腹足肌肉 Gastropod muscle y=−0.012+8.364e−t/1.102 0.998 1.765 吻管 Proboscis y=−0.057+11.551e−t/1.241 0.975 1.873 肝脏 Liver y=−0.075+21.709e−t/1.081 0.987 1.753 ![]()
图 4 恩诺沙星(含环丙沙星)在组织中的休药期Figure 4. Dormancy period of enrofloxacin (With ciprofloxacin) in tissues3. 讨论
3.1 恩诺沙星在方斑东风螺体内代谢分析方法及其特征
恩诺沙星的药代动力学特征受物种、体型、给药途径、实验环境和代谢酶等多种因素影响[13-14]，药物代谢分析结果则因房室模型方法而异。本研究中恩诺沙星在各组织内均存在多峰或二次吸收的现象，这类离群数据在使用房室模型时常出现异常参数，导致拟合失败，而采用非房室模型拟合时，能对这类非典型数据拟合出变异较小的参数值。这与黄聚杰等[15]研究副氟苯尼考在花鲈 (Lateolabrax japonicus) 体内药物代谢动力学的结果相似。近年来，非房室模型也越来越多地应用于恩诺沙星在生物体内的药代动力学研究中，如福瑞鲤 (Cyprinus carpio)[16]、斑点叉尾鮰[17]、中华草龟 (Chinemys reevesii)[18]等。
tmax与Cmax是衡量药物在生物体内吸收速率和效用的重要参数。董军等[19]研究20 mg·kg−1恩诺沙星在牛蛙 (Lithobates catesbeiana) 体内代谢时，肌肉与肝脏中的tmax均为8 h，Cmax分别为10.21和13.84 mg·kg−1。本研究中，恩诺沙星在肌肉中的tmax更快，在肝脏中的Cmax更高，这一结果可能与物种间的遗传性和组织部位代谢机制有关。由于肌肉组织因其渗透性差，血管通道细小且贫乏不易于药物聚集，而肝脏组织的通透性好，血管丰富，利于药物进一步累积[20]。各组织药时曲线显示，药物浓度在4~48 h内迅速下降，最高从31.47 mg·kg−1下降至1.35 mg·kg−1，这一现象与众多水生生物的药时浓度下降过程相似[16-19]。有研究显示，恩诺沙星的降解速率受光照、水温、降解介质等多重影响[21]，在光解中其主要参与直接光降解和自敏式光降解，水体中有机物吸收光子达到激发态，激发态分子出现内部键断裂或重组[22]，从而生成降解产物。本研究中养殖灯光均可透过螺筐，从而加快了降解产物生成，进一步提高药物降解速率。在水生生物中，恩诺沙星又多以原药的形式排出体外[23]。螺类等生物在进食后具有反复滤食饵料的特点，即加速了药物的代谢过程，又增加了腺体中药物代谢酶的降解频率。AUC(0-t)是反映药物进入体循环的相对量，Vz/F代表体内药物清除效率。本研究中，腹足肌肉、吻管、肝脏组织的AUC(0-t)分别为133.330、183.250、439.870 mg·h·kg−1，Vz/F分别为8.271、8.256、4.093 mg·kg−1。恩诺沙星在肝脏中吸收较好，利用率高，清除率低；这与朱晓曼等[24]研究恩诺沙星在罗非鱼体内代谢中在肝、肾等腺组织的结论相似。值得注意的是，在0~4 h药时曲线均存在多峰不规则变化，这与林丽聪等[25]研究丁香酚在罗非鱼血浆和组织中的代谢过程中的结果相似。然而，不同物种间的多峰节点表现不同，方斑东风螺、黄河鲤 (C. carpio)[26]、牛蛙[19]多峰现象均在0~8 h出现，而俄罗斯鲟[27]则出现在20 h后。这可能与物种间组织与消化腺肠-肝循环速率不同而引起的再吸收差异有关[28]，药物在胃肠道的不同部位存在吸收速度差异[29]导致出现多峰现象。在消除半衰期t1/2z上，腹足肌肉、吻管、肝脏分别为38.218、52.436、62.403 h，这与虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)[30]、草鱼 (Ctenopharyngodon idella)[31]等鱼类结果类似。肝脏与吻管 (含食道腺) 消除时间较长，研究表明肝、腺体中含有丰富的脂质[32-33]，恩诺沙星中7号C-二元氮杂环具有强大的亲脂性，易与肝肾、腺体组织连接[34]。Schmitt[35]研究发现，在肝脏和腺体组织中，带有正负电荷的胆碱基团的磷脂分子能够通过静电引力与离子化的恩诺沙星发生相互吸引[36]，从而在疏水效应下使彼此紧密结合[37]，延长消除时间。
3.2 环丙沙星在方斑东风螺体内的代谢特征
在水生生物中，恩诺沙星的主要代谢方式是通过脱乙基酶代谢生成环丙沙星[38]，但不同物种间的代谢产物检出时间不同。俄罗斯鲟口服20 mg·kg−1剂量的恩诺沙星后，肝脏与肌肉组织中0~24 h均可检测到环丙沙星[27]，而恩诺沙星在舌齿鲈 (Dicentrarchus labrax) 体内代谢时，未在肌肉中检测到环丙沙星[39]。本研究在第0.17、第1.5小时的肌肉组织中也未检出环丙沙星残留，在第360 小时仅检测出0.78 μg·kg−1。AUC比值 (AUCCIP/AUCENR) 是衡量恩诺沙星与代谢药物的协同作用的重要指标[40]，本研究中腹足肌肉、吻管、肝脏中的AUC比值分别为19.3%、15.5%、11.3%，最低值均高于多数水生动物，如罗非鱼 (5.04%)[24]、牙鲆 (Paralichthys olivaceus, 2.09%)[41]、大口黑鲈 (Micropterus salmoides, 2.73%)[42]、克氏原螯虾 (0.5%)[7]等。上述结果表明，恩诺沙星及其代谢物在东风螺体内的协同作用大于其他水生生物，这可能与东风螺物种中细胞色素P450酶系中脱乙基酶的活性较高有关[43]。然而，就代谢物环丙沙星的绝对占比来看，在弧菌病害治疗中恩诺沙星仍占据主导地位。
3.3 方斑东风螺药物代谢的靶组织探讨
东风螺靶组织的选取是药物代谢动力学检测的关键环节，涉及药物作用机制、转运、分布及代谢差异。孙维宇[44]在研究恩诺沙星在黄颡鱼 (Pelteobagrus fulvidraco) 体内的药物代谢时，采集肝脏、肾脏、鳃、肌肉+皮肤、血浆等组织；Yang 等[45]在研究黄河鲤中恩诺沙星代谢时，增加了肠道、胆汁等组织的采集；牛曰华等[46]在研究大黄鱼体内的药物代谢时则增加了性腺部位。不同物种在采样时，其组织选择存在差异，但肝脏、血液、肾脏、肌肉等是研究药物代谢的主要组成部分。在肝、肾中，药物需要经过细胞的摄取、结合及脱氧核糖核酸酶的作用而被释放进入其他房室中。当药物在血液中时，其血浆蛋白通常被认为会与药物相结合形成稳定的复合物，随血液循环运输到各组织病灶处[5]。胆囊、肌肉、皮肤、脑、肠道等组织也均对药物代谢有一定影响，如药物会被吸收进入毛细血管，从门静脉中流入胆囊[47]，再经过胆汁分泌排泄，也可通过胃等消化腺与肠道黏膜吸收。肌肉、脑、鳃等组织因其logBAF与脂水分配系数对数值logDlipw呈正相关 (p<0.05) 致使代谢能力较弱，一旦药物残留则难以消除，更多地成为药物的残留部位[5]。基于此，本研究结合东风螺生理结构选取肝脏、吻管 (含食道腺)、腹足肌肉作为研究恩诺沙星药物代谢的主要靶组织。吻管是东风螺进食的首要组织，也是发生弧菌病的主要病变部位，其部位后端含有的食道腺[48]对恩诺沙星的吸收和分布产生至关重要的影响。腹足肌肉是东风螺最主要的食用部位，其药物残留的变化影响着食品安全。值得注意的是，本研究也涉及血液、肠道等组织采样。然而，东风螺的外壳和水管沟属性使得敲锤外壳时极易损伤肠道，增加了组织采集的难度；针管抽吸血液时，由于其含量稀少、无色且容易与黏性分泌液混淆，可能对靶组织的单一性造成影响。
3.4 恩诺沙星的给药剂量治疗效果及其休药期
在方斑东风螺养殖过程中，弧菌性疾病是其主要病害之一。有研究显示哈维氏弧菌是东风螺急性死亡症的主要病原菌[49]。本研究测得恩诺沙星对病螺体中分离的哈维氏弧菌MIC为(0.45±0.17) mg·L−1。通常情况下，药物的治疗是否有效果取决于Cmax/MIC[27]，一般认为当Cmax/MIC>8时，药物即可起到良好的治疗效果；当Cmax/MIC≥10时，则可发挥最大治疗作用。本研究中恩诺沙星的Cmax/MIC在各组织中均远大于10，在辜良斌等[50]的药敏试验中也显示出哈维氏弧菌对恩诺沙星的抑菌圈较大，敏感性高。综上可知，当恩诺沙星的给药剂量为20 mg·kg−1时，对哈维氏弧菌的病害抑制效果较好。
探究水产动物中药物残留的消除规律，对于确保食品安全具有重要的理论价值。为了尽可能地模拟实际的养殖条件，常在药物残留消除实验中采用多次给药的设计[12]，但东风螺由于进食习性与攀爬习惯等特性，短时间内多次给药易发生应激和逃跑等情况，部分体质较弱的螺难以存活至实验结束。部分学者通过改进给药方式提高试验的可操作性，如单次高剂量的给药方式模拟药物的累积作用，从而避免因多次采样造成生物应激死亡[51]。基于此，本研究采取第二种给药方式研究恩诺沙星在东风螺体内的代谢消除规律，并以100 μg·kg−1作为残留限，计算得出，在24.5 ℃的环境下，腹足肌肉、吻管、肝脏组织休药期分别为415.0、411.4、440.76度日(℃·d)。若仅考虑腹足肌肉作为主要食用部位，建议休药期为17 d，若考虑所有组织，则休药期为18 d。结合各组织中药物半衰期t1/2介于38.22~62.40 h，建议给药方案为每2天1次，共进行3次。在实际治疗中，可根据螺患病状态、养殖环境、致病菌种类等因素调整药物剂量与给药次数，预防弧菌耐药性的产生和药物残留问题。
4. 结论
本研究以20 mg·kg−1的恩诺沙星剂量对方斑东风螺单次伴饵给药，研究结果表明，恩诺沙星在东风螺体内的变化相较于鱼类和甲壳类生物，吸收更迅速、消除速度更快，环丙沙星AUC比值更高。恩诺沙星各组织中均可检测出药物残留，在肝脏中的浓度最高，腹足肌肉与吻管 (含食道腺) 在第360 小时后低于检测限 (0.5 μg·kg−1)。各组织中Cmax/MIC均大于10，故20 mg·kg−1的药物剂量可满足治疗效果，建议休药期不低于440.76度日 (℃·d)。
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图 1 添加恩诺沙星与环丙沙星标准溶液色谱图
Figure 1. Chromatogram of standard solutions of enrofloxacin and ciprofloxacin
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图 2 方斑东风螺各组织中恩诺沙星药时曲线
Figure 2. Enrofloxacin drug time curves in various tissues of B. areolate
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图 3 方斑东风螺组织中环丙沙星药时曲线
Figure 3. Ciprofloxacin drug time curves in various tissues of B. areolate
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图 4 恩诺沙星(含环丙沙星)在组织中的休药期
Figure 4. Dormancy period of enrofloxacin (With ciprofloxacin) in tissues
表 1 MRM模式下化合物质谱检测参数
Table 1 Compound mass spectrometry detection parameters under MRM mode
化合物
Compound相对分子质量
Relative molecular
mass检测离子对
Detecting
ion pairs定量离子对
Quantitative
ion-pairing碰撞能量
Collision
energy/eV表恩诺沙星
ENR359.40 360/342 360/342 26 360/245 18 环丙沙星
CIP331.35 332/316 332/316 30 332/288 32 
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表 2 各组织中恩诺沙星回收率与日内、日间变异系数
Table 2 Enrofloxacin recoveries and intra-day inter-day coefficients of variation in various tissues
指标
Index质量浓度
Mass concentration/
(μg·mL−1)腹足肌肉
Gastropod muscle吻管
Proboscis肝脏
LiverENR CIP ENR CIP ENR CIP 相对回收率
Relative recovery rate/%0.1 95.92 87.73 89.70 85.40 92.40 92.31 1.0 99.31 102.51 92.21 97.67 94.70 93.25 10.0 101.65 98.20 97.84 101.25 92.35 94.26 平均值 Mean 98.96 96.15 93.25 94.77 93.15 93.27 日内变异系数
Intraday coefficient of variation/%0.1 5.48 3.25 3.58 2.78 5.27 4.55 1.0 6.91 3.34 4.28 3.13 7.16 4.73 10.0 7.21 4.89 5.22 5.02 6.34 5.26 平均值 Mean 6.53 3.83 4.36 3.64 6.26 4.85 日间变异系数
Interday coefficient of variation/%0.1 6.75 3.34 5.31 6.24 6.37 5.22 1.0 7.24 5.58 4.88 7.11 6.58 3.17 10.0 7.58 6.52 6.87 3.89 8.01 3.86 平均值 Mean 7.19 5.15 5.69 5.75 6.99 4.08 注：ENR. 恩诺沙星标准品；CIP. 环丙沙星标准品；n=3。 Note: ENR. Enrofloxacin; CIP. Ciprofloxacin; n=3.
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表 3 恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在方斑东风螺体内药动学参数
Table 3 Pharmacokinetic parameters of enrofloxacin and its metabolite ciprofloxacin in B. areolate
统计矩阵模型参数
Statistical matrix model parameter组织 Tissue 腹足肌肉
Gastropod muscle吻管
Proboscis肝脏
LiverENR CIP ENR CIP ENR CIP 曲线下面积 AUC(0-t)/[mg·(L·h)−1] 133.330 25.682 183.250 28.465 439.870 49.719 AUC(0-∞)/ [mg·(L·h)−1] 133.358 25.757 183.296 28.467 439.961 49.721 平均驻留时间MRT(0-t)/h 16.904 32.092 16.110 24.497 13.476 30.890 MRT(0-∞)/h 16.993 33.327 16.216 24.838 13.565 31.045 VRT(0-t)/h2 535.747 1 138.917 415.691 537.463 419.861 802.940 VRT(0-∞)/h2 571.720 1 684.493 461.342 662.036 460.436 856.366 消除半衰期 t1/2z/h 38.218 66.623 52.436 33.109 62.403 27.060 表观分布容积 Vz/F/(L·kg−1) 8.271 74.651 8.256 33.566 4.093 15.707 总体清除率 CLz/F/[L·(h·kg)−1] 0.150 0.777 0.109 0.703 0.045 0.402 达峰浓度 Cmax/(mg·L−1) 7.820 0.723 10.500 0.893 31.470 1.211 达峰时间 tmax/h 1 4 4 12 4 4 注：ENR. 恩诺沙星标准品；CIP. 环丙沙星标准品；n=3。 Note: ENR. Enrofloxacin; CIP. Ciprofloxacin; n=3.
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表 4 恩诺沙星在方斑东风螺各组织的消除拟合方程和参数
Table 4 Fitting equations and parameters for elimination of enrofloxacin in various tissues of B. areolate
组织 Tissue 拟合方程 Fitted equation 相关系数 r2 消除半衰期 t1/2z/d 腹足肌肉 Gastropod muscle y=−0.012+8.364e−t/1.102 0.998 1.765 吻管 Proboscis y=−0.057+11.551e−t/1.241 0.975 1.873 肝脏 Liver y=−0.075+21.709e−t/1.081 0.987 1.753
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[1] VANCUTSEM P M, BABISH J G, SCHWARK W S, et al. The fluoroquinolone antimicrobials: structure, antimicrobial activity, pharmacokinetics, clinical use in domestic animals and toxicity[J]. Cornell Vet, 1990, 80(2): 173-186.
[2] 栾雅芝. 凡纳滨对虾养殖系统溶藻弧菌 (Vibrio alginolyticus)的分离与控制方法研究[D]. 青岛: 青岛理工大学, 2023: 11. [3] 席峰, 颜立立, 潘春霖, 等. 鱼类恩诺沙星药物残留风险、成因与消减技术研究进展[J]. 食品安全质量检测学报, 2023, 14(5): 155-163. doi: 10.3969/j.issn.2095-0381.2023.5.spaqzljcjs202305021 [4] 李张婵, 施慧, 许文军, 等. 大黄鱼内脏白点病病原拮抗菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 南方水产科学, 2023, 19(3): 78-87. doi: 10.12131/20220251 [5] 侯璐瑶, 杨雨航, 陈言峰, 等. 黄芩苷在水产养殖中的应用研究进展[J]. 饲料研究, 2021, 44(23): 139-142. [6] 席峰, 颜立立, 潘春霖, 等. 鱼类恩诺沙星药残消除研究进展[J]. 水产学报, 2023, 47(10): 227-247. [7] 王欢, 许荔立, 吴志新, 等. 不同温度下恩诺沙星在克氏原螯虾体内的药代动力学[J]. 华中农业大学学报, 2021, 40(1): 112-119. [8] 潘明轩, 李兆新, 邢丽红, 等. 恩诺沙星及其代谢产物在南美白对虾体内药代动力学研究[J]. 食品安全质量检测学报, 2018, 9(6): 1261-1268. doi: 10.3969/j.issn.2095-0381.2018.06.007 [9] 余开, 赵青松, 陈寅儿, 等. 恩诺沙星在三疣梭子蟹主要组织中的代谢动力学[J]. 生物学杂志, 2011, 28(4): 21-25. doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2011.04.021 [10] 方龙香, 陈曦, 黄铢玉, 等. 中华绒螯蟹不同可食部位对恩诺沙星的富集效应研究[J]. 中国渔业质量与标准, 2022, 12(1): 29-36. doi: 10.3969/j.issn.2095-1833.2022.01.004 [11] 刘洋锋. 非药品类渔药投入品中未标识农兽药筛查及其对水产养殖的影响研究[D]. 上海: 上海海洋大学, 2022: 42. [12] 黄聚杰. 六种抗菌药物在花鲈体内的药代动力学及残留消除规律[D]. 厦门: 集美大学, 2016: 19. [13] 吴少坤. 三种抗菌药物在大菱鲆体内的药代动力学及残留消除规律[D]. 厦门: 集美大学, 2018: 3. [14] 孙铭, 翟倩倩, 常志强, 等. 不同浓度磺胺二甲嘧啶对中国对虾APND、ECOD和GST活性的影响[J]. 中国海洋大学学报, 2016, 46(10): 16-23. [15] 黄聚杰, 林茂, 鄢庆枇, 等. 氟苯尼考在花鲈体内的代谢及残留消除规律[J]. 中国渔业质量与标准, 2016, 6(3): 6-13. [16] 李改娟, 刘艳辉, 戴欣, 等. 不同水温联合用药中恩诺沙星在鲤体内的药代动力学及残留的影响[J]. 吉林农业大学学报, 2017, 39(4): 471-476. [17] 张国栋. 青蒿素对斑点叉尾鮰体内恩诺沙星药代动力学及残留消除规律的影响[D]. 上海: 上海海洋大学, 2022: 29. [18] 茅玲燕. 恩诺沙星在中华草龟体内的药物代谢动力学研究[D]. 上海: 上海海洋大学, 2022: 14. [19] 董军, 张思雨, 房迪, 等. 恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在牛蛙体内的残留消除规律研究[J]. 淡水渔业, 2024, 54(1): 66-75. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2024.01.008 [20] 曹鹏. 山东省出口水产品药物残留分析及代谢动力学研究[D]. 泰安: 山东农业大学, 2012: 84. [21] 吴银宝, 廖新俤, 汪植三, 等. 兽药恩诺沙星 (enrofloxacin) 的水解特性[J]. 应用生态学报, 2006(06): 1086-1090. doi: 10.3321/j.issn:1001-9332.2006.06.025 [22] 张照荷, 陈典, 赵微, 等. 水环境中药物与个人护理品 (PPCPs) 的环境水平及降解行为研究进展[J]. 岩矿测试, 2023, 42(4): 649-666. [23] 朱凤娇. 恩诺沙星在中华绒螯蟹模拟养殖系统中的分布及其耐药性在转录水平的研究[D]. 上海: 上海海洋大学, 2017: 11. [24] 朱晓漫, 刘永涛, 杨秋红, 等. 恩诺沙星乳在罗非鱼体内的药代动力学及组织分布[J]. 淡水渔业, 2021, 51(4): 42-48. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2021.04.006 [25] 林丽聪, 樊海平, 王茂元, 等. 丁香酚在罗非鱼体内的代谢和休药期研究[J]. 渔业研究, 2020, 42(5): 486-491. [26] 张超硕. 恩诺沙星在黄河鲤鱼体内的药动学和组织分布研究[D]. 洛阳: 河南科技大学, 2022: 44. [27] 詹士立, 何欣, 陈效燕, 等. 恩诺沙星在俄罗斯鲟体内残留消除规律研究[J]. 中国渔业质量与标准, 2023, 13(1): 10-18. [28] MARTINEZ M, MCDERMOTT P, WALKER R, et al. Pharmacology of the fluoroquinolones: a perspective for the use in domestic animals[J]. Vet J, 2006, 172: 10-18 doi: 10.1016/j.tvjl.2005.07.010
[29] 秦改晓, 徐文彦, 艾晓辉, 等. 阿维菌素在草鱼体内的药物代谢动力学研究[J]. 西北农林科技大学学报, 2012, 40(8): 13-20. [30] URZÚA N, MESSINA M , PRIETO G, et al. Pharmacokinetics and tissue disposition of enrofloxacin in rainbow trout after different routes of administration[J]. Xenobiotica, 2020, 50(10): 1236-1241.
[31] XU L J, WANG H, YANG X L, et al. Integrated pharmacokinetics/pharmacodynamics parameters−based dosing guidelines of enrofloxacin in grass carp Ctenopharyngodon idella to minimize selection of drug resistance[J]. BMC Vet Res, 2013, 9: 126. doi: 10.1186/1746-6148-9-126
[32] CHEN M, ZHAO H X, WANG Y, et al. Uptake and depuration of eight fluoroquinolones FQs in common carp Cyprinus carpio[J]. Ecotox Environ Safe, 2019, 180: 202-207. doi: 10.1016/j.ecoenv.2019.04.075
[33] UNEY K, TERZI E, CORUM D D, et al. Pharmacokinetics and pharmacokinetic/pharmacodynamic integration of enrofloxacin following single oral administration of different doses in brown trout Salmo trutta[J]. Animals, 2021, 11(11): 3086. doi: 10.3390/ani11113086
[34] MORALES-GUTIÉRREZ F J, BARBOSA J, BARRÓN D, et al. Metabolic study of enrofloxacin and metabolic profile modifications in broiler chicken tissues after drug administration[J]. Food Chem, 2015, 172: 30-39.
[35] SCHMITT W. General approach for the calculation of tissue to plasma partition coefficients[J]. Toxicol Vitro, 2008, 22(2): 457-467. doi: 10.1016/j.tiv.2007.09.010
[36] ESCHER B I, SCHWARZENBACH R P, WESTALL J C, et al. Evaluation of liposome-water partitioning of organic acids and bases. 1. Development of a sorption model[J]. Environ Sci Technol, 2000, 34(18): 3954-3961.
[37] ARMITAGE J M, ARNOT J A, WANIA F, et al. Potential role of phospholipids in determining the internal tissue distribution of perfluoroalkyl acids in biota[J]. Environ Sci Technol, 2012, 46(22): 12285-12286. doi: 10.1021/es304430r
[38] TYCZKOWSKA K, HEDEEN K M, AUCOIN D P, et al. High-performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of enrofloxacin and its primary metabolite ciprofloxacin in canine serum and prostatic tissue[J]. J Chromatogr, 1989, 493(2): 337-346.
[39] INTORRE L S, CECCHINI S, BERTINI A M, et al. Pharmacokinetics of enrofloxacin in the seabass (Dicentrarchus labrax)[J]. Aquaculture, 2000, 182: 49-59. doi: 10.1016/S0044-8486(99)00253-7
[40] 范培莉, 王元, 赵姝, 等. 口灌给药恩诺沙星在斑节对虾体内的药动学和组织中的消除规律研究[J]. 海洋渔业, 2023, 45(2): 191-201. doi: 10.3969/j.issn.1004-2490.2023.02.007 [41] 王洪艳, 李兆新, 邢丽红, 等. 恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在牙鲆体内代谢消除规律[J]. 渔业科学进展, 2014, 35(3): 44-49. doi: 10.11758/yykxjz.20140307 [42] RUENNARONG N, WONGPANIT K, SAKULTHAEW C, et al. Dispositions of enrofloxacin and its major metabolite ciprofloxacin in Thai swamp buffaloes[J]. J Vet Med Sci, 2016, 78(3): 397-403. doi: 10.1292/jvms.15-0464
[43] TANG J, YANG X L, ZHENG Z L, et al. Phamacokineties and theactive metabolite of enrolloxacin in Chinese mitten-handed crab Eriocheir sinensis[J]. Aquaculture, 2006, 260: 69-76. doi: 10.1016/j.aquaculture.2006.05.036
[44] 孙维宇. 不同温度下恩诺沙星及代谢物在黄颡鱼体内的药物代谢动力学和残留消除研究[D]. 武汉: 武汉轻工大学, 2022: 1. [45] YANG F, ZHANG C S, DUAN M H, et al. Pharmacokinetics and tissue distribution of enrofloxacin following single oral administration in Yellow River carp Cyprinus carpio haematoperus[J]. Front Vet Sci, 2022, 9: 822032. doi: 10.3389/fvets.2022.822032
[46] 牛曰华, 张天闻, 邹红梅, 等. 恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在大黄鱼体内的代谢动力学[J]. 中国渔业质量与标准, 2018, 8(1): 24-33. doi: 10.3969/j.issn.2095-1833.2018.01.004 [47] 李亚男, 孟小宾, 王丹, 等. 基于生理药动学模型预测口服给药后氟苯尼考在肉鸡体内的残留[J]. 中国家禽, 2014, 36(14): 17-21. doi: 10.3969/j.issn.1004-6364.2014.14.005 [48] 刘志刚, 彭景书, 曹跃明等著. 东风螺健康养殖与质量安全管理[M]. 北京: 中国农业出版社, 2011: 1. [49] 王江勇, 王瑞旋, 苏友禄, 等. 方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究[J]. 南方水产科学, 2013, 9(5): 93-99. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.05.015 [50] 辜良斌, 徐力文, 冯娟, 等. 豹纹鳃棘鲈尾部溃烂症病原菌的鉴定与药敏试验[J]. 南方水产科学, 2015, 11(4): 71-80. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.04.011 [51] 凌海, 缪天音, 王元, 等. 模拟养殖系统药饵给药后恩诺沙星在异育银鲫体内、水体和底泥中代谢与分布[J]. 水产学报, 2023, 47(5): 162-171.
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