Extraction process of intestinal lipid droplets and lipid droplet-related proteins from tilapia
-
摘要: 动植物中的脂质以脂滴 (Lipid droplet, LD) 的形式存在。掌握脂滴及脂滴相关蛋白 (Lipid droplet related protein, LDRP) 的提纯方法，对解析鱼类脂质变化及影响机制，寻求适宜的调控途径至关重要。以罗非鱼 (Oreochromis niloticus) 的肠系脂肪组织为原料，利用离心、重悬及增溶等处理手段分离纯化脂滴及LDRP，并结合SDS-PAGE和质量浓度变化分析提纯效果。结果表明，肠系脂肪组织经3次离心和3次重悬可有效去除杂质，获得较为纯净的脂滴。虽然溶解剂增溶提取的LDRP蛋白浓度较高，但电泳条带存在明显拖尾现象，说明脂质脱除效果不佳，影响了LDRP提取纯度。脱脂增溶需经4组有机溶剂联合处理才可获得纯度高、复溶效果好的LDRP提取样品。离心、干燥方式及脂滴冷冻对LDRP增溶影响差异不显著。Abstract: Lipids in animals and plants exist in the form of lipid droplet (LD). It is very important to master the purification methods of lipid droplet and lipid droplet related protein (LDRP) for understanding the lipid changes and influence mechanisms of fish, and seeking appropriate regulatory approaches. In this paper, the lipid droplet and LDRP were separated and purified through centrifugation, resuspension and solubilization by using Oreochromis niloticus intestinal tissues as raw material. The results show that the intestinal adipose tissues were effectively removed by three times of centrifugation and three times of resuspension to obtain the pure lipid droplet. Although the concentration of LDRP protein extracted by solubilization was higher, the electrophoretic bands showed an obvious trailing phenomenon, indicating that the effect of lipid removal was poor, which affected the purity of LDRP extraction. Delipidation and solubilization need to be combined with four groups of organic solvents to obtain the LDRP extracted samples with high purity and good re-solubilization effects. The effects of centrifugation drying method and lipid droplet freezing on LDRP solubilization were not significantly different.
-
Keywords:
- Oreochromis niloticus /
- Lipid droplet /
- Lipid droplet-related protein /
- Extraction
-
气候的变化、异常以及振荡驱动着海洋环境因子的变化，从而影响海洋生态系统的生命活动及过程[1]。厄尔尼诺南方涛动 (El Niño Southern Oscillation, ENSO) (包括厄尔尼诺和拉尼娜事件) 起源于赤道太平洋，是太平洋海域气候变化的最强信号，具有年际变动周期[2]，其基本特征是西太平洋暖池的地带性位移以及大气对流，导致了整个太平洋海盆物理性质和生态系统的改变；具体表现为对各种海洋环境参数的影响，包括海表面温度 (Sea surface temperature, SST)、叶绿素a浓度 (Chl-a) 等，以及对由海洋顶级捕食者 (如金枪鱼) 共同构成的相互关联的海洋生态系统的影响[1,3-4]。
鲣 (Katsuwonus pelamis) 广泛分布于各大洋的热带、亚热带海域[5]，中西太平洋热带海域是世界上最大的鲣渔场[6-7]。因而，研究中西太平洋鲣资源的时空分布对掌握渔业生产规律和开发鲣资源尤为重要。鲣种群按集群特点进行划分，可分为自由鱼群 (Free swimming school, FSC) (亦称起水群)、流木鱼群 (Log school) 以及鲸豚附随群 (Marine mammal associated school) 3类[8]；流木鱼群中亦包括人工集鱼装置 (Fish aggregation device, FAD) 鱼群。自20世纪80年代以来，FAD开始被广泛运用于鲣的围网作业中，是一种高效的捕捞模式[9]，但捕捞副渔获物 [非目标种类的幼年大眼金枪鱼 (Thunnus obesus) 以及黄鳍金枪鱼 (T. albacares)等] 严重的问题随之而来[10]。为此，中西太平洋海域的瑙鲁协定方 (Parties to nauru agreement, PNA) 制定了相关海洋管理政策以限制和减少FAD的使用[11]。相较于前者，自由鱼群的个体较大，偏好聚集于浅水层[12]，且围网渔获物中兼捕物种少，但由于其高速游动的特性，捕捞难度较大[13]。因此，掌握围网鲣自由鱼群的时空分布特性，对于集中捕捉该种群以降低对漂浮物鱼群捕捉的依赖，从而并提高渔业生产效率具有积极作用，对保护金枪鱼的栖息环境与种群结构也具有重要意义[14]。
海洋鱼类资源的时空分布极易受海洋环境因子影响，掌握其时空分布有利于鱼类资源的合理开发和利用。鲣的分布模式受海表面温度影响显著[15]，已有研究普遍发现鲣资源主要分布在海表温度28~30 ℃的海域[16-17]，因而该温度区间可作为研究鲣资源时空分布变动的一项参考指标[18]。Lehodey等 [19]研究发现鲣作业渔场随暖池边缘(即与29 ℃等温线重合)发生了空间偏移。同时，气候变化在时空尺度上影响着海洋鱼类的分布模式，李政纬[17]指出，29 ℃等温线东界会受厄尔尼诺与南方涛动影响，进而影响鲣围网渔场的经向分布。受ENSO影响，鲣渔场与暖池的时空分布变动具有相同趋势[19-20]：即厄尔尼诺事件时，渔场重心随暖池东移；拉尼娜事件时，渔场重心随暖池西移[21]。因此，将暖池变动作为研究围网鲣自由鱼群时空分布的参考指标，能够探究鲣渔场的时空分布特性，更好地进行集中、高效的渔业生产活动，为其资源开发提供科学依据。已有研究仅对历史渔场重心与极端气候指标(如南方涛动指数、海表温异常指数)的关系进行了探讨[22-24]，而忽略了暖池相关物理海洋指标空间变动而导致的渔场重心变化，其中包括暖池重心处多出现高产量的鲣围网渔场[25]，以及暖池右边缘经向扩展而具有的潜在东部栖息地[26]。本研究以29 ℃等温线作为暖池边界，针对围网鲣自由鱼群的渔场重心与暖池相关指标进行相关性分析，并基于不同的气候模式下探究其时空分布变动之间的关系。
1. 材料与方法
1.1 数据来源
中西太平洋围网鲣渔业生产数据来源于中西太平洋渔业委员会 (Western and Central Fisheries Commission,WCPFC)，数据包括作业日期、作业位置 (经纬度)、捕捞努力量、自由鱼群的渔获量等信息。其中时间跨度为1995—2019年，空间范围为120°E—150°W、20°S—20°N，空间分辨率为5°×5°，样本数共计7 721个。海洋环境数据为SST，来自哥伦比亚大学气候数据实验室网站 (http://iridl.ldeo.columbia.edu)，空间分辨率为0.5º×0.5°，时间分辨率为月。同时选取1995—2019 年美国国家海洋与大气管理局气候预测中心 (https://origin.cpc.ncep.noaa.gov) 的Nino 3.4区域 (170°W—120°W、5°N—5°S) 的平均海温距平作为海洋尼诺指数 (OceanicNiño Index, ONI)，其中ONI值介于 ±0.5为正常气候模式，大于0.5发生厄尔尼诺事件，小于 −0.5发生拉尼娜事件。
1.2 研究方法
1.2.1 重心计算
渔业研究中，资源丰度指数通常用于量化渔业中种群丰度的时空变化，如单位捕捞努力量渔获量 (Catch per unit effort, CPUE) 和渔获量[27]。由于现代商业渔业的复杂性，常用的CPUE可能无法作为所有物种资源丰度指数的合理表征[28]，因此将二者均纳入考虑来量化围网鲣自由鱼群的时空分布，进而与暖池相关指标进行比较分析，为围网鲣自由鱼群的渔业生产和资源开发提供借鉴。渔获量大小常用于直接表示渔业的资源丰度，而CPUE大小常被认为与渔业资源丰度成正比[29]，因而可作为表示其局部资源丰度的指标[30]。
本研究对1995—2019年间的渔场重心进行分析计算，作为研究其渔场时空分布变化的描述标准，通过使用渔场重心法来描述中西太平洋围网鲣自由鱼群 (以下简称自由鱼群) 的时空分布变化，环境因子SST的重心计算同理。由于鲣渔场与暖池变动间多为经向变化，因而仅对经向维度进行考虑，渔场重心计算范围与原始数据的空间范围 (120°E—150°W、20°S—20°N) 一致，同时为更准确地说明中西太平洋暖池的重心变化，在计算各项指标的重心时，本研究中的海域范围聚焦于110°E—80°W、45°S—45°N，公式如下[31]：
$$ {G}_{{\rm{CPUE}}}=\frac{\sum _{i}^{n}({{{E}}}_{i}\times {{{L}}}_{i})}{\sum _{i}^{n}{{{E}}}_{i}} $$ (1) $$ {G}_{{\rm{Catch}}}=\frac{\sum _{i}^{n}({{{C}}}_{i}\times {{{L}}}_{i})}{\sum _{i}^{n}{{{C}}}_{i}} $$ (2) $$ {G}_{{\rm{SST}}}=\frac{\sum _{i}^{n}({{{S}}}_{i}\times {{{L}}}_{i})}{\sum _{i}^{n}{{{S}}}_{i}} $$ (3) 式中：GCPUE、GCatch分别为自由鱼群渔场两种资源丰度指标的重心经度 (以下简称CPUE重心和Catch重心)；GSST为 SST重心的经度 (以下简称暖池重心经度)；
$ {{E}}_{i} $ 为单位捕捞努力量渔获量；$ {{C}}_{i} $ 为捕捞产量渔获重心；$ i $ 表示经度，$ {{L}}_{i} $ 为第$ i $ 经度的重心经度；Si为第i经度的温度重心。暖池的右边缘通过自中西太平洋西部海盆起选取连续的29 ℃等温线右边缘的经度，记作RSST。
1.2.2 统计方法
采用皮尔森相关性分析[32]，对暖池指标 (暖池重心经度、暖池右边缘经度) 与渔场资源丰度重心经度以及气候环境指标ONI指数进行相关性分析。相关性在0.1~0.3为弱相关性，0.3~0.5间为中度相关性，大于0.5为强相关性；P<0.05表示相关，P<0.01为显著相关，P<0.001为极显著相关，P>0.05则表示相关性不显著。
1.2.3 不同气候模式下鲣资源空间分布
建立不同气候模式 (正常气候模式、厄尔尼诺年份、拉尼娜年份等) 下自由鱼群与暖池间的时空分布图，进一步说明不同气候模式下二者之间的空间相对位置及关系。
2. 结果
2.1 气候变化下暖池指标与鲣资源重心的关系
通过ONI指数对气候变化进行量化，并且采用皮尔森检验对暖池相关指标重心及右边缘、渔场资源丰度重心以及ONI指数进行相关性检验，发现其在统计学上均呈极显著相关性 (图1)。结果显示，渔场资源丰度重心指标，包括渔获量经向重心GCatch与单位捕捞努力量渔获量经向重心GCPUE，二者与暖池经向重心呈中度相关性，其中GCPUE的相关性值略高于GCatch。而在与暖池右边缘进行相关性检验时，GCatch与GCPUE同其呈弱相关性，GCPUE表现仍稍高于GCatch。在渔场资源丰度重心指标与海洋尼诺指数的相关性检验上，GCatch、GCPUE与之均呈中度相关性，此时GCatch表现略高于GCPUE。除主要研究渔场经向重心外，将暖池指标与海洋尼诺指数进行相关性检验，结果表明暖池经向重心GSST和暖池右边缘RSST与之呈强相关性，其中GSST与之相关性值达0.79，RSST为0.68。所有指标间的P均小于0.001，表现为极显著相关性。
资源丰度的表征在渔业研究中尤为重要[28]，经皮尔森相关性检验得出，CPUE与暖池指标间在相关性表现上相较Catch更优。此外，CPUE的计算避免了直接使用渔获量，而未纳入捕捞努力量的影响[33]；因此，可选用CPUE作为围网鲣自由鱼群与暖池指标关系研究的资源丰度指标。
2.2 暖池指标与鲣资源重心的年际变化趋势
将各项指标的经向变化随年月变化进行对比，探究在不同气候条件下，渔场重心经向与暖池指标变动的时空分布变化 (图2)。结果表明，渔场重心指标间的经向年际变化基本一致，GCPUE与暖池指标的相关性表现优于GCatch，因而以下研究均以GCPUE的经向变动进行探究。各项重心经向指标大多集中分布于140°E 以东、180°以西海域，其中GCPUE与GSST主要分布在160°E经线两端，而RSST大多分布在180°以东 (图2-a)。GCPUE、GSST与RSST随海洋尼诺指数的变动而发生变化 (图2-b)。多数情况下，当发生厄尔尼诺事件 (ONI>0.5)时，GCPUE与GSST东移越过160°E，同时RSST向东移动，如1997年的6—10月等；发生拉尼娜事件 (ONI<−0.5)时，GCPUE 与GSST则分布在160°E以西海域，同时RSST向西移动，如1995年8月—1996年3月等。暖池指标GSST与RSST间的经向变动关系随时间变化基本呈相同趋势。
GCPUE与GSST在经向上的变动趋势不完全相同。1995年1—4月、2003年1—4月、2007年1—5月和2016年1—5月等均为GSST在GCPUE以东，且经向变动趋势显著相反，而此时均为由发生厄尔尼诺事件向正常气候模式 (−0.5<ONI<0.5) 转变的月份。当GSST在GCPUE以西且经向变动趋势相反时，如1998年6—12月、1999年5—12月和a2010年6—12月等，此时正发生强烈的拉尼娜事件，受厄尔尼诺事件影响，GSST多位于GCPUE以东，但此时经向的变动趋势基本相同，如1997年6月—1998年4月、2015年6—12月等。GCPUE与RSST之间关系和GSST一致。
2.3 不同气候模式下自由鱼群的分布
为探明上述不同气候模式下，自由鱼群与暖池间的时空分布关系，选取其中个别月建立时空分布 (图3)。拉尼娜事件选取2010年的11—12月，正常气候模式选取2013年11—12月，厄尔尼诺事件选取2015年11—12月，而厄尔尼诺事件转变为正常年份事件的特殊气候模式选取2016年4—5月。
![]()
图 3 不同气候模式下CPUE与暖池的时空分布注：a、b为拉尼娜气候模式；c、d为正常气候模式；e、f为厄尔尼诺气候模式；g、h为厄尔尼诺气候模式向正常气候模式转变。Figure 3. Spatial-temporal distribution of CPUE and warm pool under different climate modesNote: (a) and (b) are the La Niña climate modes; (c) and (d) are the normal climate modes; (e) and (f) are the El Niño climate modes; (g) and (h) are the climate modes shifting from the El Niño to the normal.与ENSO相关的指标的位移发生在整个中西太平洋，发生拉尼娜事件时 (2010年11—12月)，暖池面积最小，右边缘东部抵达距离最短，接近于180°经线，此时CPUE的分布均位于180°经线以西，且集中于太平洋西部美拉尼西亚群岛海域。当正常年份时 (2013年11—12月)，暖池右边缘的位置相较拉尼娜事件时向东偏移，CPUE越过180°以东且少量分布。发生厄尔尼诺事件时 (2015年11—12月)，CPUE的分布随暖池右边缘位置的东移而向东扩展。此外，一个特殊的气候模式变化应当被纳入考虑，即厄尔尼诺事件转变为正常年份事件 (2016年4—5月)，此时暖池右边缘向西收缩，但CPUE的分布仍向东扩展，而相较于厄尔尼诺事件时在热带海域的均匀分布，此时仅在180°以东少量分布，且CPUE的大小和数量均下降。在所有的气候模式下，暖池右边缘均位于自由鱼群以东位置，自由鱼群基本均匀分布于暖池范围内，也同样说明了二者之间的紧密联系。
3. 讨论
不同类型的ENSO事件通过驱动暖池的空间位移从而改变区域内的海洋环境因子，进一步驱动海洋生态系统及其内部物种资源的响应[34]。 位于中西太平洋的暖池是ENSO的基本构成要素[15]，其表面积及位置随ENSO事件的变化而改变[13,35]；即厄尔尼诺事件时，暖池的面积增大，东移到达太平洋中部海域；拉尼娜事件时，暖池的面积减小，西移到西太平洋海盆区域。从暖池指标(本研究中指暖池重心与暖池右边缘)的时空变化入手，可为研究围网鲣自由群对ENSO事件的响应提供依据。鲣的资源丰度以及空间分布受海洋环境因子影响[36]，而海表温度对鲣资源状态的时空分布具有更显著的影响[37]，在本研究中具体表现为资源丰度的大小及重心的空间分布随29 ℃海表温度场的影响而变化。由于ENSO驱动海表温度变化，受其影响，具有高度洄游的鲣自由鱼群会在沿海生态系统和公海海域之间移动[38]。Williams和Ruaia[39]指出，ENSO事件对鲣围网活动空间分布的影响表现为，在厄尔尼诺年份，捕捞活动通常进一步向东扩展，在拉尼娜期间，捕捞活动向西部地区收缩，与本研究的发现(图3)基本一致。捕捞作业活动的变动同暖池变动规律相同，而渔场重心可以表征捕捞作业活动空间的集中分布程度，但渔场重心与暖池间的协同关系也存在着特异性。受ENSO影响，暖池重心的空间变异程度 (变异系数Coefficient of variation，CV= 5.012) 要强于渔场重心 (CV = 2.523)的变化 (图2)，即表现为厄尔尼诺事件时暖池重心位于渔场重心东部，而当拉尼娜事件时暖池重心位于渔场重心西部。这可能是由于受捕捞作业方式影响，围网鲣自由鱼群的渔场重心相较于暖池受气候以及环境变化影响小[40]。此外，自由鱼群多是体型较大的成年鲣，需寻求适宜的温度环境作为首选栖息地和合适的产卵地，厄尔尼诺事件会导致海表温度升高，温跃层变浅(温跃层是富含营养物质的混合层上下界之间交换的障碍)，营养物质更容易向混合层转移，从而促使深层营养盐在海表扩散，形成具有良好饵料的栖息环境[41]。然而强烈厄尔尼诺事件时，温度过高导致暖池的长距离东扩，抑制了鲣在热带中西太平洋的产卵活动[21]；但并未导致渔场范围相应东扩，反而此时在太平洋中部的岛国 (如基里巴斯群岛) 的围网渔获量更高，分布更集中。
而对于厄尔尼诺转变为正常年份这一特殊气候模式的变化，即暖池重心与渔场重心的变化趋势显著相反 (暖池重心向西移动而渔场重心仍向东)，可能由于暖池场的西移，导致了适宜的温度范围增大，以便于鲣适宜栖息地的形成。陈洋洋和陈新军 [23]研究得出，Nino3.4海区指数对CPUE的影响滞后0~2个月，这可能也是造成渔场重心和暖池重心之间变化不同步的原因。此外，暖池的东扩也与温跃层变浅，以及更强于平时的西太平洋信风有关，从而导致赤道西太平洋的初级生产力增加[42]。因此，位于140°E—160°E的所罗门群岛和巴布亚新几内亚的资源丰度在厄尔尼诺现象结束后有所增加，以应对鲣捕捞量的增加以及栖息地收缩的现象，这也进一步解释了渔场重心与暖池重心之间变化的不同步。
本研究对围网鲣自由鱼群的渔场指标，以及暖池指标在不同气候模式下的时空分布变化进行探究发现，通过研究暖池重心的变化可以很好地探索及预测渔场重心变化的规律。而通过构建暖池场与自由鱼群资源丰度的时空分布关系发现，暖池右边缘的范围能够很好地与自由鱼群的空间分布联系起来，可为商业性捕捞围网鲣自由鱼群提供渔场边界的指示，也可为今后研究鲣渔场的分布范围提供一项有利参考。
本研究对不同资源丰度指标对围网鲣自由鱼群的表征的影响进行了研究，但选取的均为名义上的资源丰度指标 (名义的CPUE)，而未对CPUE进行标准化 (以消除人为捕捞等因素对资源丰度的影响)，可能会造成研究结果具有一定误差。且仅研究了自由鱼群对暖池指标的响应关系，未与由人工集鱼装置捕捞获得的流木鱼群进行对比。在未来研究中，将对不同集群种类的鲣对暖池响应的差异性进行更细致的研究，以期为中西太平洋的鲣围网作业提供更丰富详尽的科学依据。
-
![]()
图 1 肠系脂肪组织脂滴提取过程
Figure 1. Extraction process of lipid droplet in intestinal adipose tissue
![]()
图 2 肠系脂肪组织学观察
Figure 2. Histological observation of tilapia's mesenteric adipose tissue
![]()
图 6 溶解剂增溶和脱脂增溶的LDRP质量浓度
Figure 6. LDRP's mass concentration of solubilization by solubiliser and delipidation and solubilization
![]()
图 8 离心和干燥方式对脱脂增溶的影响
Figure 8. Effects of centrifuge and drying method on delipidation and solubilization
-
[1] 林剑军, 赵文红, 刘巧瑜, 等. 脂质水解氧化对干腌鱼制品风味影响的研究进展[J]. 食品工业, 2021, 42(9): 206-210. [2] OKPALA C O R, BONO G. Lipid autoxidation in fishery products postharvest: is cold to freezing oxygen-free packaged storage the better remedy?[J]. Lipid Technol, 2016, 28(7): 122-125. doi: 10.1002/lite.201600034
[3] 韩迎雪, 林婉玲, 杨少玲, 等. 15种淡水鱼肌肉脂肪含量及脂肪酸组成分析[J]. 食品工业科技, 2018, 39(20): 217-222. [4] 柯欢, 李慧, 熊伟, 等. 白乌鱼与罗非鱼肉的营养物质比较分析[J]. 农产品加工, 2020(1): 47-49. [5] 庞永佳, 翟桂影, 李瑞, 等. 脂滴包被蛋白的结构、功能及其与脂类疾病关联的研究进展[J]. 中国畜牧杂志, 2021, 57(6): 59-67. [6] 彭玥晗, 徐磊, 许金蔓, 等. 脂滴包被蛋白基因对猪肌肉发育的影响[J]. 畜牧兽医杂志, 2019, 38(3): 28-30. [7] SHIVAIAH K K, SUSANTO F A, DEVADASU E, et al. Plastoglobule lipid droplet isolation from plant leaf tissue and cyanobacteria[J]. J Vis Exp, 2022: 188. doi: 10.3791/64515
[8] 罗玉珍, 韩海军, 陈敏, 等. 脂滴包被蛋白Plin5参与调节脂代谢和线粒体功能[J]. 生命的化学, 2020, 40(8): 1279-1288. [9] SINGH A, SEN P. Lipid droplet: a functionally active organelle in monocyte to macrophage differentiation and its inflammatory properties[J]. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids, 2021, 1866(10): 158981.
[10] WILFLING F, WANG H J, HAAS J T, et al. Triacylglycerol synthesis enzymes mediate lipid droplet growth by relocalizing from the ER to lipid eroplets[J]. Dev Cell, 2013, 24(4): 384-399.
[11] DEJGAARD S Y, PRESLEY J F. New method for quantitation of lipid droplet volume from light microscopic images with an application to determination of pat protein density on the droplet surface[J]. J. Histochem Cytochem, 2018, 66(6): 447-465. doi: 10.1369/0022155417753573
[12] 徐冲, 何金汗, 徐国恒. 脂滴包被蛋白 (perilipin) 调控脂肪分解[J]. 生理科学进展, 2006(3): 221-224. [13] 刘梅芳, 徐国恒. PAT家族蛋白在细胞内脂滴代谢过程中的作用[J]. 生理科学进展, 2006(2): 103-107. [14] YAN Z H, ZHAO L P, KONG X Z, et al. Behaviors of particle size and bound proteins of oil bodies in soymilk processing[J]. Food Chem, 2016, 1866(10): 881-890.
[15] 钟艳花, 林重, 钟映芹, 等. 厚朴酚对脂肪酸诱导HepG2细胞脂质积蓄的作用及机制研究[J]. 山西中医药大学学报, 2021, 22(3): 171-177. [16] MURPHY D. The biogenesis and functions of lipid bodies in animals, plants and microorganisms[J]. Prog Lipid Res, 2001, 40(5): 325-438. doi: 10.1016/S0163-7827(01)00013-3
[17] BHATLA S C, VANDANA S, KAUSHIK V. Recent developments in the localization of oil body-associated signaling molecules during lipolysis in oilseeds[J]. Plant Signal Behav, 2009, 4(3): 176-182. doi: 10.4161/psb.4.3.7799
[18] 刘芳, 邢颖, 相金柱, 等. 猪早期孤雌胚胎脂滴含量和脂肪酸代谢相关基因表达的初步研究[J]. 内蒙古大学学报(自然科学版), 2019, 50(4): 387-396. [19] ABDULSAMIE H, MOUHNAD S, MURPHY D J. Functional involvement of caleosin/peroxygenase PdPXG4 in the accumulation of date palm leaf lipid droplets after exposure to dioxins[J]. Environ Pollut, 2021, 281: 116966. doi: 10.1016/j.envpol.2021.116966
[20] MARTA B, ALBERT P. Eukaryotic lipid droplets: metabolic hubs, and immune first responders[J]. Trends Endocrinol, 2022, 33(3): 218-229. doi: 10.1016/j.tem.2021.12.006
[21] CHITRAJU C, FISCHER A W, FARESE R V, et al. Lipid droplets in brown adipose tissue are dispensable for cold-induced thermogenesis[J]. Cell Rep, 2020, 33(5): 108348. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108348
[22] YOVANNY I, RUBÉN F S, TOMÁS C, et al. Lipid droplet isolation from arabidopsis thaliana leaves[J]. Bio Protoc, 2020, 10(24): e3867. doi: 10.21769/BioProtoc.3867
[23] TIAN J J, ZHANG J M, YU E M, et al. Identification and analysis of lipid droplet-related proteome in the adipose tissue of grass carp (Ctenopharyngodon idella) under fed and starved conditions[J]. Comp Biochem Physiol D, 2020, 36: 100710.
[24] 闫峻, 马衍旋, 穆淑琴, 等. 猪骨骼肌肌内脂滴分离和纯化方法的探究[J]. 动物营养学报, 2019, 31(1): 266-273. [25] DING Y F, ZHANG S Y, YANG L, et al. Isolating lipid droplets from multiple species[J]. Nat Protoc, 2013, 8(1): 43-51. doi: 10.1038/nprot.2012.142
[26] 崔留娟. 棕色脂肪组织脂滴和线粒体相互作用的研究[D]. 合肥: 中国科学技术大学, 2019: 31. [27] MIRZA A H, CUI L J, ZHANG S Y, et al. Comparative proteomics reveals that lipid droplet-anchored mitochondria are more sensitive to cold in brown adipocytes[J]. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids, 2021, 1866(10): 158992.
[28] BRASAEMLE D L, WOLINS N E. Isolation of lipid droplets from cells by density gradient centrifugation[J]. Curr Protoc Cell Biol, 2016, 72: 3.15.1-3.15.13. doi: 10.1002/cpcb.10
[29] 郭玉. 骨骼肌与脂肪组织细胞中脂滴表面蛋白的差异分析与鉴定[D]. 武汉: 华中农业大学, 2019: 19-21. [30] HUANG T, BAMIGBABE A T, XU S M, et al. Identification of noncoding RNA-encoded proteins on lipid droplets[J]. Sci Bull, 2021, 66(4): 314-318. doi: 10.1016/j.scib.2020.09.022
[31] 王雅文. 罗非鱼脂肪组织和脂肪细胞的代谢生理特性研究[D]. 上海: 华东师范大学, 2017: 27. [32] 林婉玲, 关熔, 曾庆孝, 等. 彩鲷和普通罗非鱼不同部位营养及质构特性的研究[J]. 现代食品科技, 2011, 27(1): 16-21, 49. [33] 王来亮, 周芳芳, 黄璐璐, 等. 应用iTRAQ技术联合PRM验证技术筛选肝硬化患者急性肾损伤的早期预测生物标志物[J]. 现代实用医学, 2021, 33(4): 440-442. [34] 李科, 魏义勇, 刘云, 等. Nycodenz密度梯度离心法提取及纯化大鼠心肌线粒体[J]. 遵义医学院学报, 2016, 39(5): 525-528. [35] 黄靖娴. 超速离心机技术原理与操作维护注意事项[J]. 科技创新与应用, 2018, 36: 130-132. [36] JOLIVET P, BOULARD C, BELLAMY A, et al. Oil body proteins sequentially accumulate throughout seed development in Brassica napus[J]. J Plant Physiol, 2011, 168(17): 2015-2020. doi: 10.1016/j.jplph.2011.06.007
[37] DING Y F, LI Y, ZHANG S Y, et al. Identification of the major functional proteins of prokaryotic lipid droplets[J]. J Lipid Res, 2012, 53(3): 399-411.
[38] 蔡立鹏, 康娜, 谭金玲, 等. 脂滴与胞内细胞器互作研究进展[J]. 中国细胞生物学学报, 2022, 44(5): 964-972. [39] 张来福, 尹云厚. 脂滴的生物物理学和细胞生物学研究[J]. 现代农业科技, 2019, 11: 90-93. [40] 王丽娜, 权春善, 许永斌, 等. 利用表面活性剂介导的方法制备 AgrC 蛋白脂质体[J]. 化学学报, 2014, 72(2): 233-240. [41] 林爱华, 孙小梅, 李步海. 表面活性剂对蛋白质变性作用的研究[J]. 中南民族大学学报(自然科学版) 2002, 21(1): 21-24. [42] 杨小刚. 原油乳状液冻融稳定性的研究[D]. 天津: 天津大学, 2009: 15-18. [43] 王亚娟, 范亚苇, 李静, 等. 不同辅助法对冻融破乳提取油茶籽油的影响[J/OL]. 中国油脂, 2022. https://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1099.ts.20220407.0911.001.html. [44] 卢浩, 刘懿谦, 代品一, 等. 油水强化分离技术[J]. 化工进展, 2020, 39(12): 4954-4962. [45] 叶元土. 提升淡水养殖鱼类食用质量的技术集成与创新[J]. 饲料工业, 2022, 43(10): 1-11. [46] 罗强, 闫峻, 李宁, 等. 动物脂滴结构及功能研究进展[J]. 家畜生态学报, 2022, 43(2): 1-7. doi: 10.3969/j.issn.1673-1182.2022.02.001 [47] 黎渊弘, 罗艳萍, 廖共山. 短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的酶学性质研究[J]. 重庆医科大学学报, 2010, 35(11): 1639-1641. [48] 田鑫, 汪之和, 施文正, 等. 南极磷虾体内胰蛋白酶的纯化及性质研究[J]. 上海海洋大学学报, 2014, 23(5): 741-747. [49] PERBELLINI F, LIU A K L, WATSON S A, et al. Free-of-Acrylamide SDS-based Tissue Clearing (FASTClear) for three dimensional visualization of myocardial tissue[J]. Sci Rep, 2017, 7(1): 5188. doi: 10.1038/s41598-017-05406-w
[50] LAI M J, LI X W, LI J, et al. Improved clearing of lipid droplet-rich tissues for three-dimensional structural elucidation[J]. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 2017, 49(5): 465-467. doi: 10.1093/abbs/gmx018
[51] 岳红卫, 韩富亮. 酿酒酵母蛋白提取工艺优化[J]. 食品工业科技, 2015, 16: 304-306. [52] 罗志刚, 杨欢, 齐亮. 生物表面活性剂鼠李糖脂性质的研究[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2022, 50(1): 30-37. [53] 柳青海, 张唐伟, 李天才. 肝蛋白提取纯化及应用研究进展[J]. 贵州农业科学, 2011, 39(2): 161-164. [54] 王世宽, 于海光, 许艳丽. 叶蛋白提取方法的比较及发酵酸法的应用前景[J]. 生物技术, 2010, 20(1): 94-96. -
期刊类型引用(2)
1. 巫旗生，宁岳，祁剑飞，郭香，罗辉玉，曾志南，葛辉. 和蔼巴非蛤人工育苗及稚贝培育技术. 福建农业科技. 2024(10): 9-14 . 
百度学术
2. 杨凌，刘一鸣，徐炳杰，王超奇，吴韬，邢清淦，裴琨，韦朝民，曾尚伟，潘英. 钝缀锦蛤在北海、防城港、钦州海区的中培与养成实验. 南方水产科学. 2023(06): 38-50 . 本站查看
其他类型引用(1)
下载:
计量
- 文章访问数: 723
- HTML全文浏览量: 134
- PDF下载量: 44
- 被引次数: 3
粤公网安备 44010502001741号
