Effect of Haematococcus pluvialis on growth performance, antioxidant capacity and immune responses of Lates calcarifer
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摘要: 雨生红球藻 (Haematococcus pluvialis) 富含天然虾青素等活性物质，为评价其在尖吻鲈 (Lates calcarifer) 饲料中的应用效果，采用雨生红球藻添加量分别为0 (C)、0.2% (H1)、0.4% (H2)、0.6% (H3)、0.8% (H4) 和1.0% (H5) 的6组饲料，投喂尖吻鲈56 d。结果表明，H2、H3、H4和H5组尖吻鲈特定生长率和增重率均显著大于对照组 (P<0.05)；其中H3、H4和H5组全鱼粗脂肪含量均显著低于对照组 (P<0.05)；H2、H3、H4和H5组总抗氧化能力 (T-AOC) 显著高于对照组 (P<0.05)，H2、H3、H4和H5组的过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 活性显著低于对照组 (P<0.05)，处理组的丙二醛 (MDA) 浓度显著低于对照组 (P<0.05)；H3、H4和H5组实验鱼红细胞数 (RBC) 和血红蛋白 (Hb) 浓度显著高于对照组 (P<0.05)，H2、H3、H4和H5组的总胆固醇 (TCHO) 和甘油三酯 (TG) 浓度显著低于对照组 (P<0.05)，H3、H4和H5组的低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 浓度显著低于对照组 (P<0.05)；H2、H3、H4和H5组的溶菌酶 (LZM) 活性和免疫球蛋白M (IgM) 浓度显著高于对照组 (P<0.05)，H3、H4和H5组的补体4 (C4) 浓度显著高于对照组 (P<0.05)。回归分析结果表明，以增重率为目标，尖吻鲈饲料中雨生红球藻的最适添加量为0.66%。Abstract: Haematococcus pluvialis is enriched in astaxanthin. To investigate its effects in the diet of Lates calcarifer, we fed L. calcarifer by six diets containing 0 (C), 0.2% (H1), 0.4% (H2), 0.6% (H3), 0.8% (H4) and 1.0% (H5) H. pluvialis for 56 d. The results show that the specific growth rate (SGR) and weight gain rate (WGR) in H2, H3, H4 and H5 groups were significantly higher than those of the control group (P<0.05). Compared with the control group, the whole-body lipid protein content decreased significantly in the treatment groups (P<0.05). The dietary H. pluvialis improved the total antioxidant capacity (T-AOC) significantly (P<0.05), while the superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) activities and malondialdehyde (MDA) content were significantly lower than those of the control group (P<0.05). Compared with the control group, the concentrations of red blood cell (RBC), hemoglobin (Hb) and complement 4 (C4) increased (P<0.05) in H3, H4 and H5 groups, but the concentration of low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) decreased significantly (P<0.05). Compared with the control group, the concentrations of cholesterol (TCHO) and triglyceride (TG) decreased significantly (P<0.05), but the lysozyme (LYZ) activity and immunoglobulin (IgM) concentration increased significantly (P<0.05). The regression analysis on the WGR indicates that the recommended optimum dietary H. pluvialis level for the growth of L. calcarifer is 0.66%.
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Keywords:
- Haematococcus pluvialis /
- Lates calcarifer /
- Growth performance /
- Immune responses
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黑素皮质素受体(melanocortin receptors, mcrs)是黑素细胞皮质激素(melanocortin, mc)参与多种调控和发挥功能的重要受体[1-2]。该受体家族属于G蛋白偶联受体 (GPCR)，含有7个跨膜α螺旋结构[3]，该家族包含了5种类型的基因，分别是MC1R、MC2R、MC3R、MC4R和MC5R[4]。Mcrs功能多样，在色素沉淀[5]、脂质和能量代谢[6]、摄食[7-9]等方面均起到重要作用。MC5R参与脂质代谢和外分泌功能等过程，MC5R基因在人体内普遍存在，在卵巢、乳腺、肾脏、脂肪细胞、肝脏和骨髓中均有表达，但MC5R在皮肤中的表达最高[10-11]。研究表明MC5R对肌肉和肝脏中的脂质代谢有调节作用[12]，在人的皮脂细胞开始分化的时候表达较高，因此也可以作为人类皮脂细胞分化的标志性物质[13]。MC5R不仅调节脂质代谢，而且对分泌腺的分泌也有调节作用，例如泪腺和皮脂腺等[14]。目前对MC5R的研究，多集中于人 (Homo sapiens)、猪 (Sus domesticus)[15]、家鼠 (Mus musculus)[16]等物种。在鱼类中尚未发现有关mc5r对摄食影响的报道。
在自然环境中，鱼类经常会受到饥饿胁迫，恢复摄食后其摄食量增加，会出现饲料转化效率升高、生长速率显著加快等现象，此现象被称为生长补偿[17-19]。另外，哺乳动物基因组中存在5%~10%的生物钟基因，该类基因能够表现出以24 h为一个周期的昼夜节律性波动[20]，与细胞增殖、凋亡、免疫应答、激素分泌和能量代谢等生命活动均有密切联系[21]。但生物钟基因在鱼类中的研究较少，研究与生长相关基因的昼夜节律变化，可以指导正确的投喂，改善鱼体的生长状态。
光倒刺鲃 (Spinibarbus hollandi) 属于硬骨鱼纲、鲤形目、鲤科、倒刺鲃属 ，主要分布于我国长江、珠江等水系，其生长快且肉质鲜美，是我国重要的经济鱼类[22]。目前有关光倒刺鲃的研究主要集中于繁殖生物学[23]、遗传多样性[24]等方面，有关光倒刺鲃生长、摄食相关基因的功能研究并不多见，笔者已对光倒刺鲃的mc4r和mstn基因进行了克隆，并且对这2个基因与生长性状关联的SNPs筛选和验证进行了初步研究，筛选出与生长显著关联的SNPs[25-26]，同为Mcrs家族的mc5r基因是否具有相似的功能？本研究对光倒刺鲃mc5r基因进行了同源克隆和功能分析，以期为光倒刺鲃的摄食、生长发育及相关研究提供基础资料和新的思路。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
实验用光倒刺鲃120尾，体质量为 (37.45±7.23) g，取自广东省韶关市水产研究所。在广州大学水产养殖室饲养。每天8:00对光倒刺鲃进行足量投喂，适应环境2周后进行实验。
1.2 实验设计
1.2.1 昼夜节律实验
把光倒刺鲃分为2组 (投喂组和非投喂组)，每组50尾，置于100 cm×60 cm×60 cm的水族箱中，水温22~26 ℃，实验时间为2017年10月，实验用鱼置于室内自然光照和自然昼夜节律下，水面光照强度为0~430 lx。非投喂组不喂食，投喂组每天8:00投喂。两组分别在实验开始第1天的9:00、11:00、15:00、20:00以及第2天的8:00 (投喂后)对光倒刺鲃进行取样，每次6尾，使用MS-222麻醉后迅速解剖，将脑组织保存于RNA keeper溶液中，取样时间点参考赵建等[27]对鱼类昼夜摄食节律的研究确定。
1.2.2 饥饿再投喂实验
把光倒刺鲃分为对照组、饥饿4 d组、饥饿7 d组、饥饿7 d再投喂4 d组和饥饿7 d再投喂7 d组，每组10尾，置于100 cm×60 cm×60 cm的水族箱中，每天8:00进行投喂，水温22~26 ℃，实验时间为2017年10月，实验用鱼置于室内自然光照和自然昼夜节律下，水面光照强度为0~430 lx。在实验结束当天11:00取脑组织，每次取6尾用于RNA表达量检测。
1.3 克隆与测序
取25 mg光倒刺鲃肌肉组织，使用生物工程 (上海)股份有限公司 (简称生工)的Ezup柱式DNA试剂盒提取DNA，使用Prep柱式DNA胶回收试剂盒回收DNA。根据金线鲃 (Sinocyclocheilus grahami)的编码区序列设计引物F1和R1 (表1)，以光倒刺鲃基因组DNA为模板进行扩增，根据扩增出的光倒刺鲃mc5r中间序列片段，正向和反向各设计3条特异性染色体步移引物，分别为F2、F3、F4、R2、R3和R4，与Genome Walking Kit (TaKaRa)试剂盒提供的兼并引物进行热不对称PCR反应，反应步骤和反应条件按试剂盒说明书进行操作，送生工测序，得到正向和反向序列片段。
表 1 光倒刺鲃mc5r基因克隆和表达分析的引物Table 1. Primers for cloning and expression analysis of mc5r gene in S. hollandi引物
primer引物序列 (5'−3')
primer sequence用途
application产物大小/bp
product sizeF1 AAGATGCCCTGTCTACCAACCC 克隆 850 R1 GGTCCAAATCCCTCCAATGATG 克隆 F2 GGAGGGAAAACAACAGCACAAGC 克隆 750 R2 GGTCCAAATCCCTCCAATGATG 克隆 800 F3 GGTTAAAGATGCCCAACCCACC 克隆 800 R3 GGATGAGGTGGAGAAAGAACGG 克隆 800 F4 CTACTTACTCACCAACCGCCAG 克隆 850 R4 CTTTGATCGACAGCGTGTCCC 克隆 900 F AACACTTCAGAGGCCACCCTG qRT-PCR 150 R TGAGCTGCTCGCATGCTTTGG qRT-PCR 18sF TGATCGTCTTCGAGCCTCTGAC 内参 150 18sR AATTCTTGGACCGGCGCAAGAC 内参 1.4 光倒刺鲃mc5r基因序列拼接与分析
将测序获得的中间、正向和反向序列片段用SeqMan软件进行拼接比对，把拼接所获得的序列在NCBI的Blast工具上进行比对，确认所获得序列是mc5r基因序列，用软件DNAMAN对光倒刺鲃mc5r序列的CDs区进行翻译，得到其编码的氨基酸序列。利用在线工具TMHMM Service v.2.0对光倒刺鲃mc5r的跨膜蛋白进行预测。使用MEGA 5.0软件中Neighbor-Joining法构建系统发育树，Bootstrap method检测重复1 000次。
1.5 光倒刺鲃mc5r基因的组织表达分析
取5尾光倒刺鲃的15个组织：大脑、小脑、中脑、间脑、延脑、肝、肾、肠、胃、脾、肌肉、鳃、心脏、性腺、眼，保存于RNA keeper溶液中。使用Trizol法提取RNA，用1%琼脂糖电泳检测RNA质量。根据PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 说明书对所得的RNA进行反转录。按照SYBR® Premix Ex TaqTM II (Tli RNaseH Plus) 试剂盒的要求，使用ABI7000荧光定量PCR仪进行Real-time PCR检测mRNA的表达量，每个组织样品设置3个重复。用18S作为内参基因。实验数据使用2−ΔΔCt方法进行计算分析。
2. 结果
2.1 光倒刺鲃mc5r基因的序列分析
光倒刺鲃mc5r基因的序列长度为1 947 bp，编码区长987 bp，编码329个氨基酸 (图1、图2)，含有7个跨膜α螺旋结构。
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图 1 光倒刺鲃mc5r基因组扩增序列结果1. 引物F1和R1的PCR扩增产物；M. DL2 000Figure 1. Sequence results of S. hollandi mc5r genome DNA1. the product of PCR amplification with primers F1 and R1; M. DL2 000![]()
图 2 光倒刺鲃mc5r核苷酸序列以及推测的氨基酸序列图中加粗并划线的氨基酸表示预测的跨膜结构；星号表示终止密码子Figure 2. mc5r nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of S. hollandiThe coarsened and underlined amino acids represent the predicted transmembrane structure; the asterisk represents the termination codon.分析该蛋白的理论等电点为8.60；相对分子质量为37 213.62，其中亮氨酸 (Leu)的含量最高 (11.3%)；色氨酸 (Trp)的含量最低 (1.2%)。分析显示，该蛋白的不稳定指数为47.09，属于不稳定蛋白。水合性的总平均值 (GRAVY)为0.803，表示该蛋白为疏水蛋白。
2.2 光倒刺鲃mc5r基因的系统进化分析
在GenBank上和其他物种的mc5r氨基酸序列比对发现，光倒刺鲃与鲤 (Cyprinus carpio)、犀角金线鲅 (S. rhinocerous)的同源性高达98%，与人的同源性仅为70.72%。将所得的光倒刺鲃mc5r基因预测的氨基酸序列与GenBank中的33个已知mc5r氨基酸序列利用MEGA 5.0软件进行比对得出 (图3)，光倒刺鲃和斑马鱼 (Danio rerio) 聚为一支，说明其与斑马鱼的亲缘关系最近；然后与鲤科的鲤、武昌鱼 (Megalobrama amblycephala)、犀角金线鲅、金线鲃和鲫 (Carassius auratus)组成的分支聚为一支，说明其与鲤形目鱼类的亲缘关系较近；再与鲶形目斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus)、鲑形目大鳞大麻哈鱼 (Oncorhynchus tshawytscha)和虹鳟 (O. mykiss)、鲀形目红鳍东方鲀 (Takifugu rubripes)、鲈形目大黄鱼 (Larimichthys crocea)等鱼类聚为一大支，光倒刺鲃与鲶形目和鲑形目鱼类亲缘关系较近，与鲀形目和鲈形目鱼类的亲缘关系较远；最后和哺乳类(人等)聚为一支。
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图 3 光倒刺鲃与其他物种mc5r氨基酸序列构建的系统发育树Figure 3. Phylogenetic tree constructed from mc5r amino acid sequence of S. hollandi and other species2.3 光倒刺鲃mc5r在不同组织中的表达分析
通过qRT-PCR对光倒刺鲃mc5r在不同组织中的表达量进行研究。结果显示，光倒刺鲃mc5r在脑中的表达量较高，尤其是在大脑中的表达量最高；间脑与心脏的表达量次之；中脑和小脑的表达量较少，而在胃、肾、肌肉、脾、鳃、肠、性腺、肝、延脑和眼中仅微量表达(图4)。
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图 4 光倒刺鲃mc5r在不同组织中的表达方柱上不同字母表示差异显著 (P<0.05)，后图同此Figure 4. Expression of S. hollandi mc5r in different tissuesDifferent letters on the bar indicate significant difference (P<0.05). The same case in the following figures.2.4 光倒刺鲃mc5r基因的日周期表达分析
光倒刺鲃禁食组和投喂组，在当天11:00 (投喂后3 h)大脑mc5r的表达量最高；15:00 (投喂后7 h)已经呈显著下降趋势，20:00 (投喂后12 h)大脑mc5r的表达量最低；次日8:00 (投喂后24 h)大脑mc5r的表达量有所升高(图5)。此外，在投喂后7 h，光倒刺鲃mc5r投喂组的表达量显著高于禁食组，而在其他时间段禁食组和投喂组大脑mc5r的表达量没有显著差异。
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图 5 光倒刺鲃大脑mc5r的日周期表达Figure 5. Daily periodicitye expression of mc5r in brain of S. hollandi2.5 光倒刺鲃mc5r对饥饿的响应
光倒刺鲃饥饿再投喂实验中，大脑mc5r的表达情况见图6。第0~第7天由于光倒刺鲃处于饥饿状态，大脑mc5r微量表达；在第8天开始投喂后，其大脑mc5r的表达量显著升高；但在第11和第14天，与第8天相比其大脑mc5r的表达量呈下降趋势。
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图 6 光倒刺鲃mc5r mRNA饥饿再投喂的表达情况Figure 6. Expression profiles of mc5r at starvation and refeeding condition in S. hollandi3. 讨论
本研究通过同源克隆和染色体步移得到光倒刺鲃mc5r的基因序列，对所获得的氨基酸序列与其他物种进行同源性和系统进化分析，得出光倒刺鲃与鲤、犀角金线鲅的同源性高达98%，与人的同源性为70.72%，表明其与斑马鱼、武昌鱼和鲤等鲤科鱼类的亲缘关系较近，而与鸟类、两栖类和哺乳类等亲缘关系较远，有着较大差异。
光倒刺鲃mc5r主要在脑中表达，其中在大脑的表达量最高，中脑、间脑和小脑表达较高，在胃、肾、肌肉、脾、鳃、肠、性腺、肝和眼中仅微量表达。研究表明mc5r对于脂质代谢和分泌腺的分泌有调节作用[10-14]，mc5r对能量平衡也有调节作用[28]，而在鱼类中，脑与其脂质代谢和能量平衡的调节作用也密切相关，所以光倒刺鲃脑中mc5r的表达量相对较高。mc5r在心脏中表达也较高，这可能与心脏供血需要一定能量，而mc5r在能量稳态中起重要作用[28]有关，也表明光倒刺鲃mc5r可能对能量平衡有一定调节作用。光倒刺鲃mc5r在不同组织的表达结果与其他鱼相似。在团头鲂中，mc5r在大脑的表达最高，其次是表皮、眼等与外分泌相关的组织[29]；在金鱼中，mc5r在脑、眼和表皮有较高表达，肠、肝和肌肉中微量表达[30]；在斑马鱼中，mc5r在脑、卵巢、胃肠道有较高表达，同时心脏中也有表达[31]。表明mc5r在不同鱼类各组织中的功能相似，在脂质代谢和能量平衡方面有重要作用。
生物钟能够影响多种生理活动，例如内分泌、食物消化吸收和肝脏新陈代谢等[32]。mc5r对于脂质代谢[12-13]和能量平衡[16]有一定调节作用。在光倒刺鲃中，不管投喂与否，光倒刺鲃mc5r的表达量会随着日周期的变化而变化，表明mc5r的表达受昼夜节律影响，同样光倒刺鲃的摄食、代谢等生理活动也可能会受到昼夜节律的影响。在日周期实验中，投喂后7 h光倒刺鲃mc5r的表达量显著高于未投喂组，说明摄食同样能够影响mc5r的表达。
在光倒刺鲃饥饿再投喂实验中，当光倒刺鲃遭受饥饿时，其大脑中mc5r的表达量较低，而再投喂后大脑中mc5r的表达量显著升高，随后逐渐降低。有研究表明激活mc5r能够促进肌肉对葡萄糖的摄取[16]，并与皮脂腺代谢相关[33]。饥饿再投喂后，光倒刺鲃大脑中mc5r的表达量显著升高，推测mc5r基因可能在光倒刺鲃的摄食中有重要调节作用，并在饥饿再投喂后的补偿生长中扮演一定角色。
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图 1 尖吻鲈增重率与饲料中雨生红球藻添加量的关系
Figure 1. Relationship between weight gain rate of L. calcarifer and content of dietary H. pluvialis
表 1 实验饲料组成及营养水平 (干物质基础)
Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet (Dry mass basis)
% 原料 Ingredient C H1 H2 H3 H4 H5 鱼粉 Fish meal 43.00 43.00 43.00 43.00 43.00 43.00 大豆浓缩蛋白 Soy protein concentrate 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 面粉 Wheat flour 17.00 16.80 16.60 16.40 16.20 16.00 鱼油 Fish oil 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 维生素预混料① Mineral premix 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 矿物质预混料② Mineral premix 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 豆粕 Soybean meal 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 大豆卵磷脂 Soy lecithin 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 甜菜碱 Betaine 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 啤酒酵母 Brewers yeast 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 氯化胆碱 Choline chloride 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 雨生红球藻 Haematococcus pluvialis 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 营养成分 Proximate composition 水分 Moisture 9.72 9.74 9.69 9.73 9.70 9.75 粗蛋白 Crude protein 47.04 47.08 47.12 47.13 47.18 47.20 粗脂肪 Crude lipid 13.67 13.64 13.58 13.53 13.50 13.46 灰分 Ash 8.32 8.31 8.28 8.26 8.25 8.30 虾青素 Astaxanthin /(mg·kg−1) 1.23 30.35 58.52 91.48 118.53 150.26 注：①. 维生素预混料 (mg·kg−1饲料)：维生素B1 25，维生素B2 45，维生素B12 0.1，维生素K3 10，纤维醇 800，烟酸200，叶酸1.2，生物素 32，维生素D3 5，维生素E 120，乙氧喹150，泛酸500，微晶纤维素14.52；②. 矿物质预混料 (mg·kg−1饲料)：NaF 4，KI 1.6，CoCl2·6H2O (1%) 100，CuSO4·5H2O 20，FeSO4·H2O 160，ZnSO4·H2O 100，MnSO4·H2O 120，MgSO4·7H2O 2 400，Ca(H2PO4)2·H2O 6 000，NaCl 200。 Note: ①. Vitamin premix (mg·kg−1 diet): VB1 25, VB2 45, VB12 0.1, VK3 10, Inositol 800, Nicotinic acid 200, Folic acid 1.2, Biotin 32, VD3 5, VE 120, Ethoxyquin 150, Pantothenic acid 500, Avicel 14.52; ②. Mineral premix (mg·kg−1 diet): NaF 4, KI 1.6, CoCl2·6H2O (1%) 100, CuSO4·5H2O 20, FeSO4·H2O 160, ZnSO4·H2O 100, MnSO4·H2O 120, MgSO4·7H2O 2 400, Ca(H2PO4)2·H2O 6 000, NaCl 200. 
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表 2 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈生长性能的影响
Table 2 Effect of dietary H. pluvialis on growth performance of L. calcarifer
指标 Index 组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 初始均质量 Initial body mass/g 23.18±0.01 23.13±0.03 23.14±0.04 23.18±0.04 23.18±0.08 23.13±0.02 终末均质量 Final body mass/g 113.63±2.97a 118.08±2.52ab 127.43±1.11cd 132.71±2.83d 130.21±3.04cd 124.54±2.17bc 增重率 WGR/% 390.19±12.69a 410.44±11.53ab 450.70±6.01cd 472.51±11.35d 461.63±10.63cd 438.54±9.73bc 特定生长率 SGR/(%·d−1) 2.84±0.05a 2.91±0.04ab 3.05±0.02cd 3.12±0.04d 3.08±0.03cd 3.01±0.03bc 饲料系数 FCR 1.53±0.02 1.51±0.08 1.49±0.04 1.45±0.03 1.48±0.06 1.50±0.01 成活率 Survival rate/% 96.67±3.33 98.89±1.92 100±0.00 100±0.00 100±0.00 100±0.00 肝体比 HSI/% 0.57±0.01 0.55±0.02 0.52±0.03 0.48±0.04 0.50±0.03 0.55±0.02 肥满度 CF/(g·cm−3) 1.73±0.02 1.76±0.01 1.78±0.03 1.85±0.02 1.83±0.06 1.82±0.05 注：表中同一行数据上标字母不同，表示差异显著 (P<0.05)，后表同此。 Note: Different superscript letters within the same line indicate significant difference (P<0.05). The same case in the following tables.
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表 3 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈全鱼营养成分的影响
Table 3 Effect of dietary H. pluvialis on whole body proximate composition of L. calcarifer
% 营养成分
Nutritional composition组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 水分 Moisture 71.13±1.12 70.63±0.1.09 70.36±0.73 71.28±1.14 70.74±1.68 70.84±1.47 粗蛋白质 Crude protein 15.21±1.04 15.42±0.48 15.61±0.65 15.70±0.53 15.41±0.92 15.45±0.83 粗脂肪 Crude lipid 2.82±0.22b 2.46±0.14ab 2.25±0.31ab 1.81±0.21a 1.84±0.15a 1.89±0.12a 粗灰分 Ash 4.46±0.13 4.52±0.13 4.48±0.16 4.51±0.21 4.53±0.17 4.49±0.21
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表 4 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈肝脏抗氧化指标的影响
Table 4 Effect of dietary H. pluvialis on hepatic T-AOC, SOD, CAT, GSH-Px activities and MDA contents of L. calcarifer
指标 Index 组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 总抗氧化能力 T-AOC/(U·mg−1) 0.62±0.03a 0.65±0.02a 0.75±0.05b 0.88±0.05c 0.85±0.02c 0.81±0.03bc 超氧化物歧化酶活性 SOD/(U·mg−1) 86.21±2.92c 84.38±1.08c 77.45±1.34b 70.25±1.18a 71.18±1.10a 71.64±2.06a 过氧化氢酶活性 CAT/(U·mg−1) 33.32±1.04c 30.25±1.42bc 27.81±2.13b 25.71±2.52ab 25.82±1.31a 26.18±1.81a 谷胱甘肽过氧化物酶活性 GSH-Px/(U·mg−1) 185.31±2.15d 166.53±4.29c 149.27±5.28b 139.64±5.37a 142.72±5.21ab 145.58±3.17ab 丙二醛质量摩尔浓度 MDA/(nmol·mg −1) 6.92±0.41d 6.32±0.27c 4.78±0.24b 4.03±0.26a 4.32±0.35ab 4.65±0.25b
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表 5 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈血液生理指标的影响
Table 5 Effect of dietary H. pluvialis on blood physiological parameters of L. calcarifer
指标 Index 组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 红细胞数 RBC/109 mL−1 1.85±0.21a 1.87±0.13a 1.98±0.14ab 2.24±0.34b 2.35±0.31b 2.41±0.23b 白细胞数 WBC/106 mL−1 9.21±0.16 9.23±0.23 9.31±0.11 9.38±0.15 9.44±0.13 9.46±0.24 血红蛋白 Hb/(g·100 mL−1) 5.31±0.13a 5.38±0.22a 5.52±0.15ab 5.67±0.14b 5.74±0.23b 5.78±0.16b 红细胞积压 Ht/% 43.35±1.37 43.12±1.48 42.35±1.72 42.27±2.21 42.55±1.45 42.39±2.41
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表 6 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈血清生化指标的影响
Table 6 Effect of dietary H. pluvialis on serum biochemical parameters of L. calcarifer
指标 Index 组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 总胆固醇浓度 TCHO/(mmol·L−1) 4.23±0.05b 3.91±0.12ab 3.71±0.24ab 3.55±0.15a 3.53±0.04a 3.48±0.13a 甘油三酯浓度 TG/(mmol·L−1) 3.62±0.13b 3.45±0.12b 3.21±0.11ab 2.93±0.24a 2.88±0.31a 2.82±0.26a 低密度脂蛋白胆固醇浓度 LDL-C/(mmol·L−1) 0.86±0.03b 0.77±0.04ab 0.64±0.05a 0.61±0.03a 0.57±0.04a 0.56±0.14a 高密度脂蛋白胆固醇浓度 HDL-C/(mmol·L−1) 2.66±0.12 2.63±0.05 2.58±0.05 2.53±0.03 2.51±0.06 2.48±0.02 血糖浓度 GLU/(mmol·L−1) 6.89±1.02 6.62±0.42 6.54±0.17 6.49±0.26 6.53±0.21 6.51±0.18 皮质醇质量浓度 Cortisol/(ng·mL−1) 67.61±1.47 67.13±1.28 66.53±2.35 66.24±1.08 66.11±1.83 66.52±1.58
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表 7 饲料中添加雨生红球藻对尖吻鲈血清免疫指标的影响
Table 7 Effect of dietary H. pluvialis on serum immune indexes of L. calcarifer
指标 Index 组别 Group C H1 H2 H3 H4 H5 溶菌酶活性 LZM/(U·mL−1) 83.83±2.52a 85.36±1.64a 89.38±2.01ab 92.75±2.51b 93.16±1.24b 94.34±2.87b 免疫球蛋白M质量浓度 IgM/(mg·mL−1) 11.97±0.35a 12.26±0.23a 14.63±0.44ab 17.61±0.36b 18.41±0.96b 19.11±1.32b 补体4质量浓度 C4/(g·L−1) 0.39±0.03a 0.42±0.05ab 0.52±0.03b 0.56±0.06b 0.58±0.04b 0.61±0.08b
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-
[1] 赵旺, 胡静, 马振华, 等. 尖吻鲈幼鱼形态性状对体质量影响的通径分析及生长曲线拟合[J]. 南方农业学报, 2017, 48(9): 1700-1707. doi: 10.3969/j.issn.2095-1191.2017.09.26 [2] FAO. Cultured Aquatic Species Information Programme. Lates calcarifer (Block, 1790)[EB/OL]. [2021-06-11]. http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Lates_calcarifer/en.
[3] 周胜杰, 马婷, 胡静, 等. 尖吻鲈仔鱼骨骼发育观察[J]. 南方农业学报, 2018, 49(3): 592-598. doi: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.03.27 [4] 陈旭, 左涛, 周胜杰, 等. 尖吻鲈幼鱼运输密度和时长对运输水质及其复苏率和抗氧化能力的影响[J]. 南方水产科学, 2021, 17(2): 122-128. doi: 10.12131/20200169 [5] YANG R, HAN M Y, FU Z Y, et al. Immune responses of Asian seabass Lates calcarifer to dietary Glycyrrhiza uralensis[J]. Animals, 2020, 10(9): 1-12.
[6] MASDUKI F, JASMIN M, MIN C, et al. Characterization of Enterococcus hirae isolated from the intestine of seabass (Lates calcarifer) as a new potential probiotic against pathogenic Vibrios[J]. Curr Microbiol, 2020, 77: 3962-3968. doi: 10.1007/s00284-020-02228-4
[7] 胡静, 周胜杰, 杨蕊, 等. 亚硝酸盐胁迫对尖吻鲈稚鱼消化酶活性的影响[J]. 暨南大学学报 (自然科学与医学版), 2020, 41(1): 31-38. [8] 刘亚娟, 胡静, 周胜杰, 等. 急性氨氮胁迫对尖吻鲈稚鱼消化酶及抗氧化酶活性的影响[J]. 南方农业学报, 2018, 49(10): 2087-2095. doi: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.10.27 [9] 虞为, 杨育凯, 陈智彬, 等. 饲料中添加螺旋藻对花鲈生长性能、消化酶活性、血液学指标及抗氧化能力的影响[J]. 南方水产科学, 2019, 15(3): 57-67. doi: 10.12131/20190002 [10] 吴晓娟, 刘海燕, 顾继锐, 等. 雨生红球藻在水产养殖中的应用[J]. 中国饲料, 2015(19): 27-29. [11] 陈磊, 曾军, 丁梦琴, 等. 雨生红球藻藻粉对拜城油鸡生产性能、蛋品质和抗氧化性能的影响[J]. 动物营养学报, 2021, 33(11): 6548-6554. doi: 10.3969/j.issn.1006-267x.2021.11.053 [12] YU W, LIN H, YANG Y, et al. Effects of supplemental dietary Haematococcus pluvialis on growth performance, antioxidant capacity, immune responses and resistance to Vibrio harveyi challenge of spotted sea bass Lateolabrax maculatus[J]. Aquac Nutr, 2021, 27(2): 355-365. doi: 10.1111/anu.13189
[13] CHENG C, GUO Z, YE C, et al. Effect of dietary astaxanthin on the growth performance, non-specific immunity, and antioxidant capacity of pufferfish (Takifugu obscurus) under high temperature stress[J]. Fish Physiol Biochem, 2018, 44: 209-218. doi: 10.1007/s10695-017-0425-5
[14] XIE S, FANG W, WEI D, et al. Dietary supplementation of Haematococcus pluvialis improved the immune capacity and low salinity tolerance ability of post-larval white shrimp, Litopenaeus vannamei[J]. Fish Shellfish Immunol, 2018, 80: 452-457. doi: 10.1016/j.fsi.2018.06.039
[15] PAN C H, CHIEN Y H. Effects of dietary supplementation of alga Haematococcus pluvialis (Flotow), synthetic astaxanthin and β-carotene on survival, growth, and pigment distribution of red devil, Cichlasoma citrinellum (Günther)[J]. Aquac Res, 2009, 40: 871-879. doi: 10.1111/j.1365-2109.2008.02153.x
[16] 王磊, 陈再忠, 冷向军, 等. 饲料中添加雨生红球藻对七彩神仙鱼生长、体色及抗氧化力的影响[J]. 淡水渔业, 2016, 46(6): 92-97. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2016.06.016 [17] 赵子续, 张宝龙, 曲木, 等. 饲料中添加雨生红球藻对红白锦鲤生长、体色及抗氧化能力的影响[J]. 生物化工, 2019, 5(1): 119-123. [18] LIU F, SHI H, GUO Q, et al. Effects of astaxanthin and emodin on the growth, stress resistance and disease resistance of yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)[J]. Fish Shellfish Immunol, 2016, 51: 125-135. doi: 10.1016/j.fsi.2016.02.020
[19] LI M, WU W, ZHOU P, et al. Comparison effect of dietary astaxanthin and Haematococcus pluvialis on growth performance, antioxidant status and immune response of large yellow croaker Pseudosciaena crocea[J]. Aquaculture, 2014, 434: 227-232. doi: 10.1016/j.aquaculture.2014.08.022
[20] LONG X, WU X, LEI Z, et al. Effects of dietary supplementation with Haematococcus pluvialis cell powder on coloration, ovarian development and antioxidation capacity of adult female Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis[J]. Aquaculture, 2017, 473: 545-553. doi: 10.1016/j.aquaculture.2017.03.010
[21] 孙刘娟, 吴李芸, 白东清. 虾青素对血鹦鹉体色、生长和非特异性免疫指标的影响[J]. 北方农业学报, 2016, 44(1): 91-95. [22] 王军辉, 熊建利, 张东洋, 等. 饲料中添加虾青素对锦鲤生长、体色、抗氧化能力和免疫力的影响[J]. 动物营养学报, 2019, 31(9): 4144-4151. [23] 李美鑫, 刘曦澜, 许世峰, 等. 虾青素对乌鳢生长、抗氧化和免疫功能的影响[J]. 饲料工业, 2021, 42(16): 51-57. [24] 吴雪芹, 姚金明, 赵静, 等. 虾青素对大鳞副泥鳅幼鱼生长、肠道消化酶和抗氧化指标的影响[J]. 吉林农业大学学报, 2021, 43(4): 482-487. [25] 姜巨峰, 韩现芹, 周勇, 等. 饲料中添加天然虾青素对棘颊雀鲷生长性能及体色的影响[J]. 饲料研究, 2021, 44(20): 38-42. [26] JAGRUTHI C, YOGESHWARI G, ANBAZAHAA S, et al. Effect of dietary astaxanthin against Aeromonas hydrophila infection in common carp, Cyprinus carpio[J]. Fish Shellfish Immunol, 2014, 41(2): 674-680. doi: 10.1016/j.fsi.2014.10.010
[27] 姚金明, 陈秀梅, 刘明哲, 等. 虾青素对大鳞副泥鳅幼鱼生长、体成分及抗氧化指标的影响[J]. 西北农林科技大学学报 (自然科学版), 2020, 48(1): 9-15. [28] 付兴周, 路志芳, 李东. 虾青素复合添加剂对肉鸡生长性能及肉质的影响[J]. 畜牧与兽医, 2017, 49(1): 27-30. [29] KALINOWSKI C, ROBAINA L, IZQUIERDO M. Effect of dietary astaxanthin on the growth performance, lipid composition and post-mortem skin colouration of red porgy Pagrus pagrus[J]. Aquac Int, 2011, 19(5): 811-823. doi: 10.1007/s10499-010-9401-0
[30] 虞为, 杨育凯, 林黑着, 等. 牛磺酸对花鲈生长性能、消化酶活性、抗氧化能力及免疫指标的影响[J]. 南方水产科学, 2021, 17(2): 78-86. doi: 10.12131/20200223 [31] 吴仁福, 龙晓文, 侯文杰, 等. 饲料中添加雨生红球藻粉对三疣梭子蟹雌体卵巢发育、色泽、抗氧化能力和生化组成的影响[J]. 水生生物学报, 2018, 42(4): 698-708. [32] WU X, LEI Z, LONG X, et al. Effects of dietary supplementation of Haematococcus pluvialis powder on gonadal development, coloration and antioxidant capacity of adult male Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis)[J]. Aquac Res, 2017, 48(10): 5215-5223.
[33] PHAM M, BYUN H, KIM K, et al. Effects of dietary carotenoid source and level on growth, skin pigmentation, antioxidant activity and chemical composition of juvenile olive flounder Paralichthys olivaceus[J]. Aquaculture, 2014, 431: 65-72. doi: 10.1016/j.aquaculture.2014.04.019
[34] 崔培, 刘芳, 杨广, 等. 虾青素对锦鲤血液及抗氧化指标的影响[J]. 东北农业大学学报, 2013, 44(3): 89-94. doi: 10.3969/j.issn.1005-9369.2013.03.017 [35] LI M, YU N, QIN J, et al. Effects of ammonia stress, dietary linseed oil and Edwardsiella ictaluri challenge on juvenile darkbarbel catfish Pelteobagrus vachelli[J]. Fish Shellfish Immunol, 2014, 38(1): 158-165. doi: 10.1016/j.fsi.2014.03.015
[36] STEPHAN G, GUILLAUME J, LAMOUR F. Lipid peroxidation in turbot (Scophthalmus maximus) tissue: effect of dietary vitamin E and dietary n-6 or n-3 polyunsaturated fatty acids[J]. Aquaculture, 1995, 130(2): 251-268.
[37] CHEN R, LOCHMANN R, GOODWIN A, et al. Effects of dietary vitamins C and E on alternative complement activity, hematology, tissue composition, vitamin concentrations and response to heat stress in juvenile golden shiner (Notemigonus crysoleucas)[J]. Aquaculture, 2004, 242: 553-569. doi: 10.1016/j.aquaculture.2004.09.012
[38] 曲木, 张宝龙, 于恩浩, 等. 虾青素、万寿菊粉对狮子头金鱼生长、血液指标及免疫力的影响[J]. 生物化工, 2018, 4(5): 45-50. doi: 10.3969/j.issn.2096-0387.2018.05.013 [39] 刘杨, 阮梦成, 赵秀举, 等. 虾青素对高脂高胆固醇饲喂小鼠胆汁成分的调节作用[J]. 武汉轻工大学学报, 2019, 38(2): 21-24. doi: 10.3969/j.issn.2095-7386.2019.02.004 [40] 黄河儒, 王姗姗, 倪晓锋, 等. 雨生红球藻提取物对糖尿病小鼠血糖及血脂水平的干预和调节作用[J]. 浙江大学学报 (农业与生命科学版), 2015, 41(6): 641-649. -
期刊类型引用(5)
1. 赖洁，叶树政，黄文炜，李斯迅，邓彬华，韩崇，龚剑，桂林，李强. 光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)基因组Survey及线粒体基因组研究. 海洋与湖沼. 2025(02): 423-432 . 
百度学术
2. 戴炜，张超，王霜文，尧志宇，吴佩诗，鄢智轩，钟语慧，周蕾，江子怡，卢环，满百膺. 信江光倒刺鲃的生长与繁殖特性研究. 上饶师范学院学报. 2024(06): 26-40 . 百度学术
3. 郭辰，周飞，韩彪，潘翠，吴洁敏，杨婷，尚常花. 假单胞菌亮氨酸氨肽酶基因克隆及生物信息学分析. 广西师范大学学报(自然科学版). 2021(01): 156-164 . 百度学术
4. 李文俊，李强，钟良明. 珠江水系光倒刺鲃Cyt b基因的遗传变异分析. 湖南农业科学. 2021(02): 1-5+14 . 百度学术
5. 李文俊，李强，钟良明，桂林. 基于线粒体DNA控制区序列的珠江和长江水系光倒刺鲃群体遗传变异分析. 南方农业学报. 2021(11): 3121-3129 . 百度学术
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