Effects of cold stress on black porgy tissue injury and apoptosis gene expression
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摘要: 为探究黑鲷 (Acanthopagrus schlegelii) 在低温下的生理适应机制，设计了3个温度梯度 (15、10和5 ℃)，以15 ℃为对照，低温胁迫24 h，分别研究了冷应激前后黑鲷的组织结构变化、生理生化反应及凋亡基因的表达。结果显示，随着温度的降低，黑鲷呈现出肝脏空泡化、腮小片收缩、肌纤维断裂等组织损伤现象；肝脏中的甘油三酯 (TG) 含量显著降低 (P<0.05)，谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT) 活性和总胆固醇 (T-CHO) 含量显著升高 (P<0.05)，表明黑鲷遭受冷应激，肝脏功能紊乱、结构遭到破坏。q-PCR结果显示，10 ℃时黑鲷通过降低apaf-1、bax、caspase-1基因表达量，促进caspase-3、diablo基因表达，从而减少肝脏细胞丢失来降低冷应激的损伤；胁迫至5 ℃时，温度超过黑鲷自身生理调节阈值，肝脏细胞受损程度加重，黑鲷促进apaf-1、bcl-2和diablo基因表达，抑制caspase-3基因表达，最大限度维持了肝脏细胞的稳态。结果表明，随着温度的降低，黑鲷的肝脏、腮、肌肉损伤加重，其中肝脏通过调节AST、ALT、T-CHO、TG以及凋亡基因表达，以减少组织损伤带来的危害。Abstract: In order to explore the physiological adaptation mechanism of black porgy (Acanthopagrus schlegelii) under low temperature stress, we designed three temperature gradient groups (15, 10 and 5 ℃). Taking 15 ℃ as the control group and with a low temperature stress for 24 h, we studied the tissue structure changes, physiological, biochemical reactions and the expression of apoptosis genes before and after the cold stress. The results show that with the intensification of low temperature stress, the tissue damage such as liver vacuolation, gill lamellae contraction and breakage and muscle fiber breakage were aggravated. The content of triglyceride (TG) in the liver decreased significantly, while the activities of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) as well as the content of total cholesterol (T-CHO) increased significantly, indicating that A. schlegelii had suffered from liver dysfunction and structural damage under cold stress condition. At 10 ℃, the liver reduced the damage of cold stress by decreasing expression levels of apaf-1, bax and caspase-1 genes, increasing expression of caspase-3 and diablo genes so as to reduce the loss of liver cells. When the temperature reached 5 ℃, the temperature exceeded A. schlegelii's physiological regulation threshold, so the degree of liver cell damage was aggravated. The expression of apaf-1, bcl-2 and diablo genes were promoted, while the caspase-3 gene expression was inhibited in order to maintain the homeostasis of liver cells to the greatest extent. It is showed that as the temperature decreased, the liver, gills and muscle damages of A. schlegelii increased. The liver regulated the expression of AST, ALT, T-CHO, TG and apoptotic pathway related genes to reduce the damage caused by tissue damage.
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Keywords:
- Acanthopagrus schlegelii /
- Cold stress /
- Tissue section /
- Apoptosis
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微卫星(microsatellite)DNA是由1~6个核苷酸为单位多次串联重复的简单序列，又称简短串联重复序列(short tandem repeat，STR)、简单序列重复(simple sequence repeat，SSR) 或简单序列长度多态性(simple sequence length polymorphism，SSLP)，是20世纪80年代末发展起来的一种分子标记。微卫星具有高度的多态性[1]和共显性，在真核生物基因组中随机分布，每代变异超过2%[2]。其分析可以分辨一个碱基对的差异[3]，且等位基因的条带易于识别和解释，比其它分子标记带来更多的信息量[4]。因此在种群遗传结构分析、种群遗传多样性检测、遗传图谱的构建及生产性状位点的连锁分析与QTL定位分析中得到了广泛的应用[5-7]。
由于不同种类之间的微卫星引物序列通用性较差。因此必须首先从实验生物基因组中获得微卫星DNA序列，设计引物，筛选多态性微卫星标记。然而筛选微卫星座位的工作繁重，其使用受到一定的限制。随着分子生物学技术的发展，相继产生了一些新的微卫星DNA分离方法。本文对几种微卫星位点分离技术进行介绍并对其进行分析比较，为选择适合的方法提供参考。
1. 微卫星位点的分离方法
1.1 生物信息学方法(Data mining)与近缘种交叉扩增(cross amplification)
获得微卫星最简捷的途径就是通过互连网从公共数据库(如EMBL、GenBank、EST数据库等)查找微卫星DNA，如河豚(Fugu rubripes)[8]、中国明对虾(Fenneropenaeus orientalis)[9]和栉孔扇贝(Chlamys farreri)[10]等。徐鹏等[9]利用生物信息学方法从10 446个中国明对虾ESTs序列中筛选微卫星DNA，共发现微卫星序列229个，占整个ESTs数据的2.19%，其中含双碱基重复序列146个和3碱基重复序列58个，分别占在ESTs微卫星序列总数的63.76%和25.33%，大部分为完美型(perfect)的重复序列。根据筛选的微卫星序列设计19对引物并进行多态性检测，在有扩增产物的16对引物中，首次筛选得到8个中国明对虾微卫星标记。其次，利用近缘种的已知微卫星引物进行交叉扩增(cross amplification)筛选也可获得一定的有效微卫星引物。鲁双庆等[11]研究了鲤(Cyprinus carpio)微卫星引物对远缘种黄鳝(Monopteras albus)的适用性。结果显示，31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模板扩增出特异性带谱。每对引物扩增的等位基因数3~13个，平均每个位点5.6个，显示了较高的多态性。林凯东等[12]首次将鲤的微卫星引物用于草鱼(Ctenopharyngodon idellus)基因组分析。
1.2 小片段DNA克隆法(small DNA fragments cloning)
此方法的基本原理是构建目标生物基因组小片段DNA文库，通过杂交筛选出含有微卫星序列的阳性克隆。首先用限制性内切酶充分消化DNA，琼脂糖凝胶电泳，选取400~900 bp片段克隆，构建基因组文库。然后将重组克隆转移到杂交膜上，采用32P标记的重复序列探针如(AT)n进行杂交，放射自显影，获得阳性克隆、测序，设计PCR引物并进行扩增筛选(图 1)。
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图 1 微卫星分离的小片段克隆法(左)和PIMA方法(右)简图(仿ZANE等，2002)Fig. 1 Schematic presentation of small DNA fragment cloning (left) and PIMA approach (right) for isolation of microsatellite DNA(from: ZANE, et al.2002)孙效文等[13]利用上述方法从鲤鱼文库中筛选2 000个菌落，获得阳性克隆45个，有22个含有微卫星，其中完美型的占63.6%，非完美型的占22.7%，混合型的占13.7%。陈微等[14]用此方法从牙鲆(Paralichthys olivaceus)文库中筛选阳性克隆45个，共得到20个微卫星序列，其中完美型13个，非完美型5个，混合型2个。PANIEGO等[15]也用此方法分离向日葵(Helianthus annnus)微卫星标记。测序503个微卫星克隆，设计了271对微卫星引物。
利用微卫星重复序列作探针筛选基因组文库是一种耗时费力的方法[16]。获得阳性克隆的比例通常较少(0.04%~12%之间)。对于那些基因组中微卫星DNA含量不是很丰富的种类(比如鸟类和植物)，或需要大量的微卫星标记用于研究种群遗传结构[17-18]或构建遗传图谱[19]时，用此方法分离微卫星难以满足需要。
1.3 以RAPD为基础的PCR分离微卫星法(RAPD-based PIMA approach)
为了避免基因组文库的构建和筛选的繁琐性，一些国外学者先后报道用随机扩增多态DNA(RAPD)方法去扩增未知的微卫星序列[20-21]。其中用PCR分离微卫星(PCR isolation of microsatellite approach，PIMA)[22]就是用RAPD引物从目标生物基因组中获得随机扩增片段，这些扩增产物克隆到T-载体上，然后用含有重复序列引物和载体引物筛选阳性克隆、测序(图 1，PIMA支路)。RAPD片段比随机基因组克隆含有较多的微卫星重复序列[23-25]。与传统的方法相比，PIMA省略了DNA酶切、片段大小选择以及接头连接这些步骤，虽然实验操作简单但研究报道较少。
1.4 引物伸长法(Primer extension approach)
基因组DNA酶切后，选一定大小的片段插入到质粒(pBluescript)或噬菌体(M13mp18)载体上，然后转化、洗脱获得含有单链环状DNA(ssDNA)并构建文库。以ssDNA为模板，与含有重复序列的寡聚核苷酸或带有生物素标记的重复序列进行伸长反应，获得富含微卫星位点双链DNA的次级文库。最后Southern杂交或PCR筛选阳性克隆并测序(图 2)。
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图 2 引物伸长富集法PAETKAU(左)和OSTRANDER等(右)的微卫星分离步骤简图(仿ZANE等，2002)Fig. 2 Primer extension enrichment protocolsProcedures of microsatellites isolation from PAETKAU(left)and OSTRANDER, et al.(right) (from: ZANE, et al.2002)OSTRANDER等[26]和PAETKAU[27]运用引物伸长法分别对犬齿类和鲍鱼基因组文库进行实验，并分别获得40%~50%和最高达100%阳性克隆。OSTRANDER等构建了含60 000克隆的单链DNA文库，对于基因组频率低于1%的特定重复序列有600座位(含所需的重复序列)在富集文库中表现出来。并且该方法对分离富含2个寡核苷酸重复序列如(AC)n比较有效，对分离3个和4个寡核苷酸重复序列是否有效还不肯定。此方法实验步骤繁琐使其适用性受到一定限制。
1.5 选择性杂交法(selective hybridization method)
选择性杂交法第一步与传统方法一样，也是基因组DNA经过酶切后与接头或载体连接，用连有接头的DNA片段与标记的重复序列探针选择性杂交，捕获含有微卫星序列的DNA片段。最后PCR扩增、克隆。对重组克隆可直接测序、PCR筛选或Southern blot筛选(图 3)。
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图 3 选择杂交法简图(仿ZANE等，2002)Fig. 3 Schematic representation of selective hybridization protocols(from ZANE, et al.2002)此方法实验步骤简单，报道较多[28-32]。其中酶切片段与接头或载体连接是非常重要的一步，因为连接插入片段的量不足和多联体的形成都会限制下一步的实验。酶切片段大小的选择可以在酶切后[30]或在连接后[31]进行，在连接后选择片段大小有利于去除非特异性连接。重复序列探针与DNA的杂交既可在尼龙膜上[28, 32]也可在包被有链霉亲和素的磁珠上[30-31]进行。LI等[33-34]采用选择杂交法已成功分离出8个皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)微卫星标记。
1.6 磁珠富集法(magnetic beads enrichment method)
磁珠富集法分离微卫星分子标记是一种简单高效的方法[31, 35], 已经应用于一些植物和动物微卫星分子标记的分离[26, 36-37]。实验生物基因组DNA经酶切，连上接头，PCR扩增，与生物素标记的重复序列探针杂交，磁珠富集，构建PCR富集文库(图 4)。然后再进行筛选即可得到微卫星分子标记。可用不同的酶和接头进行酶切、连接。如果按AFLP的方法进行酶切、连接、扩增，再富集，即为FIASCO法(fast isolation by AFLP of sequences containing repeats)[38]。包括单酶切扩增产物富集[38]和双酶切预扩增产物富集[36]。
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图 4 采用磁珠富集法从AFLP片段中分离微卫星标记简图(仿GAO等，2003)Fig. 4 Schematic representation of SSR isolation by magnetic beads from AFLP fragments(from GAO, et al.2003)孙效文等[13]用此方法筛选鲤鱼微卫星标记。获得微卫星314个，完美型占79.0 %，非完美型占14.3 %，混合型占6.7 %，重复次数超过10的有293个，占93.3 %。孙效文等[38]用磁珠富集法分离草鱼微卫星DNA标记。筛选获得阳性克隆132个，86.36 %含有微卫星序列。高国庆等[36]用FIASCO法从AFLP片段中分离花生(Arachis hypogaeal)微卫星DNA标记，结果回收纯化14个片段，测序后发现都含有简单重复序列。从预扩增的AFLP片段中富集SSR可获得较多的含简单重复序列的片段，而选择性扩增的AFLP片段不经富集直接测序的方法效率较低[39]。此方法在其他种类(比如一些鸟类、鱼类、甲壳类和红珊瑚)的富集率在50%~90%[38]。这些研究表明，用生物素-磁珠富集法克隆微卫星效率高，成本低，所获微卫星质量高。
2. 结语
直接克隆法耗时费力且筛选的效率也比较低。引物伸长法虽有所报道，其实验操作繁琐使其适用性受到限制。磁珠富集法是一种高效而简单快速的分离方法，已经应用于一些植物和动物微卫星分子标记的分离。整个过程可在一星期完成。如果利用篮白斑筛选克隆，从理论上讲，每一个白色菌斑都应当含有微卫星序列。但是操作过程中一些因素会影响筛选微卫星效率。最主要的影响因素是磁珠的平衡及洗液和洗涤温度的严格控制。从国内发表的文献上看，目前从基因组分离微卫星的主要方法是小片段克隆法和磁珠富集法以及稍作改进的一些方法。还有一些从基因组中克隆微卫星的方法，但最有效的还是基于PCR扩增的磁珠富集法。
从整体上看，微卫星分子标记在陆生动植物的分离和应用比较早，水产动物起步较晚，大多还处于分离筛选的初级阶段。在国内，只有鲤[41]，对虾[9, 42]，栉孔扇贝[10]等少数种类已分离出微卫星分子标记。网上基因库可利用的资源也还非常有限，远不能满足研究和应用的需要。而我国是一个渔业大国，水产动物种类多，遗传差异大，在遗传多样性分析、连锁图谱构建、数量性状基因(quantitative trait loci, QTL)定位分析、分子标记辅助育种等方面需要大量的微卫星标记。因此，选择有效的分离方法可以加速水产动物尤其主要养殖种类的微卫星分子标记的筛选及其应用进程。随着水产养殖生物的基因组测序和大规模cDNA测序，生物信息学方法分离微卫星DNA及其在近缘种的扩增筛选将越来越受到重视。
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图 1 冷应激对黑鲷肝脏、腮、肌肉组织结构的影响 (10×40 倍)
注：a. 肝脏，15 ℃ 对照组；b. 肝脏，10 ℃ 处理组；c. 肝脏，5 ℃ 处理组；d. 腮，15 ℃ 对照组；e. 腮，10 ℃ 处理组；f. 腮，5 ℃ 处理组；g. 肌肉，15 ℃ 对照组；h. 肌肉，10 ℃ 处理组；i. 肌肉，5 ℃ 处理组。
Figure 1. Effects of cold stress on tissue structure of liver, gill and muscle of A. schlegelii (10×40 times)
Note: a. Liver, 15 ℃ control group; b. Liver, 10 ℃ treatment group; c. Liver, 5 ℃ treatment group; d. Gill, 15 ℃ control group; e. Gill, 10 ℃ treatment group; f. Gill, 10 ℃ treatment group; g. Muscle, 15 ℃ control group; h. Muscle, 10 ℃ treatment group; i. Muscle, 5 ℃treatment group.
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图 2 冷应激对黑鲷肝脏组织的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和总胆固醇的影响
注：方柱上相同字母表示组间差异不显著 ( P>0.05)，不同字母表示组间差异显著 (P<0.05)；图3同此。
Figure 2. Effects of cold stress on AST, ALT, TG and T-CHO in liver tissue of A. schlegelii
Note: The same letters above the column indicate no significant difference between groups (P>0.05), while different letters indicate significant difference between groups (P<0.05). The same case in Fig. 3.
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图 3 冷应激下黑鲷肝脏中apaf-1、bax、bcl-2、caspase-1、caspase-3和diablo基因的 mRNA 相对表达量
Figure 3. mRNA relative expression changes of apaf-1, bax, bcl-2, caspase-1, caspase-3 and diablo genes in liver of A. schlegelii under cold stress
表 1 引物信息
Table 1 Primer information
引物
Primer引物序列 (5'—3')
Primer sequence (5'–3')产物长度
Length of product/bp退火温度
Annealing temperature/℃β-actin-F CGACGGTCAGGTCATCAC 91 β-actin-R GCCAGCAGACTCCATTCC apaf-1-F AGACTACGAAGCTGCACACGTCCT 135 59 apaf-1-R ATCCCGTCCTGCCATCACGTACC bax-F AAGGCGCTGACCACCAACC 150 58 bax-R GGCTACTGTCCTCCACCGAGA bcl-2-F ACCATCGTCACCTCCGACTCC 115 56 bcl-2-R ACTTTGGGCGAGTTCTTTGTCGT caspase-1-F GAGACAGCCCGATCCACTCCCAC 150 58 caspase-1-R AGCAGAGACCCTTTGACCGAGTGT caspase-3-F ATGGACTACCCCAGCCTCGGAAC 101 57 caspase-3-R GCAGCATCAACATCCGTCCCGTT diablo-F CAATGCTGTCAACCTGTG 146 55 diablo-R TCTTATCTGCGTCTGCTG 
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[1] JI L Q, JIANG K Y, LIU M, et al. Low temperature stress on the hematological parameters and HSP gene expression in the turbot Scophthalmus maximus[J]. Chin J Oceanol Limnol, 2016, 34(3): 430-440. doi: 10.1007/s00343-016-4367-z
[2] 刘丽丽, 朱华, 闫艳春, 等. 鱼类低温耐受机制与功能基因研究进展[J]. 生物技术通报, 2018, 34(8): 50-57. [3] BEN S R, TOMMY N, WILLIAM R D. The benefit of being still: energy savings during winter dormancy in fish come from inactivity and the cold, not from metabolic rate depression[J]. Proc Roy Soc B, 2018, 285(1886): 1-10.
[4] 王晓煜, 胡春兰, 程鹏丽, 等. 低温驯化对斑马鱼ZF4细胞凋亡和ROS的影响[J]. 基因组学与应用生物学, 2020, 39(10): 4475-4480. [5] SUNG C H, DO H M, LEE M K, et al. Histopathological observation of liver in cultured black rock fish Sebastes schlegeli in low temperature season[J]. J Fish Pathol, 2011, 24(3): 225-236. doi: 10.7847/jfp.2011.24.3.225
[6] 蔡润佳, 张静, 黄建盛, 等. 低温胁迫对军曹鱼幼鱼脂代谢相关生理生化的影响[J]. 广东海洋大学学报, 2021, 41(3): 123-130. doi: 10.3969/j.issn.1673-9159.2021.03.016 [7] 邵彦翔, 陈超, 李炎璐, 等. 低温胁迫对云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交后代血清生化指标的影响[J]. 渔业科学进展, 2017, 38(2): 70-76. doi: 10.11758/yykxjz.20160103001 [8] 施兆鸿, 谢明媚, 彭士明, 等. 温度胁迫对银鲳 (Pampus argenteus) 幼鱼消化酶活性及血清生化指标的影响[J]. 渔业科学进展, 2016, 37(5): 30-37. [9] 管敏, 张厚本, 王龙, 等. 急性低温胁迫对史氏鲟幼鱼抗氧化和免疫指标的影响[J]. 淡水渔业, 2018, 48(6): 17-22. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2018.06.003 [10] 谭连杰, 林黑着, 黄忠, 等. 当归多糖对卵形鲳鲹生长性能、抗氧化能力、血清免疫和血清生化指标的影响[J]. 南方水产科学, 2018, 14(4): 72-79. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2018.04.009 [11] 李向. 小肽和维生素D3对大口黑鲈 (Micropterus salmoides) 生长、肝脏代谢和肠道微生物的影响[D]. 上海: 上海海洋大学, 2020: 21-34. [12] 李丹丹, 陈丕茂, 朱爱意, 等. 黑鲷幼鱼力竭运动后代谢酶活性的恢复水平[J]. 南方水产科学, 2018, 14(6): 59-65. doi: 10.12131/20180064 [13] 陈旭, 王一福, 周胜杰, 等. 低温胁迫下甘草对尖吻鲈幼鱼血清和肝脏免疫酶及鳃Na+-K+-ATP酶活性的影响[J]. 中国渔业质量与标准, 2020, 10(5): 18-24. doi: 10.3969/j.issn.2095-1833.2020.05.004 [14] 陈智. 低温胁迫对荷那龙罗非鱼血液生理生化指标的影响[D]. 湛江: 广东海洋大学, 2011: 10-32. [15] 郭双, 邢栋, 吕勃. 细胞凋亡及细胞程序性坏死和细胞焦亡的研究进展[J]. 中华实用诊断与治疗杂志, 2021, 35(3): 321-324. [16] ZHANG Y Y, CHEN X, CYRIL G, et al. Plasma membrane changes during programmed cell deaths[J]. Cell Res, 2018, 28(1): 9-21. doi: 10.1038/cr.2017.133
[17] 杨静, 许明君, 王钇力, 等. 千金藤碱通过MAPK/ERK信号通路对鼻咽癌大鼠的防治作用及对Survivin、XIAP、Bcl-2表达的影响[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2021, 42(4): 633-638. [18] JORDAN L M, GERMAIN G, JULIEN P, et al. Bcl-2 family of proteins in the control of mitochondrial calcium signalling: an old chap with new roles[J]. Int J Mol Sci, 2021, 22(7): 3730. doi: 10.3390/ijms22073730
[19] 张彐宁, 高维娟, 周晓红, 等. 沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2021, 37(1): 21-25, 30. doi: 10.3969/j.issn.1000-484X.2021.01.003 [20] 胡善明, 王亚楠, 许正茂, 等. Bcl-2家族分子在细胞凋亡中的作用研究进展[J]. 动物医学进展, 2021, 42(10): 85-89. doi: 10.3969/j.issn.1007-5038.2021.10.016 [21] BRATTON S B, SALVESEN G S. Regulation of the Apaf-1-caspase-9 apoptosome[J]. J Cell Sci, 2010, 123(19): 3209-3214. doi: 10.1242/jcs.073643
[22] 王建卫. XIA P、Apaf-1和Caspase-3在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义[D]. 石家庄: 河北医科大学, 2019: 32-35. [23] ADRAIN C, CREAGH E M, MARTIN S J. Apoptosis-associated release of Smac/DIABLO from mitochondria requires active caspases and is blocked by Bcl-2[J]. EMBO J, 2001, 20(23): 6627-6636. doi: 10.1093/emboj/20.23.6627
[24] LIN Z J, ZHANG Z Y, SOLBERG M F, et al. Comparative transcriptome analysis of mixed tissues of black porgy (Acanthopagrus schlegelii) with differing growth rates[J]. Aquac Res, 2021, 52(11): 5800-5813. doi: 10.1111/are.15455
[25] 王裕玉, 徐跑, 张志伟, 等. 不同养殖模式对黑鲷生长、血清生化指标及抗氧化性能的影响[J]. 江苏农业科学, 2020, 48(23): 155-160. [26] 李涛, 吕国敏, 黄小林, 等. 温度和盐度骤变对黑鲷仔鱼存活率的影响[J]. 江苏农业科学, 2014, 42(4): 181-182. doi: 10.3969/j.issn.1002-1302.2014.04.069 [27] 陈得仿, 王腾, 刘永, 等. 大亚湾黑鲷繁殖特征的生物学研究[J]. 南方水产科学, 2019, 15(5): 41-47. doi: 10.12131/20190051 [28] 陈自强, 张志勇, 祝斐, 等. 急性低温对黑鲷抗氧化酶活性和热休克蛋白含量的影响[J]. 动物学杂志, 2020, 55(6): 784-792. [29] ZHANG Z Y, ZHANG K, CHEN S Y, et al. A draft genome of the Chinese black porgy, Acanthopagrus schlegelii[J]. GigaScience, 2018, 7(4): 1-7.
[30] 张先炳, 胡亚萍, 杨威, 等. 水温对淡水温水性鱼类生命活动的影响[J]. 水生态学杂志, 2021, 42(4): 117-122. [31] 龙勇, 葛国栋, 李西西, 等. 鱼类低温应激反应的调控机制[J]. 水生生物学报, 2021, 45(6): 1405-1414. [32] 陆健, 张佳佳, 周国勤, 等. 急性高温胁迫对大口黑鲈“优鲈3号”肝脏凋亡相关酶活性和基因表达的影响[J]. 淡水渔业, 2021, 51(2): 81-86. doi: 10.3969/j.issn.1000-6907.2021.02.010 [33] 区又君, 刘奇奇, 温久福, 等. 急性低温胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、肌肉以及鳃组织结构的影响[J]. 生态科学, 2018, 37(5): 53-59. [34] 余焱方, 刘鉴毅, 冯广朋, 等. 盐度骤变对金钱鱼幼鱼鳃线粒体丰富细胞形态结构的影响[J]. 南方水产科学, 2021, 17(2): 60-69. doi: 10.12131/20200214 [35] 丁炜东, 曹丽萍, 曹哲明, 等. 氨氮胁迫对翘嘴鳜幼鱼鳃、消化道酶活力的影响[J]. 南方水产科学, 2020, 16(3): 31-37. doi: 10.12131/20190188 [36] OSTROWSKI A D, WATANABE W O, MONTGOMERY F P, et al. Effects of salinity and temperature on the growth, survival, whole body osmolality, and expression of Na+/K+ ATPase mRNA in red porgy (Pagrus pagrus) larvae[J]. Aquaculture, 2011, 314(1): 193-201.
[37] 胡玲红, 王映, 王化敏, 等. 不同温度胁迫对青鳉鳃凋亡的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2021, 36(6): 929-936. [38] 宾石玉, 林勇, 曾兰, 等. 低温胁迫对埃及尼罗罗非鱼肝、脾和鳃细胞形态的影响[J]. 广西师范大学学报(自然科学版), 2015, 33(3): 123-128. [39] 张琦, 杨昭杰, 赵汝丽, 等. 多不饱和脂肪酸与深黄被孢霉低温适应性的关系(英文)[J]. 昆明理工大学学报(自然科学版), 2015, 40(1): 67-73. [40] MOURENTE G, DIAZ-SALVAGO E, BELL J G, et al. Increased activities of hepatic antioxidant defence enzymes in juvenile gilthead sea bream (Sparus aurata L. ) fed dietary oxidised oil: attenuation by dietary vitamin E[J]. Aquaculture, 2002, 214(1/2/3/4): 343-361.
[41] 油九菊, 李伟业, 殷小龙, 等. 急性低温胁迫对条纹锯鮨血清生化指标的影响[J]. 安徽农业科学, 2019, 47(8): 109-113. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2019.08.028 [42] 刘波, 王美垚, 谢骏, 等. 低温应激对吉富罗非鱼血清生化指标及肝脏HSP70基因表达的影响[J]. 生态学报, 2011, 31(17): 4866-4873. [43] 郭晓丽, 黄智慧, 马爱军, 等. 热应激对大菱鲆心肌损伤及细胞凋亡的影响[J]. 水产学报, 2022, 46(6): 1074-1084. [44] 秦华平, 杨常春, 王强, 等. 深低温对全脑缺血大鼠海马Bax表达的影响及其与细胞凋亡的关系[J]. 中华神经医学杂志, 2017, 16(12): 1286-1289. doi: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2017.12.019 [45] 闫利霞, 黄晓, 张鑫, 等. miR-24对过氧化氢诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响及其与线粒体Smac/Diablo-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系[J]. 眼科新进展, 2021, 41(5): 417-421. -
期刊类型引用(4)
1. 毛嘉烜，汪振华，章守宇，林军，邹沁东，陈怡卉. 大陈岛海域潮下带岩礁生境鱼类群聚特征. 上海海洋大学学报. 2025(03): 604-617 . 
百度学术
2. 廖东荣，黎傲雪，陈宁，吕少梁，王学锋. 湛江港皮氏叫姑鱼种群生物学特征和资源开发状态. 南方水产科学. 2024(03): 27-35 . 本站查看
3. Wen Yang，Wenjia Hu，Bin Chen，Hongjian Tan，Shangke Su，Like Ding，Peng Dong，Weiwei Yu，Jianguo Du. Impact of climate change on potential habitat distribution of Sciaenidae in the coastal waters of China. Acta Oceanologica Sinica. 2023(04): 59-71 . 必应学术
4. 杨雯，胡文佳，陈彬，谭红建，董鹏，俞炜炜，杜建国. 基于MaxEnt模型的中国近海主要石首鱼科鱼类潜在适生区. 生态学杂志. 2022(09): 1825-1834 . 百度学术
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