Protective effect of hydrolyzed ultrafiltration fractions from oyster (Crassostrea hongkongensis) on oxidative damage of TM4 Sertoli cells
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摘要: 该研究通过雷公藤甲素 (TP) 损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型，探究了香港牡蛎 (Crassostrea hongkongensis) 酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠 (Mus musculus) 睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用，并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量，比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽 (GSH)、丙二醇 (MDA) 和活性氧 (ROS) 水平的影响。结果表明，牡蛎酶解超滤组分富含铜 (Cu)、锌 (Zn)、锰 (Mn) 和硒 (Se) 等微量金属元素；经超滤分级，小分子与大分子物质得到有效分离；与模型组相比，各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率，其中<3、3~5和5~10 ku超滤组分的细胞存活率高于>10 ku超滤组分；而<3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤，减少细胞内ROS产生和脂质过氧化，增强TM4细胞的抗氧化能力。Abstract: In this study, TM4 Sertoli cells were injured by triptolide (TP) to construct a germ cell injury model, so as to explore the protective effect of oyster (Crassostrea hongkongensis) hydrolyzed ultrafiltration fractions on TP-induced oxidative damage of TM4 Sertoli cells in mice (Mus musculus). Besides, the molecular mass distribution and trace metal element content of the oyster hydrolyzed ultrafiltration fractions were detected, and the cell viability, GSH content, MDA content and ROS level of TM4 cells induced by TP by ultrafiltration fractions were compared. The results show that the oyster hydrolyzed ultrafiltration fractions are rich in trace metal elements such as copper, zinc, manganese and selenium; most small molecules and macromolecular substances were separated by ultrafiltration; compared with the model group, ultrafiltration fractions improved the cell viability of TM4 cells induced by TP. The cell viability of <3, 3–5 and 5–10 ku ultrafiltration fractions was higher than that of >10 ku ultrafiltration fraction; <3 ku ultrafiltration fraction could prevent TP-induced oxidative stress damage in TM4 cells, reduce the production of intracellular reactive oxygen species and lipid peroxidation, and enhance the antioxidant activity of TM4 cells.
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Keywords:
- Crassostrea hongkongensis /
- Ultrafiltration fraction /
- Sertoli cells /
- Triptolide /
- Oxidative damage
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罗非鱼原产于非洲，现已被联合国粮农组织(FAO)列为人类六大主食品之一[1]，罗非鱼产业是当今世界渔业的重要组成部分。罗非鱼因具有生长快、产量高、食性杂、适应性与抗病力强，可在淡水与咸水中养殖等优点，而且其肉厚色白、质嫩刺少、富有弹性、细腻味美，含多种不饱和脂肪酸及丰富的蛋白质、维生素、微量元素等营养成分，成为深受生产者和消费者喜爱的鱼类品种之一。近年来，中国大力推广养殖罗非鱼，随着高密度精养模式的发展，在养殖中大量使用高脂、高糖饲料，采取饱食性投喂，导致罗非鱼脂肪肝病频繁发生。
鱼类脂肪肝病是长期以来困扰水产养殖者的难题之一。近年来国内外学者围绕脂肪肝病对鱼类生长的影响、脂肪肝组织学及脂肪肝病防治等开展了大量研究，研究对象包括舌齿鲈Moronidae Dicentrarchus、大西洋鳕Gadus morhua、草鱼Ctenopharyngodon idellus、团头鲂Megalobrama amblycephala、红姑鱼Sciaenops ocellatus、石斑鱼Epinephelus akaara等众多种类[2-7]，目前对于罗非鱼脂肪肝病仅见黄凯等[8]和庞思成[9]初步研究报道。文章通过配制不同脂肪含量的饲料，研究养殖中奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)的生长指标与肝脏形态学、组织学等变化，旨在阐明脂肪水平对罗非鱼幼鱼脂肪肝病发生的影响，为罗非鱼高效健康养殖及养殖鱼类脂肪肝病的防治提供理论依据和技术支撑。
1. 材料与方法
1.1 试验鱼和养殖方法
试验用奥尼罗非鱼幼鱼体长2.08±0.18 cm，体重0.26±0.02 g。随机取600尾试验鱼，分为5组，每组设3个平行，每个水泥池养殖40尾鱼，15个室外长方形水泥池(0.75 m×0.5 m×1.2 m)均循环流水过滤，试验期间自然光照。水温26.5±2.0℃，DO 7.03±0.23 mg · L-1，pH 6.9±0.1，NH3-N含量0.03±0.01 mg · L-1。
养殖试验为期70 d，在前30 d投饲每天为鱼体重5%左右，每天上午8时至下午8时每隔3 h投喂1次，共投喂5次；30 d后每天投饲量为鱼体重3%左右，每天投喂3次，分别为上午9时、中午1时和下午6时。并在投喂30 min后迅速吸取残饵并晒干称重。
1.2 饲料配制
试验饲料原料包括酪蛋白、明胶、纤维素、糊精、鱼油、豆油、复合维生素、复合矿盐、氯化胆碱和氯化钠等。为了排除饲料蛋白和能量等因素的影响，各组饲料添加等氮和等能量的酪蛋白和糊精，采用鱼油和豆油1 : 1混合后作为添加的脂肪源。试验共设5个脂肪梯度组，1~5组添加的脂肪量分别为0%、2%、4%、6%和8%，饲料蛋白源为酪蛋白，用糊精调节脂肪梯度，饲料日粮配方组成见表 1。将原料用小型颗粒机制粒，在60℃恒温箱中经5 h烘干，制成粒径2 mm的颗粒状饲料，密封冷藏备用。
表 1 奥尼罗非鱼幼鱼基础日粮的组成Table 1 Composition of the experimental diets for juvenile tilapia% 配方
formulation试验组treatments 1 2 3 4 5 鱼油与豆油fish oil and soybean oil 0 2.00 4.00 6.00 8.00 糊精dextrine 51.57 49.57 47.57 45.57 43.57 酪蛋白casein 35.00 35.00 35.00 35.00 35.00 明胶glutin 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 纤维素cellulose 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 复合维生素avitamins permix 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 复合矿盐bmineral permix 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 氯化胆碱choline chloride 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 氯化钠sodium chloride 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 粘合剂adhesive 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 抗氧化剂antioxidant 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 诱食剂phagostimulant 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 防腐剂antiseptic 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 注：a. 每千克复合维生素含VD 480 000 IU，VE 20.00 g，VK 0.20 g，VC 14.00 g，VB1 0.10 g，VB2 1.40 g，VB6 1.20 g，VB12 0.20 g，泛酸钙6.521 g，烟酸5.60 g，生物素0.20 g，肌醇88.00 g；b. 每千克复合矿盐含FeSO4 · 7H2O(19.74%Fe)152.00 g，CuSO4 · 5H20(25.22%Cu)2.40 g，ZnSO4 · 7H2O(19.25%Zn)31.20 g，MnSO4 · H2O(31.89%Mn)8.20 g，Na2SeO3 · 5H2O(28.54%)0.18 g，KI(75.73%)0.16 g，CaCO3 805.86 g
Note：a. Vitamins premix per kilogram including VD 480 000 IU, VE 20.00 g, VK 0.20 g, VC 14.00 g, VB1 0.10 g, VB2 1.40 g, VB6 1.20 g, VB12 0.20 g, pantothenic acid calcium 6.521 g, nicotinic acid 5.60 g, biotin 0.20 g, inositol 88.00 g；b. mineral premix per kilogram including FeSO4 · 7H2O (19.74%Fe) 152.00 g, CuSO4 · 5H20 (25.22%Cu) 2.40 g, ZnSO4 · 7H2O (19.25%Zn) 31.20 g, MnSO4 · H2O (31.89%Mn) 8.20 g, Na2SeO3 · 5H2O (28.54%) 0.18 g, KI (75.73%) 0.16 g, CaCO3 805.86 g1.3 样品采集与测定
养殖试验结束时，每池随机取罗非鱼10尾，首先用MS-222麻醉后逐尾测定体长体重，进行生长指标统计。随后逐尾解剖，观察记录内脏中各个器官组织(肝胰脏、胆囊等)变化特征，并拍照留存。最后剖离出肝脏，固定于10%福尔马林缓冲液中，按常规组织切片法进行脱水、石蜡包埋、切片和H-E(苏木精-伊红对染法)染色；切片厚度5~6 μm；切片在光学显微镜下观察记录微观形态结构特征，并拍照留存。
1.4 数据统计与分析
采用统计分析软件SPSS 13.0进行方差分析和Duncan氏多重比较，各组试验数据结果以平均数±标准差表示。试验的相关计算公式：
相对增重率(%) = (末重－初重) /初重×100；
肥满度=体重/全长3×100；
饲料系数=摄食饲料总量/ (末重－初重)。
2. 结果与分析
2.1 不同脂肪含量饲料对生长的影响
养殖期间奥尼罗非鱼幼鱼1~5组间的增重率均有显著性差异。1~3组试验鱼随着饲料脂肪水平升高，增重率先升高后降低，以3组为最高。肥满度变化规律与增重率相似，呈现先上升后下降的趋势，以3组最高，达(1.92±0.18)%；1、3、4和5组间肥满度均有显著性差异；而2组试验鱼则与1组、3组间有显著性差异，与4、5组间无显著性差异。饲料系数在1~5组间均有显著性差异，3组试验鱼饲料系数最低，为1.01±0.09，5组的最高，达1.36±0.23(表 2)。
表 2 饲料脂肪水平对奥尼罗非鱼幼鱼生长指标的影响Table 2 Effects of different diet lipid levels on growth of juvenile tilapia生长指标
growth index试验组treatments 1 2 3 4 5 增重率/% WGR 3 554±68a 4 369±111b 5 481±156c 4 269±203de 3 404±128e 肥满度/% CF 1.63±0.14a 1.78±0.21bc 1.92±0.18de 1.80±0.21b 1.74±0.24c 饲料系数FCR 1.12±0.13a 1.08±0.12b 1.01±0.09c 1.24±0.19de 1.36±0.23e 注：同行所标字母不同表示两者差异显著，而字母相同表示差异不显著
Note：The different letters on the parameters in one row stand for significant difference (P < 0..05), otherwise, the same ones stand for no significant difference.2.2 饲料脂肪水平对肝脏脂肪含量的影响
由表 3可知，随着脂肪添加量的增加，1~5组奥尼罗非鱼幼鱼肝脏重量、肝体比、肝脏脂肪含量和肌肉脂肪含量等4个指标均呈现逐渐升高的趋势，饲料脂肪水平对这4个指标都有明显影响，呈正相关关系。5组的肝脏脂肪含量为(43.44±3.87)%，分别比1、2、3和4组高34.53%、24.72%、19.11%和10.59%。随着脂肪添加量的增加，1~5组奥尼罗非鱼幼鱼的肝脏重量、肝体比和肝脏脂肪含量等指标在各个组间都具显著性差异。
表 3 饲料脂肪水平对奥尼罗非鱼幼鱼肝脏脂肪含量的影响Table 3 Effects of different diet lipid levels on liver fat content of juvenile tilapia指标
index试验组treatments 1 2 3 4 5 肝脏重/g liver weight 0.29±0.08e 0.38±0.11d 0.49±0.18c 0.58±0.12b 0.67±0.21a 肝体比/% HSI 2.85±0.15e 3.22±0.19d 3.84±0.36c 4.65±0.54b 5.56±0.71a 肝脏脂肪含量(湿重)/%
liver fat content32.29±2.24e 34.83±3.53d 36.47±2.39c 39.28±3.34b 43.44±3.87a 注：同行所标字母不同表示两者差异显著，字母相同表示差异不显著Note：The different superscript letters on the parameters in one row stand for significant difference (P < 0..05), otherwise, the same ones stand for no significant difference. 2.3 不同脂肪含量饲料对脂肪肝形成的影响
投喂不同脂肪含量的饲料，经70 d养殖试验后，各个试验组罗非鱼的肝脏和胆囊颜色及体积的异常变化见表 4。结果表明，低脂肪水平的1~3组与高脂肪水平的4~5组的肝脏和胆囊差别较大。1~3组肝脏和胆囊的颜色与体积正常，肠系膜无白色脂肪沉积(图 1－a)。而4~5组病鱼的肝胰脏肿大，呈油腻状，颜色发黄，柔软粉糊，用刀切易碎，有的出现白色坏死病灶，部分胆囊肿大且颜色变深，肠系膜均有过量的白色脂肪沉积，严重时脂肪几乎覆盖整个肠器官，呈现典型的脂肪肝病变特征(图 1－b)。第4组脂肪肝出现率为44.44%，第5组脂肪肝出现率为66.67%。
表 4 不同饲料脂肪水平对奥尼罗非鱼幼鱼脂肪肝形成的影响Table 4 Effects of different diet lipid levels on fatty liver disease in juvenile tilapia% 组别
group肝脏liver 胆囊gallbladder 出现脂肪肝
appearance of fatty liver disease颜色异常colour abnormity 体积异常volume abnormality 颜色异常colour abnormality 体积异常volume abnormality 1 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 4 55.56 55.56 55.56 55.56 44.44 5 33.33 33.33 33.33 33.33 66.67 ![]()
图 1 正常与患病的罗非鱼比较a. 正常的奥尼罗非鱼幼鱼剖腹观察(取自第1组)；b. 患病的奥尼罗非鱼幼鱼剖腹观察(取自第5组)Fig. 1 The difference between normal and sick tilapiaa. The viscus dissection symptom of normal tilapia(group 1);b. The viscus dissection symptom of sick tilapia(group 5)2.4 脂肪肝的病变特征
对不同试验组的奥尼罗非鱼幼鱼肝脏进行组织学切片，并在光学显微镜下(16×100~16×200)观察拍照，肝细胞拍照结果见图 2－1~5。1~3组试验鱼肝细胞排列整齐，肝细胞索明显，肝细胞平均直径为8.9 μm，未发现脂肪肝病变特征。4~5组罗非鱼肝细胞平均直径为17.9 μm，最大达23.2 μm，呈现明显的脂肪肝病变特征，患病组肝细胞的直径超过正常组肝细胞约1倍(表 5)。1~5组试验鱼的肝细胞直径随着饲料脂肪水平升高而增大，其中低脂肪水平的1~3组与高脂肪水平的4~5组有显著差异，而1组、2组、3组间无显著差异，4和5组间亦无显著差异。
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图 2 各组肝脏组织学切片N. 细胞核；CM. 细胞膜；FD. 脂肪滴；1. 1组试验鱼肝脏切片图(H-E染色，×40)；2. 2组试验鱼肝脏切片图(H-E染色，×40)；3. 3组试验鱼肝脏切片图(H-E染色，×40)；4. 4组试验鱼肝脏切片图(H-E染色，×40)；5. 5组试验鱼肝脏切片图(H-E染色，×40)Fig. 2 Histology of different groupN. nucleus; CM. cell membrane; FD. fat dripping; 1. The liver section of tilapia (group 1); 2. The liver section of tilapia (group 2);3. The liver section of tilapia (group 3); 4. The liver section of tilapia (group 4);5. The liver section of tilapia (group 5).表 5 罗非鱼肝脏组织细胞病理变化特征Table 5 Pathological changes in hepatopancreas cells of juvenile tilapia fed diets with different lipid levels试验组group 1 2 3 4 5 肝细胞脂肪变性(空泡化)liver cell is change － － － ++ +++ 肝细胞坏死liver cell is dead － － － + +++ 肝细胞直径/μm liver cell diameter 7.8±2.5a 8.7±1.3a 10.4±0.5a 16.5±4.4b 19.3±3.9b 肝脏颜色live colour 正常 正常 正常 淡黄色 土黄色 注：－.未见病变；+.轻度病变；+ +.中度病变；+ + +.重度病变；同行所标字母不同表示两者差异显著，字母相同表示差异不显著
Note：－.no pathological change；+.slight pathological change；+ +.medium pathological change；+ + +.high pathological change. The different letters on the parameters in one row stand for significant difference (P < 0..05), otherwise, the same ones stand for no significant difference.第5组患病试验鱼肝细胞核偏位，肝细胞胞浆内有大小不一的脂肪滴，且脂肪滴浸润细胞胞浆将细胞核挤压至一侧，甚至肝细胞核心出现萎缩，整个肝细胞浆充满脂肪滴使肝细胞肿胀、胞浆外逸，呈现细胞透明空泡化，变性的肝细胞随后坏死，有的细胞核破裂或溶解，有的细胞核消失，但其结构轮廓仍在。变性的肝细胞互相离散，肝小叶结构被破坏，显得柔软粉糊，用刀切易碎。坏死的组织被溶解吸收，肝脏表面出现大小不一的白色坏死病灶。
3. 讨论
3.1 饲料脂肪含量与生长的关系
脂肪作为鱼类能量的主要来源之一，当饲料脂肪不足时，蛋白质将被作为能源消耗；因此，在饲料中适当提高脂肪含量，有助于提高饲料蛋白质的利用效率，促进鱼类生长。然而饲料脂肪水平过高，对鱼的生长和品质有不利影响，比如鱼类易患脂肪肝、代谢性疾病和肉味差等[10]。奥尼罗非鱼幼鱼生长指标表明，4%脂肪含量时试验鱼的生长最好，而在6%~8%脂肪含量时，罗非鱼幼鱼生长指标显著下降，甚至出现明显的脂肪肝病症状，初步表明奥尼罗非鱼幼鱼饲料中脂肪的适宜添加量为4%。
不同鱼类对饲料脂肪需要量不同，团头鲂幼鱼饲料中脂肪适宜含量为2%~5%，在3.6%左右团头鲂增重率最大，饲料系数最低和蛋白质效率最高[5]；俄罗斯鲟Acipenser gueldenstaeti稚鱼在饲料脂肪添加量为5%时增重率及饲料系数达到最佳[11]；鳜鱼Siniperca chuatsi在饲料脂肪水平7%~12%时特定生长率和蛋白质效率最高[10]，因此，此试验中奥尼罗非鱼幼鱼饲料脂肪添加量与杂食性鱼类团头鲂、俄罗斯鲟等相近，而比肉食性鳜鱼低，这表明饲料脂肪添加量与鱼类的食性密切相关。饲料脂肪添加量除与品种相关外，亦与饲料中脂肪酸组成、饲料配方、鱼类生长阶段、饲养条件等有关[12]。鱼类对饲料中脂肪的利用能力与高不饱和脂肪酸的差异密切有关[4, 6]，而且氧化油脂会导致罗非鱼的增重率和饲料转化率显著下降，肝体比增加[13]。
3.2 脂肪肝对内脏器官的影响
此试验中添加脂肪量6%~8%的4和5组罗非鱼均出现了典型的脂肪肝病，而添加脂肪量0~4%的1~3组未出现上述症状，表明饲料中脂肪添加过量易使罗非鱼幼鱼产生脂肪肝，这与冯健和贾刚[6]研究红姑鱼肝胰脏脂肪含量与日粮脂肪水平成正比，脂肪肝病的病变程度与日粮脂肪水平成正相关的结果一致。
罗非鱼患脂肪肝病后病变特征主要表现在肝脏、胆囊及肠系膜等部位。肝胰脏是鱼类的重要器官，是发生鱼类脂肪肝病的主要部位，患脂肪肝的罗非鱼肝脏肿大，油腻状，柔软粉糊，颜色发黄，有的出现白色坏死病灶，这与草鱼、红姑鱼、虹鳟Salrno irideus等患脂肪肝的症状相似[4, 6, 14]。鱼类患脂肪肝病后胆囊亦会发生一定的形态变化[14-15]，正常情况下，罗非鱼胆囊处于中等充满状态，颜色为绿色，此试验发现部分患病罗非鱼胆囊偏大且颜色变深为墨绿色。引起胆囊变化的原因可能是脂肪肝病的发生使病鱼食欲下降，肝脏中分泌至胆囊的胆汁无法排出从而使胆囊膨胀变大，胆汁大量淤积后使胆囊颜色变深，导致伴有胆汁淤积现象。罗非鱼脂肪消化吸收的主要部位在肠道前部，肠道内的脂肪酶大多数来自肝胰脏，饲料中的脂肪在脂肪酶的作用下分解为甘油和脂肪酸而被吸收，罗非鱼是无胃鱼类，由于摄入过量脂肪及脂肪肝影响脂肪酶的合成，因此，摄入的脂肪经过肠道被消化吸收时而发生沉积引起患脂肪肝病鱼的肠系膜有明显的脂肪积累。
3.3 脂肪肝对肝脏组织细胞结构的影响
脂肪肝可引起奥尼罗非鱼幼鱼肝细胞结构改变，呈现肝胰脏病理组织变化。患病试验鱼肝细胞排列不规则，肝细胞索较紊乱，肝细胞明显增大，肝细胞胞浆内出现明显的大小不一的脂肪滴，严重时整个肝细胞浆充满脂肪滴使细胞变性呈空泡化，部分肝细胞中细胞核偏位或消失，有的局部肝细胞坏死或浸润，这与红姑鱼、虹鳟等患脂肪肝后的症状相似[6, 14]。
LIN等[16]认为草鱼营养性脂肪肝发生可分为3个阶段：肝脂肪积存阶段、肝脂肪浸润阶段和肝细胞核心出现萎缩阶段。此试验中第4组病鱼肝细胞排列不规则，肝细胞索较紊乱，这是由于肝细胞中脂肪油滴蓄积细胞质，造成部分肝细胞增大，是脂肪肝病的第2个阶段；第5组部分病鱼肝细胞核偏位，肝细胞胞浆内有大小不一的脂肪滴，且脂肪滴浸润细胞胞浆将细胞核挤压至一侧，甚至肝细胞核心出现萎缩，这已发展为脂肪肝病的第3阶段。这与建鲤Cyprinuis carpio var.Jian摄食氧化脂肪造成的症状有相同之处，如肝脏表面形成腊样色素，肝细胞破裂，胞浆外逸，肝细胞肿大，细胞空泡变性，发生坏死等[17]。
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图 1 牡蛎酶解超滤组分作用于TM4细胞12 h (a) 和24 h (b) 后的细胞存活率
与空白对照组相比，*. 显著差异 (P<0.05)；**. 极显著差异 (P<0.01)。
Figure 1. Cell viability of oyster hydrolyzed ultrafiltration fractions after treatment on TM4 cells for 12 h (a) and 24 h (b)
Compared with the control group, *. Significant difference (P<0.05); **. Very significant difference (P<0.01).
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图 3 牡蛎超滤组分对雷公藤甲素诱导TM4细胞毒性的保护作用 (预处理时间：a. 6 h；b. 12 h)
Figure 3. Protective effect of oyster ultrafiltration fractions on TP-induced TM4 cytotoxicity (Pretreatment time: a. 6 h; b. 12 h)
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图 4 雷公藤甲素对TM4细胞内还原型谷胱甘肽和丙二醇含量的影响
Figure 4. Effect of TP on GSH and MDA content in TM4 cells
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图 5 牡蛎超滤组分对雷公藤甲素诱导TM4细胞内还原型谷胱甘肽和丙二醇含量的影响
Figure 5. Effect of oyster ultrafiltration fractions on GSH and MDA content in TM4 cells induced by TP
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图 6 DCFH-DA探针法检测TM4睾丸支持细胞内活性氧 (200×)
Figure 6. Intracellular ROS in TM4 Sertoli cells indicated as green fluorescence by DCFH-DA
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图 7 <3 ku牡蛎超滤组分对雷公藤甲素诱导TM4细胞内活性氧水平的影响
与模型组相比，*. 显著差异 (P<0.05)；**. 极显著差异 (P<0.01)；与空白对照组相比，#. 显著差异 (P<0.05)；##. 极显著差异 (P<0.01)。
Figure 7. Effect of <3 ku ultrafiltration fractions from oyster on TP-induced reactive oxygen species in TM4 cells
Compared with the model group, *. Significant difference (P<0.05); **. Very significant difference (P<0.01). Compared with the control group, #. Significant difference (P<0.05); ##. Very significant difference (P<0.01).
表 1 超滤膜分级后不同分子量区间的成分占各超滤组分的比值
Table 1 Ratio of different molecular mass ingredients to each ultrafiltration fraction after ultrafiltration membrane classification %
超滤组分
Ultrafiltration
fraction/ku分子量 Molecular mass <3 3~5 5~10 >10 >10 25.97 1.44 4.63 67.96 5~10 36.32 1.29 8.54 53.84 3~5 46.79 1.26 10.42 41.53 <3 57.48 2.65 9.17 30.72 
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表 2 牡蛎超滤组分微量金属元素质量分数
Table 2 Mass fractions of trace metal elements in oyster ultrafiltration fractions
mg·kg–1 超滤组分
Ultrafiltration fraction/ku铜
Cu锌
Zn锰
Mn硒
Se>10 771 2701 19.7 3.96 5~10 1918 3128 28.3 3.69 3～5 1952 2998 25.4 4.08 <3 1928 3019 22.0 3.47
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[1] WILLEM O, IAN C, SILKE D, et al. Infertility and the provision of infertility medical services in developing countries[J]. Hum Reprod Update, 2008, 14(6): 605-621. doi: 10.1093/humupd/dmn042
[2] JAROW J P, SHARLIP I D, BELKER A M, et al. Best practice policies for male infertility[J]. Fertil Steril, 2002, 77(5): 873-882. doi: 10.1016/S0015-0282(02)03105-9
[3] LEE P A, HOUK C P. Cryptorchidism[J]. Curr Opin Endocrinol, 2013, 20(3): 210-216. doi: 10.1097/MED.0b013e32835ffc7d
[4] LI X, YAO Z, YANG D, et al. Cyanidin-3-O-glucoside restores spermatogenic dysfunction in cadmium-exposed pubertal mice via histone ubiquitination and mitigating oxidative damage[J]. J Hazard Mater, 2019, 387: 121706.
[5] BUDIN S B, KHO J H, LEE J H, et al. Low-dose nicotine exposure induced the oxidative damage of reproductive organs and altered the sperm characteristics of adolescent male rats[J]. Malays J Med Sci, 2017, 24(6): 50-57.
[6] NI F D, HAO S L, YANG W X. Molecular insights into hormone regulation via signaling pathways in Sertoli cells: with discussion on infertility and testicular tumor[J]. Gene, 2020, 753: 144812. doi: 10.1016/j.gene.2020.144812
[7] ZHAO Y, ZHANG P, GE W, et al. Alginate oligosaccharides improve germ cell development and testicular microenvironment to rescue busulfan disrupted spermatogenesis[J]. Theranostics, 2020, 10(7): 3308-3324. doi: 10.7150/thno.43189
[8] CHEN Y, WANG J, CHEN X, et al. Microcystin-leucine arginine mediates apoptosis and engulfment of Leydig cell by testicular macrophages resulting in reduced serum testosterone levels[J]. Aquat Toxicol, 2018, 199: 116-126. doi: 10.1016/j.aquatox.2018.03.018
[9] BISHT S, FAIQ M, TOLAHUNASE M, et al. Oxidative stress and male infertility[J]. Nat Rev Urol, 2017, 14(8): 470-485. doi: 10.1038/nrurol.2017.69
[10] WANG B, MA L, TAO X, et al. Triptolide, an active component of the Chinese herbal remedy Tripterygium wilfordii Hook. f., inhibits production of nitric oxide by decreasing inducible nitric oxide synthase gene transcription[J]. Arthritis Rheum, 2004, 50(9): 2995-3003. doi: 10.1002/art.20459
[11] 徐颖, 樊媛芳, 赵元, 等. 近40年雷公藤生殖毒性研究概述[J]. 中国中药杂志, 2019, 44(16): 3406-3414. [12] HUYNH P N, HIKIM A P S, WANG C, et al. Long-term effects of triptolide on spermatogenesis, epididymal sperm function, and fertility in male rats[J]. J Androl, 2000, 21(5): 689-699.
[13] WANG Y, GUO S H, SHANG X J, et al. Triptolide induces Sertoli cell apoptosis in mice via ROS/JNK-dependent activation of the mitochondrial pathway and inhibition of Nrf2-mediated antioxidant response[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2018, 39(2): 311-327. doi: 10.1038/aps.2017.95
[14] 代春美, 廖晓宇, 叶祖光. 海洋中药牡蛎的化学成分、药理活性及开发应用[J]. 天然产物研究与开发, 2016, 28(3): 471-474, 437. [15] 叶知秋. 海鲜食疗养生法[M]. 长春: 吉林科学出版社, 2004: 98-100. [16] 陈必链, 王绍钊, 吴松刚. 牡蛎水提取氨基酸的研究[J]. 适用技术市场, 1998(4): 25-26. [17] HAO G, CAO W, HAO J, et al. In vitro antioxidant activity and in vivo anti-fatigue effects of oyster (Ostrea plicatula Gmelin) peptides prepared using neutral proteinase[J]. Food Sci Technol Res, 2013, 19(4): 623-631. doi: 10.3136/fstr.19.623
[18] 李婉, 曹文红, 章超桦, 等. 牡蛎酶解产物的组成特点及其体外免疫活性[J]. 食品工业科技, 2017, 38(16): 35-42. [19] MIAO J, LIAO W, KANG M, et al. Anti-fatigue and anti-oxidant activities of oyster (Ostrea rivularis) hydrolysate prepared by compound protease[J]. Food Funct, 2018, 9(12): 6577-6585. doi: 10.1039/C8FO01879K
[20] 吕佳桐, 林海生, 秦小明, 等. 牡蛎及其酶解产物抗皮肤光老化的初步研究[J]. 南方水产科学, 2021, 17(1): 91-100. doi: 10.12131/20200141 [21] 邱娟, 沈建东, 翁凌, 等. 利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化[J]. 食品科学, 2017, 38(16): 165-172. doi: 10.7506/spkx1002-6630-201716026 [22] 邓燕群. 牡蛎活性肽及其复合物降血糖作用的研究[D]. 汕头: 汕头大学, 2015: 27-30. [23] ZHANG C, LI X, JING X, et al. Protective effects of oyster extract against hepatic tissue injury in alcoholic liver diseases[J]. J Ocean Univ China, 2014, 13(2): 262-270. doi: 10.1007/s11802-014-2449-0
[24] 张雪妍, 秦小明, 高加龙, 等. 牡蛎酶解工艺优化及其酶解产物对小鼠睾酮分泌的影响[J]. 广东海洋大学学报, 2019, 39(3): 96-102. doi: 10.3969/j.issn.1673-9159.2019.03.013 [25] 陈悦, 李路, 闫朝阳, 等. 小分子牡蛎多肽对雄性小鼠性功能的影响[J]. 基因组学与应用生物学, 2019, 38(1): 109-116. [26] LI S, SONG Z, LIU T, et al. Polysaccharide from Ostrea rivularis attenuates reproductive oxidative stress damage via activating Keap1-Nrf2/ARE pathway[J]. Carbohydr Polym, 2018: 321-331.
[27] 黄艳球. 牡蛎肉及其酶解产物对半去势雄性大鼠性功能的影响[D]. 湛江: 广东海洋大学, 2019: 12-24. [28] LI W, XU C, ZHANG C, et al. The purification and identification of immunoregulatory peptides from oyster (Crassostrea hongkongensis) enzymatic hydrolysate[J]. RSC Adv, 2019, 9(56): 32854-32863. doi: 10.1039/C9RA04255E
[29] MA B, ZHANG J, ZHU Z M, et al. Aucubin, a natural iridoid glucoside, attenuates oxidative stress-induced testis injury by inhibiting JNK and CHOP activation via Nrf2 up-regulation[J]. Phytomedicine, 2019, 64: 153057. doi: 10.1016/j.phymed.2019.153057
[30] MA B, ZHANG J, ZHU Z M, et al. Luteolin ameliorates testis injury and blood-testis barrier disruption through the Nrf2 signaling pathway and by upregulating Cx43[J]. Mol Nutr Food Res, 2019, 63(10): e1800843. doi: 10.1002/mnfr.201800843
[31] SKORACKA K, EDER P, DOBROWOLSKA A. Diet and nutritional factors in male (in) fertility: underestimated factors[J]. J Clin Med, 2020, 9(5): 1400. doi: 10.3390/jcm9051400
[32] 林海生, 秦小明, 章超桦, 等. 中国沿海主要牡蛎养殖品种的营养品质和风味特征比较分析[J]. 南方水产科学, 2019, 15(2): 110-120. doi: 10.12131/20180226 [33] CHEN D, LIU Z, HUANG W, et al. Purification and characterisation of a zinc-binding peptide from oyster protein hydrolysate[J]. J Func Food, 2013, 5(2): 689-697. doi: 10.1016/j.jff.2013.01.012
[34] ZHOU C, HU J, MA H, et al. Antioxidant peptides from corn gluten meal: orthogonal design evaluation[J]. Food Chem, 2015, 187(15):270-278.
[35] SADIK N A H. Effects of diallyl sulfide and zinc on testicular steroidogenesis in cadmium-treated male rats[J]. J Biochem Mol Toxicol, 2010, 22(5): 345-353.
[36] POURHASSANALI N, ROSHAN-MILANI S, KHERADMAND F, et al. Zinc attenuates ethanol-induced Sertoli cell toxicity and apoptosis through caspase-3 mediated pathways[J]. Reprod Toxicol, 2016, 61: 97-103. doi: 10.1016/j.reprotox.2016.03.041
[37] 刘姝, 王淑军, 房耀维, 等. 发酵法制备太平洋牡蛎水解液的功能特性及其抗氧化活性[J]. 水产科学, 2013, 32(11): 641-645. doi: 10.3969/j.issn.1003-1111.2013.11.003 [38] 林海生. 牡蛎蛋白肽的酶法制备及其改善小鼠学习记忆功能的研究[D]. 湛江: 广东海洋大学, 2013: 25-32. [39] MORIMOTO H, IWATA K, OGONUKI N, et al. ROS are required for mouse spermatogonial stem cell self-renewal[J]. Cell Stem Cell, 2013, 12(6): 774-786. doi: 10.1016/j.stem.2013.04.001
-
期刊类型引用(3)
1. 王晗，卢圣鄂，卓维，亓俊朋，任风鸣. Illumina高通量测序辅助分离鉴定宽体金线蛭肠炎病病原菌. 中国药学杂志. 2025(07): 695-703 . 
百度学术
2. 田甜，张建明，朱欣，张德志，胡亚成. 50日龄中华鲟幼鱼肠道微生物群落结构特征及其影响因素. 南方水产科学. 2025(02): 102-109 . 本站查看
3. 杨飞，汪斌，喻召雄，周治兵，兰松，张中良，周波. 长江鲟源致病性中间气单胞菌的分离鉴定及药敏试验. 西南农业学报. 2024(12): 2787-2792 . 百度学术
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