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氨氮胁迫下白斑综合征病毒对凡纳滨对虾的致病性
方金龙, 王元, 房文红, 李新苍, 陈甜甜, 周俊芳
2017, 13(4): 52-58. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.04.007
为了评价养殖水环境中氨氮(NH4-N)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害性,开展了NH4-N胁迫对凡纳滨对虾感染白斑综合征病毒(WSSV)后的死亡率、WSSV增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响的实验。在NH4-N胁迫质量浓度为15.6 mg · L-1,分别注射2×105和2×106个WSSV粒子,结果显示,NH4-N胁迫下注射2×105个WSSV粒子的凡纳滨对虾第144小时死亡率达到53.3%,显著高于无胁迫组(40.0%)。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,NH4-N胁迫下凡纳滨对虾鳃组织内WSSV的增殖加快。此外,免疫相关酶活性结果显示,NH4-N浓度突变会促使对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性短暂升高后持续降低。由此可见,NH4-N胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内的增殖,导致更高死亡率,这可能是因为胁迫造成了对虾免疫相关酶活性降低和抗病原感染能力下降。
关键词: 凡纳滨对虾, 白斑综合征病毒(WSSV), 氨氮胁迫, 致病性
梭子蟹肌孢虫SYBR Green I实时定量PCR检测方法的建立与应用
陈甜甜, 房文红, 王元, 李新苍, 赵姝, 周俊芳
2017, 13(6): 22-29. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.06.003
梭子蟹肌孢虫(Ameson portunus)是感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green I实时定量PCR检测方法。结果显示:该方法扩增效率为101.45%,检测灵敏度下限可达2.0×101 拷贝·μL-1,特异性、组内重复性和组间重复性均好。利用该荧光定量PCR方法对一批来自“牙膏病”流行区的养殖三疣梭子蟹样品进行检测,梭子蟹肌孢虫检出率为82.35%。检测结果显示,活蟹的每毫克肌肉平均带虫量大幅低于死蟹,表明该地区梭子蟹的死亡与肌孢虫的感染密切相关,而且,当梭子蟹肌孢虫载量达到1.0×109 拷贝·mg-1时三疣梭子蟹存在暴发疾病甚至死亡的风险。另外,通过对比检测发现,梭子蟹肌孢虫套式PCR方法对这批样品的检出率为64.71%,表明该研究建立的荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度。
关键词: 梭子蟹肌孢虫, 三疣梭子蟹, 实时定量PCR方法, SYBR Green I
副溶血弧菌养殖对虾分离株耐药性及耐药基因分析
魏文娟, 赵姝, 王元, 周俊芳, 李新苍, 房文红
2020, 16(1): 9-16. doi: 10.12131/20190165
文章采用琼脂稀释法检测从养殖患病对虾中分离的36株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对16种药物的耐药性,并用PCR法检测喹诺酮类耐药基因qnrAqnrBqnrSqnrVC,酰胺醇类耐药基因catoptrAfloRcfr,四环霉素类耐药基因tetAtetBtetM,磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3,氨基糖苷类耐药基因strAstrBaadAaacA,利福霉素类耐药基因arr,β-内酰胺类耐药基因blaCARB和大环内酯类耐药基因erm的携带状况,分析其耐药表型和基因型之间的相关性。结果显示,36株副溶血弧菌对β-内酰胺类药物氨苄西林耐药率最高(88.9%),其次为磺胺类药物磺胺甲噁唑(66.7%),硫酸新霉素、庆大霉素、头孢曲松和美罗培南呈现100%敏感。多重耐药副溶血弧菌比例高达61.1% (22/36),其中1株对6类抗菌药耐药。喹诺酮类耐药基因qnrVC检出率最高达72.2% (26/36);其次为氨基糖苷类耐药基因srtB,检出率58.3% (21/36);大环内酯类、利福霉素类耐药基因均未检测到。耐药基因检出率与耐药表型没有表现出一一对应的关系,提示副溶血弧菌耐药的复杂性。
关键词: 副溶血弧菌, 耐药性, 琼脂稀释法, 多重耐药, 耐药基因