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斑节对虾Toll9受体基因免疫功能的研究与表达分析
刘倩, 江世贵, 邱丽华, 黄建华, 周发林, 杨其彬, 姜松, 杨丽诗
2017, 13(5): 63-71. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.05.009
Toll受体蛋白(Toll receptors)是一类重要的模式识别受体, 在无脊椎动物先天性免疫系统中发挥重要作用。文章对斑节对虾(Penaeus monodon)新型Toll9受体基因(PmToll9)进行了研究:以人源胚胎肾细胞(HEK293T)成功构建体外细胞免疫模型, 通过免疫印迹方法证实PmToll9重组真核蛋白可在HEK293T中成功表达。双荧光素酶报告系统检测发现在200 ng转染浓度处PmToll9对NF-κB报告基因的激活效果显著。qRT-PCR数据证明PmToll9成功激活HEK293T细胞Toll-like receptor(TLR)信号通路, 促进通路下游髓样分化因子(MyD88)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素(IL-10)的上调表达, 同时酶联免疫吸附测定结果证明PmToll9可促进TNF-α蛋白表达水平显著上调。斑节对虾体内细菌刺激实验结果显示无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)可激活PmToll9在肝胰腺、肠、淋巴和鳃中的表达, 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)可显著抑制PmToll9在肝胰腺中的表达。提示无乳链球菌可通过PmToll9激活Toll信号通路, 引起机体免疫防御反应, 而哈维氏弧菌对此过程具有一定的抑制作用。
关键词: 斑节对虾, Toll受体蛋白, 细胞免疫模型, TLR信号通路, 微生物刺激, 先天性免疫