以密斑刺鲀 (Diodon hystrix) 为研究对象，利用RNA-seq技术进行转录组测序及序列组装，最终获得221 762条Unigene序列，N50为2 240 nt，GC含量为46.20 %。利用MISA软件从该转录组数据中搜索到106 221个符合条件的SSR位点，分布于62 451条Unigene中，发生频率为28.16%。优势重复单元为单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸，发生频率分别为48.99%、32.57%和14.72%，其中单核苷酸重复单元中以A/T为主，占总SSR位点数的46.21%，二和三核苷酸重复单元分别以AC/GT和AGG/CCT为主，占比分别为21.90%和2.70%。选取SSR长度大于等于20 bp的位点设计了17 563个位点的引物，随机挑选160对位点引物进行扩增鉴定，筛选到95对有效扩增引物，占比为59.38%。通过多态性验证，最终获得30对稳定的、可重复性的多态性引物 (占有效扩增引物的31.58%)，其中有15对引物表现出高多态性 (PIC>0.5)，这些高多态性引物具有评估密斑刺鲀群体多样性的潜力。结果表明，密斑刺鲀转录组数据可作为开发稳定的SSR标记的有效来源，该实验所开发的多态性SSR位点为进一步研究密斑刺鲀的遗传图谱和遗传多样性奠定了基础。