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哈维弧菌rbsB基因的克隆与表达
贝蕾, 苏友禄, 赵超, 徐力文, 刘广锋, 王雨, 郭志勋, 冯娟
2018, 14(2): 75-82. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2018.02.010
哈维弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼养殖中一种重要的病原菌。该研究根据已知rbsB (核糖体结合蛋白)基因序列设计引物,扩增得到哈维弧菌354 (V.harveyi 354) rbsB基因的全序列(GenBank序列号MF797015),预测该序列可编码292个氨基酸,分子量为30.7 kD,理论等电点为5.05,亲水性系数为0.043,为疏水性蛋白。根据RbsB氨基酸构建的系统进化树可以发现哈维弧菌RbsB蛋白和欧文弧菌(V.owensii CAIM 1854)的关系最近。构建了pGEX-4t-1-rbsB重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)中,得到的重组蛋白的相对分子量约59 kD,在37 ℃、IPTG浓度为0.6 mmol·L–1诱导8 h时表达量最高。
关键词: 哈维弧菌, rbsB基因, 全长克隆, 原核表达
溶藻弧菌ZJ-T小RNA srvg17985缺失突变株的构建及该小RNA功能的初步分析
邓益琴, 陈偿, 苏友禄, 程长洪, 马红玲, 郭志勋, 冯娟
2019, 15(1): 42-53. doi: 10.12131/20180127
利用同源重组技术构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) ZJ-T小RNA srvg17985的缺失突变株,并比较研究了野生株和srvg17985突变株在LBS中的生长特性、运动性、胞外蛋白酶分泌、对铁的吸收利用、对抗生素的抗性以及生长代谢等生物学特性。结果表明,小RNA srvg17985缺失后不影响溶藻弧菌在LBS中的生长、运动性、胞外蛋白酶分泌、对铁的吸收利用、对抗生素的抗性以及对测定的多数碳源、氮源的代谢;但srvg17985突变株对昆布多糖(laminarin)、果胶(pectin)以及二羟基丙酮(dihydroxyacetone)的利用增强,并转变为可利用丙氨酸-天冬氨酸(Ala-Asp)作为单一氮源。
关键词: 溶藻弧菌, 小RNA srvg17985, 缺失突变株, 功能分析
诺卡氏菌mce1A基因的克隆及重组表达
高芳, 许海东, 徐力文, 苏友禄, 郭志勋, 蒋魁, 冯娟
2017, 13(1): 94-103. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.01.012
诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是近年来海淡水养殖鱼类频发慢性传染病的病原菌。该研究通过引物扩增得到全长1 254 bp、编码417个氨基酸的诺卡氏菌毒力因子mce1A基因的全序列。该基因编码蛋白质的分子量约为43.98 kD,理论等电点5.14,含有161个疏水性氨基酸,疏水性平均值为0.044,为疏水性蛋白,具有α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲3种结构。经预测,Mce1A有MCE、DUF3407区域、OM_asym_MlaD、Mtu_fam_mce、MlaD 5个结构域,彼此交叠,含有公共区域。根据Mce1A氨基酸构建的系统进化树可以发现诺卡氏菌和新星诺卡氏菌的亲缘关系最近。构建pET32a-mce1A重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21中,得到的重组蛋白的相对分子量约63 kD。温度、IPTG浓度对重组蛋白表达量没有影响。该研究为进一步研究Mce1A的致病机制奠定了基础。
关键词: 诺卡氏菌','');">诺卡氏菌, mce1A基因, 原核表达
自然感染无乳链球菌罗非鱼的比较病理学及毒力基因谱分析
谢云丹, 冯娟, 刘婵, 邓益琴, 王江勇, 苏友禄
2019, 15(2): 47-57. doi: 10.12131/20180185
在自然感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的罗非鱼(Oreochromis niloticus)成鱼、稚鱼和自然携带无乳链球菌的罗非鱼体内分别获得14株、4株和2株无乳链球菌。临床和组织病理学分析显示,罗非鱼成鱼出现无规则游动,脑、眼眶、鳃和鳍条充血,眼球突出、白浊,内脏器官肿大、充血,以肾小管玻璃样变性、脑膜炎和心外膜炎等组织病理学变化为特征;罗非鱼稚鱼体表无明显症状,但部分内脏器官呈现肿大、充血现象,以脾脏血管区出血、肾小管上皮细胞变性、脑组织炎症反应较轻为其主要组织病理学特征。此外,罗非鱼胃固有层内及稚鱼肝脏组织中有大量的嗜酸性粒细胞浸润,可观察到无乳链球菌在成鱼的脑、心脏以及稚鱼肝脏中增殖;自然携带无乳链球菌的罗非鱼临床症状和组织学病变均不明显。PCR检测发现,各无乳链球菌毒力基因谱相同,但自然感染无乳链球菌的罗非鱼成鱼、稚鱼和自然携带无乳链球菌的罗非鱼的病理学损伤差异显著。
关键词: 罗非鱼, 无乳链球菌, 比较病理学, 自然感染, 毒力基因谱
番石榴叶水提取物对拟穴青蟹免疫相关酶活力的影响
彭军辉, 程长洪, 冯娟, 谢佳伟, 马红玲, 郭志勋
2018, 14(3): 65-72. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2018.03.008
采用静水法研究不同浓度番石榴水提取物(guava leaf water-extract,GLWE)对带毒拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的成活率及在GLWE质量浓度分别为0 (C0,对照组)、10 mg·L–1(C10组)、20 mg·L–1(C20组)、40 mg·L–1(C40组)、80 mg·L–1(C80组),用药时间分别为0 h、12 h、24 h、48 h、72 h的条件下对其血清中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酚氧化酶(PO)和一氧化氮合成酶(TNOS、iNOS)活力的影响,并初步探究GLWE的适宜用药浓度范围。结果表明,实验15 d,各处理组青蟹的成活率随着GLWE浓度的增高呈先升后降的现象且与C0组差异显著(P<0.05),其中C40组的成活率最高(55.56%),C0组的成活率最低(22.22%)。用药12 h,C80组的AKP、CAT、PO、iNOS活力均显著高于C0组(P<0.05);用药24 h,C20和C40组的SOD、LZM及C40组的ACP、CAT和PO活力均显著高于C0组(P<0.05);用药48 h,C10、C20组的CAT活力及C40、C80组的TNOS和iNOS活力均显著高于C0组(P<0.05);用药72 h,各处理组的AKP活力均显著高于C0组(P<0.05),但C40、C80组的ACP和CAT活力显著低于C0组(P<0.05)。该条件下,10~40 mg·L–1的GLWE可在48 h内显著促进拟穴青蟹血清AKP、ACP、SOD、CAT、PO、NOS、LZM活力的升高,其中以20~40 mg·L–1GLWE的效果最优。
关键词: 番石榴叶, 拟穴青蟹, 免疫相关酶, 成活率
卵形鲳鲹TfTNFαC-Lys的组织分布及对美人鱼发光杆菌感染的响应
宋沙沙, 马红玲, 冯娟, 苏友禄, 程长洪, 郭志勋
2017, 13(2): 77-84. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.02.010
研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中免疫相关因子转铁蛋白(Tf)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、C-型溶菌酶(C-Lys)的组织表达分布,并分析了这3种基因在人工感染美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp. piscicida )后在卵形鲳鲹肾脏中的表达变化,探讨其对美人鱼发光杆菌感染的反应。结果显示, 感染后第48小时卵形鲳鲹累计死亡率最高(76.4%);卵形鲳鲹肾脏中细菌数量从第3~第96小时一直处于下降趋势,从1.07×106 CFU·g-1下降到1.29×103 CFU·g-1。健康卵形鲳鲹中TfTNFα在肝脏中表达量最高,C-Lys在头肾中表达量最高。美人鱼发光杆菌感染后卵形鲳鲹肾脏中Tf表达量在第3~第12小时实验组高于对照组,其中第6小时的表达量最高,是对照组的17.99倍;TNFα在感染后的第3、第6、第24小时实验组的表达量高于对照组,第24小时组相对于对照组的表达量最高,是对照组的6.05倍。C-Lys在感染后感染组表达量均低于对照组。以上结果表明,美人鱼发光杆菌感染能促进卵形鲳鲹肾脏组织中TfTNFα的表达,而抑制C-Lys的表达。
关键词: 卵形鲳鲹, 转铁蛋白, 肿瘤坏死因子α, C-型溶菌酶, 基因表达