留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
马艳平, 郝乐, 梁志凌, 马江耀, 李盈, 柯浩, 刘振兴, 曹俊明
2018, 14(3): 113-119. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2018.03.014
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将pORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短 ORF65 (truncated ORF65) 插入pET32a (+)载体,构建了pET32a-trunORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、BepiPred 1.0软件预测了pORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入pET32a (+)载体,构建了pET32a-modORF65。重组质粒分别转入BL21 (DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,pET32a-modORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 kD。此外,利用rProtein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清IgM,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤IgM多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的pORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤IgM多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测pEGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。
关键词: 鲤疱疹病毒3型, ORF65, B细胞表位融合表达, rProtein G亲和层析, ELISA, 抗体特异性检测
基于鲤疱疹病毒3型ORF65基因的DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护研究
李盈, 刘振兴, 马艳平, 曹俊明, 马江耀, 郝乐, 梁志凌, 柯浩, 李玉谷
2019, 15(4): 122-126. doi: 10.12131/20190033
为开发针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3) [ 又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)] 的DNA疫苗,该研究将CyHV-3 ORF65插入pEGFP-N1,构建pEGFP-ORF65重组质粒,通过转染实验与活体成像实验证实pORF65-EGFP融合蛋白可以在建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)体外、体内表达;重组质粒按照3 μg·尾−1的剂量尾柄肌肉注射免疫10 g左右的建鲤鱼苗,免疫3次,ELISA检测表明pEGFP-ORF65免疫后可以显著提高血清特异性抗体水平;攻毒实验显示,CyHV-3攻毒21 d后,PBS组、pEGFP-N1组和pEGFP-ORF65组的建鲤成活率分别为25%、30%和90%,攻毒建鲤的成活率显著提高(P<0.01)。该研究为ORF65作为DNA疫苗靶基因应用于CyHV-3的防控提供了依据。
关键词: 鲤疱疹病毒3型, 锦鲤疱疹病毒, ORF65, DNA疫苗, ELISA