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方斑东风螺急性死亡症的病原病理研究
王江勇, 王瑞旋, 苏友禄, 吴开畅, 郭志勋, 姜敬哲, 刘广锋, 赵旺
2013, 9(5): 93-99. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.05.015
对海南发生的方斑东风螺(Babylonia areolata)急性死亡症进行了病原分离纯化、人工感染试验,以及病原16S rDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌(Vibrio harveyi);药敏试验结果显示,该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感,而对青霉素表现为耐药;组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。
关键词: 东风螺, 急性死亡症, 哈维弧菌, 组织病理
2012年~2014年南海海水养殖鱼类病原菌哈维弧菌分离株的耐药性分析
蒋魁, 徐力文, 苏友禄, 王雨, 郭志勋, 许海东, 高芳, 冯娟
2016, 12(6): 99-107. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2016.06.013
哈维弧菌(Vibrio harveyi)是海水养殖鱼类主要的病原菌,给养殖业带来了巨大的损失。该研究采用K-B法对南海地区沿岸养殖鱼类90株哈维弧菌分离株进行抗生素耐药性分析,通过系统聚类法以平方Euclidean距离来分析菌株间的耐药性同类关系,探讨哈维弧菌耐药性的时空分布和耐药谱的多样性。结果显示,90株哈维弧菌共有耐药谱26种,谱型丰富度为28.9%。其中,多重耐药谱(耐3类及以上抗生素)21种,包含菌株共35株,占总菌株数的38.9%,谱型丰富度为80.8%。从时间分布上看,2012年、2013年和2014年分别具有10、18和8种耐药谱型;从地区分布上看,海南、广东和广西3个地区分别包含17、13和2种耐药谱型,时间与地区的耐药谱型差异明显。90株哈维弧菌样本聚类分析得到GroupⅠ、GroupⅡ和其他组群,分别含有11、12和4种耐药谱,耐药谱型率分别为16.9%、57.1%和100%,而GroupⅠ和GroupⅡ组群进而分为5个亚群i~v。结果表明,在广东、海南和广西地区养殖鱼类中所分离到的哈维弧菌耐药谱具有复杂多样性特征,随着时间年份的递增,哈维弧菌耐药谱种类也发生着更新变化,耐药谱不断扩大延伸。
关键词: 哈维弧菌, 耐药谱, 聚类分析, 海水鱼类
蛋氨酸铜和硫酸铜在凡纳对虾饲料中的应用效果比较
郭志勋, 陈毕生, 徐力文, 郑石轩, 湛波, 刘立鹤, 程开敏
2005, 1(2): 56-60.
通过在饲料中分别加入不同浓度(铜元素的添加浓度分别为0、7.5、15、30、45 mgkg-1饲料)的硫酸铜和蛋氨酸铜,比较了硫酸铜和蛋氨酸铜对凡纳对虾生长、血液免疫因子及虾体铜的影响。添加蛋氨酸铜的各实验组生长速度同对照组之间没有显著差异;而添加硫酸铜的各组,只有铜添加量为30 mgkg-1饲料的试验组生长速度显著高于对照组(P<0.05),其它组同对照组之间差异不显著;成活率各组间无显著差异。除了铜添加量为15 mgkg-1饲料的试验组,各试验组对虾血清的酚氧化酶(PO)活力都高于对照组,其中当铜添加量为30 mgkg-1时最强,在此时蛋氨酸铜添加组的PO活力高于硫酸铜;随着铜添加浓度的提高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强,在添加量达到30 mgkg-1饲料时达到最大,此时硫酸铜组和蛋氨酸铜组间无差异,都为507。对虾肌肉中铜的含量各组间无显著差异,为(4.071.80)mgkg-1,个体间差异非常大;肝胰脏中铜的最高含量为210.36 mgkg-1,最低为33.78 mgkg-1(空白对照组),明显高于肌肉中的含量。结果表明,在试验条件下,同硫酸铜相比,蛋氨酸铜没有显著的促生长效果,对肌肉、肝铜含量以及SOD活性没有显著影响。
关键词: 蛋氨酸铜, 硫酸铜, 凡纳对虾, 生长, 免疫因子
石斑鱼蛙病毒在鞍带石斑鱼中的组织分布
彭超, 马红玲, 郭志勋, 冯娟, 苏友禄, 温为庚, 邱丽华
2015, 11(3): 88-94. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.03.014
石斑鱼蛙病毒能够感染多种石斑鱼并造成严重死亡。研究利用原位杂交和荧光定量PCR技术对蛙病毒三亚株GIV-R-SY1301在人工感染发病的鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)不同组织中的分布进行定位、定量研究。原位杂交结果显示GIV-R-SY1301广泛存在于发病鱼的多个组织中,脾脏和肾脏中杂交信号最强,其次是肠道、胃、鳃、肝,心脏中也有少量的杂交信号,而脑和眼组织中没有杂交信号存在。荧光定量PCR检测结果显示GIV-R-SY1301在不同组织中的病毒含量为4.5104~6.85107拷贝g-1 DNA,其中脾脏、心脏和肾脏中最多。组织原位杂交和荧光定量PCR结果基本一致。
关键词: 蛙虹彩病毒, 鞍带石斑鱼, 原位杂交, 荧光定量PCR
有益微生物应用对海水对虾养殖中细菌数量动态变化的影响
黄洪辉, 林钦, 郭志勋, 李卓佳, 吕晓瑜, 杨美兰, 贾晓平
2007, 3(3): 14-19.
2001年5~7月,在深圳东海岸水产公司南澳半封闭式斑节对虾Penaeus monodom精养基地,进行了有益微生物的应用对虾塘总异养细菌和弧菌数量影响的调查研究。结果表明,对虾养成过程中,施用有益微生物的实验组虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量明显较未施用的对照组虾塘低,但各虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量的变化特征基本相同,即在养殖前期,虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量均较稳定,并处于相对较低的水平;而在养殖中、后期,总异养细菌和弧菌数量均急剧升高,尤以对照组虾塘的升幅最大,其弧菌数量甚至超过100102CFUmL-1的对虾发病之弧菌数量临界值。实验组与对照组虾塘中表层沉积物中,总异养细菌和弧菌数量差异不大,总异养细菌和弧菌数量变化特征也基本相同,但实验组与对照组之间有所差异,其中实验组表现为双峰型的变化特征,峰值出现在养殖前期或中期和养殖将结束时;对照组则呈单峰型变化,峰值均出现在养殖中期。有益微生物的应用对虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量的抑制效果较对沉积环境中的效果明显。
关键词: 海水养虾塘, 有益微生物, 细菌动态
豹纹鳃棘鲈尾部溃烂症病原菌的鉴定与药敏试验
辜良斌, 徐力文, 冯娟, 苏友禄, 刘广峰, 郭志勋
2015, 11(4): 71-80. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.04.011
2011年海南会文烟堆某豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)养殖场突发大量死亡,病鱼体色发白,尾鳍溃烂。从病鱼病灶处分离出1株菌X11YD05,回归感染证实为患病豹纹鳃棘鲈病原菌,对平均体质量为30.8 g的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的半数致死量(LD50)为1.67105 cfug-1。为进一步确定病原菌的分类学特征,扩增其16S rDNA、toxR、rpoD、mreB、topA和rctB等6种管家基因,构建系统发育树。结果发现,X11YD05与哈维弧菌(Vibrio harveyi)有较高同源率。结合生理生化试验,确定X11YD05为哈维弧菌。16种药敏试验表明该菌仅对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、复方新诺明等5种抗生素敏感。
关键词: 豹纹鳃棘鲈, 哈维弧菌, 烂尾症, 16S rDNA
赤点石斑鱼神经坏死病毒主衣壳重组蛋白多克隆抗体的制备
苏友禄, 郭志勋, 冯娟, 闫云锋, 喻达辉
2010, 6(6): 8-13. doi: 10.3969/j.issn.1673-2227.2010.06.002
把赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)神经坏死病毒(RGNNV)主衣壳蛋白(MCP)基因的重组表达质粒载体pRSET A-MCP转化至大肠杆菌(Estherichiacoli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示表达的重组蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在,分子量约44.5 kD。通过Ni-NTA-Agarose亲和层析柱纯化,经分析纯度达90%,之后免疫新西兰兔制备抗血清,ELISA效价达1:12 800以上。Western-blot分析结果显示,该血清与表达的重组蛋白有较强反应,说明通过原核表达的重组蛋白具良好的免疫原性。
关键词: 赤点石斑鱼神经坏死病毒, 主衣壳重组蛋白, 多克隆抗体, 免疫原性
复方中草药投喂策略对凡纳滨对虾生长、消化及非特异性免疫功能的影响
黄忠, 林黑着, 李卓佳, 郭志勋, 牛津, 黄春阳
2013, 9(5): 37-43. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.05.007
设计9组试验组,测定饲料中添加不同浓度的复方中草药以及不同的投喂策略对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、消化酶及非特异性免疫功能的影响,饲料组分别为D0、D2、D4(连续投喂对照组、0.2%中草药组、0.4%中草药组)、1D2-1D0、1D4-1D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-1周对照饲料)、1D2-2D0、1D4-2D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-2周对照饲料)、1D2-3D0、1D4-3D0(1周0.2%、0.4%中草药饲料-3周对照饲料)。结果表明,D2组和1D4-2D0组的增重率显著高于D0组;D2组饵料系数显著低于D0组;D4组的成活率显著低于D0组和1D4-1D0组;D0组的肝胰腺蛋白酶活性和血淋巴总蛋白(TP)质量浓度低于其他各组,而血淋巴谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量显著高于其他组;超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶活性(AKP)以1D4-1D0组最高,过氧化物酶(POD)活性则以D0组最高。因此,连续投喂0.2%中草药饲料以及1周0.4%中草药饲料-2周对照饲料的策略可以使凡纳滨对虾获得较好的生长性能和免疫机能。
关键词: 凡纳滨对虾, 中草药, 生长, 生化指标
WSSV+斑节对虾的血清免疫相关酶对人工感染WSSV粗提液的反应
张涛, 黄建华, 温为庚, 杨其彬, 郭志勋
2013, 9(1): 35-42. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.01.006
用含3103 拷贝mL-1、6102 拷贝mL-1和2102 拷贝mL-1的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)粗提液和PBS液对照注射感染病毒携带量约1105 拷贝g-1的斑节对虾(Penaeus monodon),分别于第15分钟、第30 分钟、第1小时、第3小时、第6小时、第12小时、第24小时、第48小时和第72 小时取样,研究了WSSV感染对斑节对虾血清内酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、酚氧化酶(phenoloxidase,PO)、过氧化物酶(peroxidase,POD)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的影响。结果表明,在3种感染浓度下ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势,其中SOD活性后期水平显著高于初期;PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降最后上升的趋势,但PO后期活性水平与初期相当,而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系,除ACP外其余4种酶的活性变化均以6102 拷贝mL-1浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。
关键词: 斑节对虾, 白斑综合征病毒, 潜伏感染, 再感染, 免疫反应
苍术和番石榴的不同炮制方法及部位对水产病原菌抑制效果的影响
王瑞旋, 方伟彬, 郭志勋, 王江勇
2013, 9(5): 132-136. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.05.020
采用微量稀释法,以溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、哈维弧菌(V.harveyi)、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp piscicida)、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)和摩氏摩根氏菌(Morganella fulton)和创伤弧菌(V.vulnificus)6种病原菌共7株为受试菌,研究苍术(Atractylodes lancea)不同炮制品和番石榴(Psidium guajava)不同部位的抑菌作用,并进一步测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,番石榴叶和枝果部位以及苍术不同炮制品对溶珊瑚弧菌、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种和哈维弧菌抑菌效果较明显,MIC和MBC分别为10-3 gmL-1和10-1 gmL-1,抑菌效果由高至低依次为番石榴叶番石榴果番石榴枝,麸炒苍术盐炙苍术苍术醋炙苍术。
关键词: 番石榴, 苍术, 水产病原菌
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