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2015年  11卷  第6期

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研究论文
基于高通量测序分析的大鹏澳海域沉积物古菌群落结构初步研究
李旭光, 齐占会, 林琳, 张喆, 黄洪辉
2015, 11(6): 1-8. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.001
摘要:
于2014年夏季(8月)利用柱状采泥器采集了大亚湾大鹏澳海域养殖区、对照区5 cm层和30 cm层沉积物样品,并通过高通量测序方法对沉积物样品古细菌生物群落结构进行了分析。结果显示,大鹏澳沉积物深层样品中古菌占原核生物的比例高于表层。5 cm层和30 cm层沉积物古菌群落优势种存在明显差异,分别为广古菌门(Euryarchaeota)的热原体纲(Thermoplasmata)和泉古菌门(Crenarchaeota)的MCG纲(Miscellaneous Crenarchaeotic Group)。总体上,泉古菌门相对丰度高于广古菌门。养殖区古菌优势种的数量显著高于非养殖区。养殖区表层和深层沉积物之间古菌群落物种组成和数量的差异明显大于非养殖区。古菌群落的空间差异一定程度上反映了大鹏澳沉积物古菌群落受到了养殖活动的影响,但影响的机制还需要深入研究。
海南近岸海域夏初角毛藻的种类多样性及其水平分布
庞勇, 聂瑞, 王道儒, 黄强
2015, 11(6): 9-18. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.002
摘要:
根据2011年5月28日至6月3日在海南近岸海域采集的浮游植物样品的鉴定结果,分析了角毛藻(Chaetoceros)的种类多样性、优势种构成、细胞数量和水平分布。结果显示,海南近岸海域共发现角毛藻28种(含变种、变型),其中西北部海域25种,东部海域22种,南部海域21种;暹罗角毛藻(C.iamense)、拟旋链角毛藻(C.pseudocurvisetus)、并基角毛藻(C.decipiens)和劳氏角毛藻(C.lorenzianus)为主要优势种,另外,桥联角毛藻(C.anastomosans)、嘴状角毛藻(C.rostratus)、密链角毛藻(C.densus)、窄隙角毛藻(C.affinis)和短叉角毛藻(C.messanensis)的数量也较多。东部海域角毛藻细胞数量最高,平均为(162.70415.16)104 个m-3;西北部海域角毛藻数量略低于东部海域,平均为(102.81206.26)104 个m-3;南部海域角毛藻数量最低,平均为(70.43142.09)104 个m-3,角毛藻细胞数量平面分布呈现由近岸向外海递减的趋势,与环境因子之间不存在显著相关关系。
混养罗非鱼对凡纳滨对虾养殖围隔中悬浮颗粒物和弧菌数量的影响
粟丽, 朱长波, 陈素文
2015, 11(6): 19-26. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.003
摘要:
于2011年6月~8月在广东省茂名市电白县对虾养殖场选取一口池塘,设置24个围隔进行凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)与吉丽罗非鱼(GILI tilapia)围隔混养实验。实验设6个处理组(A、B、C、D、E和F),每组4个平行,单个围隔为一平行,每个围隔放养凡纳滨对虾苗3000尾,其中实验组A、B、C、D和E组每围隔在放养虾苗28 d之后分别混养罗非鱼(平均体质量200 g)4、8、12、18和24尾,对照组F不放养罗非鱼。实验过程中跟踪调查了养殖水体中悬浮颗粒物和弧菌数量变动情况,结果显示:1)养殖前期实验组与对照组的总颗粒悬浮物(TPM)、颗粒有机物(POM)、颗粒无机物(PIM)含量以及POM/TPM、PIM/TPM均较接近,养殖中后期实验组的TPM、PIM含量及POM/TPM均高于对照组,而实验组的PIM/TPM则低于对照组,实验组中C、D和E组PIM含量百分比较A和B组高;2)养殖后期各围隔中弧菌数量普遍高于养殖前期,为(1.01~152.33)103 CFUmL-1,均值为(15.0824.50)103CFUmL-1,实验组中弧菌数量A组最多,B组次之,而C和D组相对较少。结果表明,对虾-罗非鱼混养模式下,放养大规格罗非鱼种,虾、鱼数量比在250:1可以有效降低虾池有机质积累,改善虾池养殖环境,而且明显抑制弧菌的过度增殖,提高养殖效益。
基于脂肪酸标志法的不同海区合浦珠母贝的摄食差异研究
沈亚男, 张博, 姜松, 刘宝锁, 黄桂菊, 喻达辉
2015, 11(6): 27-33. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.004
摘要:
运用脂肪酸标志法分析了海南新村和黎安、广东徐闻和雷州、广西白龙和营盘6个海区养殖的合浦珠母贝(Pinctada fucata)的食物组成。结果表明,硅藻、鞭毛藻类或原生动物、大型绿藻或陆生植物颗粒、褐藻类及细菌等都可能是合浦珠母贝的食物来源。其中新村的食物组成中大型绿藻或陆生植物脂肪酸标志物[C18:2(n-6)+C18:3(n-3)]相对质量分数高达4.64%,较其他地点差异显著。黎安的细菌脂肪酸标志物[C18:1(n-7)/C18:1(n-9)为1.29,Odd br FAs达4.21%]优于其他地区。雷州的硅藻脂肪酸标志物[C16:1(n-7)/C16:0=1.06和DHA/EPA=1.13]显著高于其他地区。白龙地区贝体中褐藻类脂肪酸标志物[C20:4(n-6)为9.08%]较其他地区差异显著。新村、黎安、徐闻、白龙和营盘的鞭毛藻类或原生动物脂肪酸标志物(DHA)均高于雷州,并且差异显著。结果表明,合浦珠母贝饵料组成与其栖息环境息息相关。
罗非鱼无乳链球菌强毒株基因组表达文库的构建及鉴定
刘志刚, 可小丽, 卢迈新, 方伟, 王淼, 朱华平, 高风英, 曹建萌
2015, 11(6): 34-40. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.005
摘要:
为了筛选罗非鱼(Oreochromis niloticus)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)在鱼体内特异诱导表达基因,该研究构建了罗非鱼无乳链球菌强毒株Hod-1的基因组表达文库。采用Sau3AⅠ对无乳链球菌菌株Hod-1基因组DNA进行不完全酶切,回收大小为0.5~2.0 kb的DNA片段,并与经BamHⅠ单酶切且去磷酸化的pET-28 a/b/c表达载体连接,转化表达宿主菌BL21(DE3)。结果显示,所构建的无乳链球菌菌株Hod-1基因组表达文库含1.024105个克隆,远大于覆盖无乳链球菌全基因组所需的最小库容量(45 579个)。PCR检测结果显示重组子中外源片段的插入率为94%,插入片段大小为0.5~2.0 kb,且分布均匀,测序结果显示插入序列与GenBank中无乳链球菌基因组序列同源性高达99%以上。结果表明该研究成功构建了罗非鱼无乳链球菌的基因组表达文库,该文库可用于无乳链球菌在罗非鱼体内诱导表达基因的筛选。
斑节对虾泛素结合酶PmUbc基因的克隆及表达分析
傅明骏, 赵超, 周发林, 邱丽华, 江世贵
2015, 11(6): 41-48. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.006
摘要:
以从斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组数据中筛选的泛素结合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme, PmUbc)基因片段为基础,利用SMART-RACE技术获得PmUbc的 cDNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。PmUbc基因cDNA全长598 bp,包括编码154个氨基酸的465 bp的开放阅读框(ORF)、17 bp的5非编码区(UTR)和116 bp的3UTR。Blast分析显示,PmUbc与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等物种的Ubc具有较高的同源性。利用实时荧光定量PCR技术研究了PmUbc mRNA在不同组织和卵巢发育各时期的相对表达量和变化模式。结果表明,PmUbc mRNA在斑节对虾的脑、胸神经、心脏、肝胰腺、卵巢、肌肉、血淋巴中均有表达;PmUbc基因在卵巢发育Ⅲ期表达量最高,其次是Ⅰ和Ⅳ期。结果显示,PmUbc基因在斑节对虾卵巢发育过程中可能具有重要的作用,该实验结果为斑节对虾卵巢发育调控的分子机制研究提供一定的理论依据。
温度和盐度对华贵栉孔扇贝抗氧化酶活性的联合效应研究
钱佳慧, 栗志民, 申玉春, 刘志刚, 张武财
2015, 11(6): 49-57. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.007
摘要:
采用中心复合设计(CCD)和响应曲面分析法(RSM),研究了温度(19~31 ℃)和盐度(22~38)对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)3种抗氧化酶活性的联合效应。结果显示,温度的一次、二次效应对SOD、CAT和GSH-PX活性的影响显著(P0.05)。盐度的一次效应对SOD和CAT活性的影响显著(P0.05),但对GSH-PX活性影响不显著(P0.05),盐度的二次效应对SOD、CAT和GSH-PX活性的影响均显著(P0.05)。温度和盐度的互作效应对SOD、CAT活性的影响显著(P0.05),但对GSH-PX活性的影响不显著(P0.05)。采用响应曲面法建立模型方程决定系数分别为0.950 1、0.981 5和0.967 9,表明建立的模型拟合度极高,可用于预测华贵栉孔扇贝3种抗氧化酶活性的变化。模型优化和验证试验表明,26.4 ℃和盐度27.7时,SOD、CAT和GSH-PX活性达最大值,分别为33.02 Umg-1、35.73 Umg-1和27.94 Umg-1,满意度为0.989。
高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物的优化研究
赵东豪, 黎智广, 王旭峰, 王强, 李永贤, 黄珂, 李刘冬
2015, 11(6): 58-64. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.008
摘要:
研究了利用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测水产品中残留的5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮(AMOZ),氨基脲(SEM)、1-氨基-2-内酰脲(AHD)和3-氨基-2-噁唑烷基酮(AOZ)等4种硝基呋喃类代谢物,优化了前处理方法及液相色谱条件。硝基呋喃类代谢物经衍生化后,调节样品pH至7.0~7.5,加入8 mL乙酸乙酯,离心并转移上清液,氮气吹干后,用乙腈-0.1%的甲酸水(5/95,V/V)溶液定容,4 ℃高速离心后上机测定。采用梯度洗脱法,4种代谢物在C18柱中分离良好。该法有效地提高硝基呋喃类代谢物的检测效率,且检测结果准确,适用于批量水产品的检测。
0#柴油水溶性成分对菲律宾蛤仔抗氧化防御系统的影响
张林宝, 孙伟, 黄南建, 张喆, 陈海刚, 马胜伟, 蔡文贵, 贾晓平
2015, 11(6): 65-72. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.009
摘要:
选用中国目前应用最多的燃料油0#柴油为研究对象,阐明不同浓度0#柴油水溶性成分(diesel oil water-soluble fraction,DWSF)作用下菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)肝胰腺和鳃组织中几种抗氧化酶活性的响应特征。结果表明,0#柴油水溶性成分作用下,菲律宾蛤仔过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化物酶(POD)活性在暴露的某些时段被显著诱导或抑制,总体而言鳃组织中抗氧化酶活性的响应比肝胰腺敏感。4种抗氧化酶中,CAT、SOD和POD对0#柴油的响应较为敏感,尤其是鳃组织中POD的活性最高可被显著诱导至对照组的3倍。整合生物标志物(IBR)分析结果表明菲律宾蛤仔抗氧化防御系统对高浓度0#柴油水溶性成分的响应较为敏感。因此,0#柴油水溶性成分胁迫会对菲律宾蛤仔体内的抗氧化系统造成损伤,其活性的变化可作为指示海洋石油污染的潜在生物标志。
急性盐度胁迫对克氏双锯鱼幼鱼过氧化氢酶的影响
胡静, 吴开畅, 叶乐, 王雨
2015, 11(6): 73-78. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.010
摘要:
研究了盐度急性变化(盐度35降至30、25、20、15)对克氏双锯鱼(Amphiprion clarkii)幼鱼鳃丝和肝脏过氧化氢酶(CAT)活性及其mRNA在鳃丝中表达的影响。结果表明,盐度从35突变至15的范围内对克氏双锯鱼的成活率没有影响。低盐度处理组(30、25、20和15)肝脏、鳃丝CAT活性24 h内均呈上升趋势,且盐度变化幅度越大酶活性增强的幅度越大,第48小时后均下降,至第96小时均降至与对照组无显著差异(P0.05)。鳃丝中CAT mRNA表达量在低盐度处理下,于第6小时后表达量开始上升,第12小时上升明显,与对照组差异显著(P0.05),第96小时全部低盐处理组与对照组相比较均无显著差异(P0.05)。实验结果表明,盐度变化对克氏双锯鱼幼鱼的CAT活性存在重要的影响,所测定组织中CAT活性于第96小时均恢复至正常水平,表明克氏双锯鱼幼鱼具有较强的盐度适应能力。
虾头虾壳蛋白质酶解制备抗氧化肽的研究
张风, 夏旭, 周爱梅, 刘欣, 曹庸
2015, 11(6): 79-87. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.011
摘要:
以凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)虾头、虾壳为原料,碱法提取蛋白质后,采用不同的蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶)酶解,以抗氧化活性和水解度为指标,筛选最佳水解用酶,并对该酶的酶解条件进行优化,对优化所得酶解物的抗氧化活性进行初步研究。结果表明,风味蛋白酶为最佳水解用酶,虾头虾壳蛋白质水解制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:温度54 ℃、时间10.5 h、pH 8、加酶量8 000 Ug-1,此条件下酶解液1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为96.58%,还原力为0.77,水解度为15.62%,氧化自由基吸收能力(ORAC)为15.50 molL-1。5 mgmL-1该酶解物的DPPH自由基清除率为82.09%,相当于相同浓度维生素C(Vc)抗氧化活性的90.50%,0.5 mgmL-1时ORAC为126.16 molL-1,相当于相同浓度Vc 活性的79.73%。
伏季休渔对北部湾北部虾类捕捞的影响及评价
邹建伟, 王强哲, 林丕文, 黄俊秀
2015, 11(6): 88-93. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.012
摘要:
北部湾北部虾类资源丰富,是南海经济虾类的主要产地之一。该海域拥有虾场13个,基本分布于广西沿岸近海,虾类主要捕捞类型为桁杆拖网、刺网、笼捕和定置网。文章利用广西近海渔船的生产监测数据,评估北部湾北部虾类产量及捕捞结构,在此基础上分析伏季休渔对虾类捕捞生产的影响。2014年北部湾北部虾类产量估算为8 357 905 kg,其中桁杆拖网的产量占91.62%。伏季休渔后渔船的各项生产效益指标明显改善,经济虾类占总渔获的比例较休渔前增加40.34%,其他虾类占总渔获的比例下降28.53%。休渔显著降低北部湾北部的捕捞强度,起到恢复和养护虾类资源、优化虾类种群结构、提高捕捞生产效益的作用。建议采取打击非法渔业、休渔期间实施虾类资源增殖放流等措施,以进一步提高休渔的效能和作用,促进北部湾北部虾类捕捞可持续发展。
南海流刺网网目尺寸与主捕对象体型特征关系的初步分析
杨炳忠, 杨吝, 谭永光, 张鹏, 晏磊, 陈森
2015, 11(6): 94-99. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.013
摘要:
利用南海北部流刺网调查的相关资料对3种流刺网网目尺寸与主捕对象体型特征的关系进行了分析。结果表明,康氏马鲛(Scomberomorus commersoni)、中国鲳(Pampus chinensis)和龙头鱼(Harpodon nehereus)的体型特征为流刺网捕捞提供了有利的条件;相对体围值对应的渔获率变化曲线形状与刺网钟形选择性曲线相似;454尾主捕对象中仅1尾(占0.002%)相对体围值小于0.8;41尾相对体围值大于1.20,占0.09%;当相对体围值为1.0~1.1时,渔获率最高;白鲳刺网、龙头鱼刺网和马鲛刺网的最小网目尺寸分别为144 mm、35 mm和72 mm。建议结合选择性试验与体型特征研究,为制定南海区流刺网最小网目尺寸提供参考。
研究简报
合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化
毕晓敏, 黄桂菊, 范嗣刚, 朱文杰, 喻达辉
2015, 11(6): 100-106. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.014
摘要:
为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的cDNA,将其ORF克隆至原核表达载体pET32a构建得到重组质粒pET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白pET32a-Pearlin约为34.19 kD。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmolL-1范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmolL-1、相同培养时间(6 h)下,37 ℃表达蛋白最多;重组蛋白在pH分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白pET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融蛋白都主要以包涵体形式存在。
斑节对虾过氧化氢酶基因全长cDNA克隆及表达分析
傅明骏, 赵超, 杨其彬, 周发林, 江世贵, 邱丽华
2015, 11(6): 107-113. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.015
摘要:
过氧化氢酶(catalase,CAT)是一种重要的抗氧化酶,防止过氧化氢对机体的氧化应激。该研究以斑节对虾( Penaeus monodon) 肝胰腺转录组中筛选获得的CAT基因片段为基础,利用RACE 技术获得斑节对虾CAT基因(PmCAT)cDNA全长。该基因cDNA全长为1 909 bp,开放阅读框为1 563bp,编码520个氨基酸。PmCAT推导的氨基酸序列与其他动物氨基酸序列具有高度的一致性。实时定量PCR结果显示,PmCAT基因在斑节对虾的不同组织中均有表达,其中在鳃的表达量最高,肝胰腺和胸神经次之。在硫酸铜(CuSO4)胁迫下,PmCAT基因在肝胰腺中的表达量显著下调(P0.05),在第24和第48小时恢复正常表达量;在pH 7.0胁迫下,PmCAT表达量在第12小时升高达最大值(P0.05),然后恢复到正常水平;在pH 9.0胁迫下,PmCAT基因表达显著低于正常组(P0.05)。研究表明,PmCAT基因参与斑节对虾氧化应激和对环境毒理的适应性反应。
综述
对虾肠道微生物菌群的研究进展
张家松, 段亚飞, 张真真, 董宏标, 李卓佳
2015, 11(6): 114-119. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.016
摘要:
肠道微生物菌群结构和功能在对虾生长中具有重要作用,与对虾营养代谢、能量平衡、免疫防御和胃肠道发育等生理过程紧密相关,是维持机体肠道内环境稳定的重要因素。文章综述了对虾肠道正常菌群的营养、消化、免疫和屏障等生理功能,分析了对虾肠道菌群结构与组成的影响因素,介绍了对虾肠道菌群结构的主要研究方法,并展望了对虾肠道菌群未来的研究趋势。